紫杉醇诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的分子机制

目的:探索紫杉醇对A375细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测紫杉醇对细胞增殖能力及细胞生长的影响;流式细胞仪分析及细胞形态学观察检测细胞周期和细胞凋亡;Westernblot方法检测bcl2、Bax和Caspase3蛋白表达。结果:0.001～1.000μmol/L紫杉醇以时间和剂量依赖方式抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡,0.000～1.000μmol/L紫杉醇作用24h时,早期细胞凋亡率由(0.5±0.1)%增至(32.4±1.1)%,P<0.05,0.100μmol/L紫杉醇作用24和48h时,早期细胞凋亡率由(20.9±0.9)%增至(52.6±1.0)%,t=28.89,P=0.001;不同浓度紫杉醇诱导A375细胞凋亡的机制不同,0.001μmol/L时不影响细胞周期,0.010μmol/L时使G0/G1期细胞含量明显减少,0.100和1.000μmol/L时使细胞发生G2/M期阻滞。紫杉醇作用24h后,Caspase3被激活,同时bcl2和Bax蛋白表达分别被下调和上调。结论:紫杉醇可诱导A375细胞凋亡,bcl2/Bax蛋白比值的下降及Caspase3的激活参与了该细胞凋亡过程,但高浓度紫杉醇通过作用微管,低浓度紫杉醇则通过尚不清楚途径实现细胞凋亡过程。     

蟾蜍灵对胃癌组织MGC-803细胞周期作用机制的研究

目的探讨蟾蜍灵对胃癌MGC803细胞周期及周期蛋白的影响。方法采用台盼蓝拒染法测定细胞增殖活力;瑞士姬姆萨染色观察细胞形态学的变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫组织化学方法检测细胞周期相关蛋白p16、p21、pRb的表达。结果1)蟾蜍灵抑制胃癌MGC803细胞的增殖,24、48、72h的IC50分别为0.086、0.048和0.036μmol/L。2)蟾蜍灵在0.01～0.1μmol/L时作用24～72h,形态学上可见细胞体积增大,出现双核、多核细胞。3)流式细胞仪显示蟾蜍灵浓度为0.01～0.1μmol/L时可明显诱导细胞周期G2/M期阻滞。4)蟾蜍灵作用于胃癌MGC803细胞,观察到p16、p21、pRb蛋白的表达明显上调。结论蟾蜍灵引起胃癌MGC803细胞的周期阻滞可能与p16、p21、pRb蛋白的上调有关。     

非小细胞肺癌组织GST-π表达及其临床意义的研究

目的:检测谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表达,分析其与预后的关系.方法:将109例NSCLC患者的手术标本及11例正常肺组织标本制成组织芯片,采用SP免疫组化方法检测GST-π的表达,并与病理特征及生存时间进行分析.结果:109例NSCLC患者中,GST-π表达阳性为68例(62.4%),正常肺组织为1例(9.1%),差异有统计学意义,x2=9.535,P=0.002.GST-π的表达与年龄、分化程度、TNM分期及淋巴结转移无关,P均>0.05,但与性别,病理类型和吸烟有关,x2值分别为0.749、3.879和4.898,P值分别为0.005、0.049和0.027.Cox多因素分析显示,TNM分期是影响预后的独立危险因素(95%CI:1.625～3.893),P=0.000,GST-π的表达与生存期无关,P=0.940.结论:GST-π的表达可能与预后无关.     

大鼠骨髓源内皮祖细胞分化过程Notch信号通路活化及榄香烯干预机制的探讨

目的:观察大鼠骨髓来源内皮祖细胞分化过程中Notch信号通路的活化情况及β-榄香烯对该通路的影响.方法:大鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)的原代培养;RT-PCR法检测不同培养时间(0、4、7、10、14 d)和不同浓度β-榄香烯(0、5、10、20 μg/mL)干预的EPCs中CD133、vWF和Notch信号通路靶基因Hey-2和Hes-1的表达.结果:随着EPCs培养时间的延长,CD133表达明显减弱,vWF表达无显著变化,Notch信号通路靶基因Hey-2和Hes-1表达增加;随着β-榄香烯浓度的增加,Hey-2和Hes-1表达逐渐减弱.结论:在EPCs分化过程中,Notch信号通路发生活化;β-榄香烯对EPCs的分化和Notch信号通路的活化有明显的抑制作用,且具有浓度依赖性.推测,β-榄香烯可能会抑制EPCs分化为内皮细胞,抑制肿瘤血管生成,进而抑制肿瘤的生长和转移.     

