胃癌细胞来源的exosomes诱导Jurkat T细胞凋亡及其机制初探

目的 研究胃癌细胞来源的exosomes对JurkatT细胞凋亡的影响,初步探讨NF-κB通路在此过程中的作用.方法 采用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心的方法从胃癌SGC7901细胞的上清液中分离出胃癌来源的exosomes.透射电子显微镜下观察exosomes形态.台盼兰拒染法检测细胞增殖能力,瑞氏-姬姆萨染色检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白的表达.结果 透射电子显微镜下观察胃癌SGC7901细胞来源的exosomes具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,它们的直径在30～100nm之问.Exosomes能抑制Jurkat T细胞增殖,并能诱导Jurkat T细胞凋亡,在此过程中伴随有p-IKK表达的下调.结论 胃癌细胞来源的exosomes能抑制Jurkat T细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB通路有关.     

大鼠骨髓源内皮祖细胞分化过程Notch信号通路活化及榄香烯干预机制的探讨

目的:观察大鼠骨髓来源内皮祖细胞分化过程中Notch信号通路的活化情况及β-榄香烯对该通路的影响.方法:大鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)的原代培养;RT-PCR法检测不同培养时间(0、4、7、10、14 d)和不同浓度β-榄香烯(0、5、10、20 μg/mL)干预的EPCs中CD133、vWF和Notch信号通路靶基因Hey-2和Hes-1的表达.结果:随着EPCs培养时间的延长,CD133表达明显减弱,vWF表达无显著变化,Notch信号通路靶基因Hey-2和Hes-1表达增加;随着β-榄香烯浓度的增加,Hey-2和Hes-1表达逐渐减弱.结论:在EPCs分化过程中,Notch信号通路发生活化;β-榄香烯对EPCs的分化和Notch信号通路的活化有明显的抑制作用,且具有浓度依赖性.推测,β-榄香烯可能会抑制EPCs分化为内皮细胞,抑制肿瘤血管生成,进而抑制肿瘤的生长和转移.     

奥沙利铂通过上调死亡受体表达增强TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究奥沙利铂对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,探讨死亡受体5(DR5)在TRAIL诱导细胞凋亡中的作用.方法:采用MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Western blot检测DR5蛋白表达.结果:100ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制,诱导不超过5%的细胞凋亡;TRAIL(100ng/ml)联合奥沙利铂(23.44μg/ml)引起明显的细胞增殖抑制和细胞凋亡(P＜0.05),TRAIL没有明显改变死亡受体5(DR5)的表达,而23.44 μg/ml奥沙利铂作用胃癌细胞24小时后,明显上调了DR5的表达.结论:奥沙利铂通过上调DR5的表达增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡.     

蟾蜍灵诱导人肺腺癌细胞凋亡作用及其机制

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵(bufalin)对人肺腺癌细胞的作用及其机制。方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;瑞氏 吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体跨膜电位;Western blot法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果 (1) 蟾蜍灵明显抑制A549细胞增殖,48h及72h的IC50分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L。(2) 蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪检测到的亚二倍体凋亡峰。(3) 蟾蜍灵可以明显降低细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)。(4) 蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3。结论 线粒体途径是蟾蜍灵诱导肺腺癌A549细胞凋亡的主要通路之一。     

转移性结直肠癌三线治疗的研究进展*

理想的三线治疗方案应该能够缓解肿瘤的相关症状,提高患者的生活质量。目前转移性结直肠癌的三线治疗尚无标准方案,但已引起关注,本文对相关Ⅱ、Ⅲ期临床研究进行简要评述。     

局部复发直肠癌综合治疗的时机及合理选择

随着原发性直肠癌治疗手段的不断改进,尤其是全直肠系膜切除和新辅助治疗的出现,直肠癌局部复发率显著降低。但由于受到病人曾经接受过的相关治疗的限制,局部复发直肠癌（locally recurrent rectal cancer,LRRC）的治疗一直以来是备受争议的问题。手术是其主要的治疗手段,但仅有少数病人可以获得根治。因此,针对不同治疗史的病人采取合理有效的多学科综合治疗模式是LRRC治疗的重要原则,而综合治疗时机及合理选择已成为目前研究的热点。     