PS341对他莫昔芬诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡影响及其机制的探讨

目的:研究蛋白酶体抑制剂PS341是否可增强他莫昔芬(TAM)诱导的乳腺癌细胞凋亡,并探讨可能的机制。方法:采用MTT方法测定细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用蛋白质印迹法检测Caspase-8的活化,PARP的裂解及死亡受体Fas蛋白的表达。结果:TAM以时间及浓度依赖的方式抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,24及48h的IC50分别为25和6μmol/L,25μmol/L的TAM处理24h可诱导21.9%的MCF-7细胞发生凋亡,10nmol/L的PS341预处理后给予25μmol/L的TAM处理24h细胞凋亡增至34.6%,PS341与TAM均可轻微上调Fas的表达水平,两药联合应用后可显著上调Fas的表达水平,并明显增强线粒体外凋亡通路的活性。结论:PS341与TAM联合应用可通过上调Fas的表达水平,增强TAM诱导的乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

凋亡抑制蛋白Survivin和Bcl-2在非小细胞肺癌中的表达和意义

目的：探讨凋亡抑制蛋白Survivin和Bcl-2表达与非小细胞肺癌（NSCLC）预后之间的关系.方法：将88例NSCLC及5例正常肺组织标本制作成组织芯片，应用免疫组织化学S—P法检测Survivin和Bcl-2的表达．并与临床病理特征及长期生存进行比较分析.结果：Survivin胞浆和胞核阳性表达率分别为94．3％和79．5％，Bcl-2胞浆和胞核阳性表达率分别为54．5％和42．0％．而正常肺组织均为阴性，Survivin胞浆表达与年龄等临床参数无关．而Survivin胞核在吸烟者中表达升高（P=0．002）,Bcl-2胞浆表达在男性、吸烟者、鳞癌、淋巴结无转移者中升高（P〈0．01）．Bcl-2胞核表达在女性、不吸烟者、腺癌和肿瘤大小为T3和T4者中升高（P〈0．05）Survivin表达与NSCLC病人生存期无关。Bcl-2胞浆表达的病人生存期更长（P=0．005），而Bcl-2胞核表达的病人生存期更短（P=0．012）多因素分析显示Survivin和Bcl-2不是影响NSCLC预后的独立危险因素.结论：Survivin检测可能有助于NSCLC的诊断，Bcl-2胞浆和胞核表达可能具有相反的预后意义.     

转移性结直肠癌三线治疗的研究进展*

理想的三线治疗方案应该能够缓解肿瘤的相关症状,提高患者的生活质量。目前转移性结直肠癌的三线治疗尚无标准方案,但已引起关注,本文对相关Ⅱ、Ⅲ期临床研究进行简要评述。     

Grb2-相关蛋白2参与RANKL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的机制研究

目的探讨Grb2-相关蛋白2(Gab2)在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-213迁移中的作用。方法流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK的表达。Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变。免疫沉降及Western-blot检测RANKL刺激后p-Tyr-Gab2和Gab2的表达。结果 MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强。RANKL刺激后MDA-MB-231细胞p-Tyr-Gab2表达一过性升高。结论 Gab2参与RANKL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移。     

miR-103与胃癌多药耐药作用机制探讨

目的 既往研究肿瘤耐药均集中在DNA水平,而DNA又影响mRNA及蛋白质表达.但是mRNA与编码蛋白质的表达并不成比例,而非编码RNA恰好能解释两者之间的不平衡.非编码RNA即微小RNA(microRNA,miRNA),是一类内源性短链非编码小分子核糖核苷酸,长度约18~25个核糖核苷酸,是转录后基因表达调节的关键分子,参与胃癌的发生发展.本研究旨在探讨miR-103在胃癌多药耐药中作用及其分子机制.方法 miRNA芯片筛选SGC7901/ADR及SGC7901细胞差异表达miRNA,应用qRT-PCR验证miR-103表达;将miR-103的拟似物及抑制物分别转染SGC7901/ADR及SGC7901细胞,MTT法检测转染前后对多柔比星敏感性变化;蛋白质印迹法检测miR-103对caveolin-1表达的影响.结果 miR-103在SGC7901/ADR细胞中表达(0.32±0.04)显著低于SGC7901细胞.miR-103拟似物转染SGC7901/ADR细胞后对多柔比星的敏感性较对照组显著提高,IC50由(18.83±0.32) μg/mL下降到(4.54±0.29) μg/mL,t=1.04,P<0.05;而miR-103抑制物转染SGC7901细胞后对多柔比星的敏感性显著降低,IC50由(1.65±0.03) μg/mL上升到(15.27±0.26) μg/mL,t=1.25,P<0.05.miR-103靶向作用于caveolin-1的3'-UTR,并在转录后水平负向调控caveolin-1表达.结论 miR-103通过靶向负调控caveolin-1表达,增加SGC7901/ADR细胞对多柔比星敏感性,从而逆转胃癌多药耐药.