miR-103与胃癌多药耐药作用机制探讨

目的 既往研究肿瘤耐药均集中在DNA水平,而DNA又影响mRNA及蛋白质表达.但是mRNA与编码蛋白质的表达并不成比例,而非编码RNA恰好能解释两者之间的不平衡.非编码RNA即微小RNA(microRNA,miRNA),是一类内源性短链非编码小分子核糖核苷酸,长度约18~25个核糖核苷酸,是转录后基因表达调节的关键分子,参与胃癌的发生发展.本研究旨在探讨miR-103在胃癌多药耐药中作用及其分子机制.方法 miRNA芯片筛选SGC7901/ADR及SGC7901细胞差异表达miRNA,应用qRT-PCR验证miR-103表达;将miR-103的拟似物及抑制物分别转染SGC7901/ADR及SGC7901细胞,MTT法检测转染前后对多柔比星敏感性变化;蛋白质印迹法检测miR-103对caveolin-1表达的影响.结果 miR-103在SGC7901/ADR细胞中表达(0.32±0.04)显著低于SGC7901细胞.miR-103拟似物转染SGC7901/ADR细胞后对多柔比星的敏感性较对照组显著提高,IC50由(18.83±0.32) μg/mL下降到(4.54±0.29) μg/mL,t=1.04,P<0.05;而miR-103抑制物转染SGC7901细胞后对多柔比星的敏感性显著降低,IC50由(1.65±0.03) μg/mL上升到(15.27±0.26) μg/mL,t=1.25,P<0.05.miR-103靶向作用于caveolin-1的3'-UTR,并在转录后水平负向调控caveolin-1表达.结论 miR-103通过靶向负调控caveolin-1表达,增加SGC7901/ADR细胞对多柔比星敏感性,从而逆转胃癌多药耐药.     

晚期非小细胞肺癌患者预后相关因素分析

目的 探讨晚期非小细胞肺癌预后的相关因素。方法 对234例晚期非小细胞肺癌患者的临床资料进 行回顾性分析,对可能影响其预后的相关因素进行单因素和多因素分析。结果 符合纳入标准的非小细胞肺癌患者 234例,选择性别、年龄、吸烟状况、功能状态(PS)评分、病理类型、临床分期6个因素进行单因素分析,其结果显示:PS 评分的相对危险度是1.980(95%CI =1.482~2.646,P <0.05),吸烟状况的相对危险度是1.355(95%CI =1.029~ 1.784,P <0.05),提示PS评分及吸烟状况对晚期非小细胞肺癌预后有影响。针对上述两个因素进一步行多因素 COX分析显示:PS评分的相对危险度是2.085(95%CI =1.555~2.796,P <0.05),吸烟状况的相对危险度是1.464 (95%CI =1.109~1.934,P <0.05),提示PS评分、吸烟状况是影响晚期非小细胞肺癌预后的独立因素。结论 PS评分、吸烟状况是影响晚期非小细胞肺癌生存的独立预后因素。     

埃克替尼提高胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性

目的:胃癌细胞大多对TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)不敏感。本研究为探讨胃癌细胞对TRAIL耐药的原因以及如何提高胃癌细胞对TRAIL的敏感性。方法:流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测蛋白的表达。结果:TRAIL(100ng/ml)作用MGC803和SGC7901细胞20小时,TRAIL诱导少量细胞凋亡,同时检测到EGFR和下游Akt、ERK的活化。用新型的EGFR酪氨酸激酶抑制剂埃克替尼(10μmol/L)预处理MGC803和SGC7901细胞2小时,之后加用TRAIL,结果抑制了TRAIL引起的EGFR和下游Akt、ERK的磷酸化,并最终提高了MGC803和SGC7901细胞对TRAIL的敏感性。结论:埃克替尼通过抑制EGFR通路从而增强了TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡。     

β-tubulin在肾脏D5R与CCKBR相互调节中的重要作用

目的探讨β-tubulin在胆囊收缩素B受体(cholecystokinin B receptor,CCKBR)和多巴胺D5受体(dopamine D5 receptor,D5R)相互作用的调节机制。方法选用正常人和高血压患者肾脏近曲小管细胞(renal proximal tubular cells,RPTC),各分为3组:CCKBR激动剂(gastrin)处理组;D5R激动剂(fenoldopam)处理组;gastrin+微管抑制剂(nocodazole)组。免疫荧光法测定β-tubulin、CCKBR和D5R的定位,免疫印迹方法检测CCKBR、D5R和Na+,K+-ATP酶的表达。结果 Gastrin处理正常RPTC后D5R表达显著增加(P0.05),Na+,K+-ATP酶的表达降低(P0.05),fenoldopam同样能够刺激CCKBR表达增加(P0.05),但nocodazole预处理后再加入gastrin并不能够增加D5R的表达,也不能降低Na+,K+-ATP酶的表达。高血压患者RPTC中CCKBR和D5R的相互作用以及Na+,K+-ATP酶的表达变化并不明显。免疫荧光结果显示,正常RPTC中CCKBR和D5R蛋白能够被诱导转移到细胞膜上,微管抑制剂能够显著阻断转移过程,但高血压患者RPTC中β-tubulin杂乱无章,CCKBR和D5R蛋白也没能有效转移到细胞膜上。结论 tubulin通过促进CCKBR和D5R从细胞质向细胞膜转运,从而发挥生物学功能,可能在二者相互作用和钠水代谢中起到重要作用。