沉默RORα通过Wnt信号通路促进人胃癌细胞增殖与迁移侵袭

目的：在构建沉默RORα人胃癌MGC803细胞的基础上,观察沉默RORα对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法：软琼脂集落形成实验、流式细胞术、细胞迁移和侵袭实验检测RORα沉默对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR与Western blot检测RORα、Wnt1、MMP-9与TIMP3 mRNA与蛋白表达。结果：集落形成实验显示,沉默组的集落形成率128.1%明显高于对照组和空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,沉默组S期细胞百分率39.9%较对照组26.1%和空载体组27.4%明显增加(P<0.05)。迁移实验显示,沉默组迁移距离(1.76±0.19) mm明显高于对照组(1.32±0.14) mm和空载体组(1.29±0.17) mm (P<0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(172±27)个明显多于对照组(147±17)个和空载体组(149±14)个(P<0.05)。RT-PCR与Western blot表明,沉默RORα可显著上调Wnt1与MMP-9 mRNA与蛋白与下调RORα与TIMP3 mRNA与蛋白。结论：沉默RORα可通过Wnt信号通路上调MMP-9和下调TIMP3促进MGC803细胞增殖与迁移侵袭。     

RORα miRNA真核表达载体构建及对人胃癌细胞增殖的影响

目的构建RORα（Retinoid acid receptor related orphan receptorα,维甲酸相关孤核受体α）miRNA真核表达载体,分析其对人胃癌MGC803细胞RORα蛋白表达及细胞增殖的影响。方法构建针对设计RORαmiRNA表达的3对miRNA干扰序列,克隆入pcDNATM6.2-GW/EmGFP miRNA真核表达载体,在测序鉴定无误后将含RORαmiRNA转染人胃癌MGC803细胞,用Western blo检测MGC803细胞转染前后RORα蛋白的表达水平变化。MTT法检测对转染MGC803细胞增殖的影响。结果 Western blot结果证实,MGC803细胞转染RORαmiRNA后24h RORα蛋白表达水平明显低于转染阴性组（P〈0.05）。MTT结果显示,转染RORαmiRNA后细胞增殖率（光吸收值）高于转染阴性组（P〈0.05）。结论 miRNA靶向抑制RORα表达后,可促进人胃癌MGC803细胞增殖,提示RORα是一个潜在的胃癌基因及药物治疗的靶点。     

非编码RNA在胃癌糖酵解中作用的研究进展

目的制备阿托伐他汀钙脂质体(ACL),探究其对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移的影响。 方法采用乳化-溶剂挥发法制备ACL并进行相关参数的测定。以香豆素6为荧光探针探究HCT116细胞摄取的变化;MTT实验和细胞平板克隆实验检测ACL和阿托伐他汀钙(AC)对HCT116细胞增殖的影响;Transwell实验检测ACL和AC对HCT116细胞迁移的影响。 结果成功制备ACL,其平均粒径为(87.24±0.485) nm,分散系数为0.240~0.250,Zeta电位为(－12.19±3.642) mV。脂质体形态似球形或圆形结构,外观完整,且大小均匀。脂质体组细胞内荧光强度显著增强,细胞摄取增加。AC和ACL作用后,细胞增殖率和克隆形成率显著降低,迁移细胞数减少,且ACL的抑制作用均显著强于AC。 结论ACL可以显著增加HCT116细胞的摄取,增强AC对HCT116细胞的抑制作用。     

二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞凋亡及机制

目的　探讨二烯丙基二硫 (DADS)诱导人白血病HL 6 0细胞凋亡的生物学效应及抗肿瘤机制。方法　通过MTT还原法检测DADS对该细胞系生长的影响 ;用电镜、荧光显微镜、流式细胞仪和细胞凋亡原位检测 (TUNEL)研究DADS诱导的细胞凋亡。SP免疫组化法检测细胞内Bcl 2、Bax蛋白的表达。结果　DADS能抑制HL 6 0细胞的生长 ,DADS处理HL 6 0细胞后 ,电镜下细胞呈凋亡特征性改变 :体积变小 ,核浓缩 ,凋亡小体形成 ,流式细胞仪示不同浓度DADS作用于HL 6 0细胞 ,亚G1期细胞明显增多 ,TUNEL测凋亡指数增加。SP免疫组化结果表明 10mg·L-1DADS处理细胞 2 4h后 ,Bax蛋白表达升高 ,Bcl 2蛋白表达下降。结论　DADS有诱导人白血病HL 6 0细胞凋亡的作用 ,其机制与Bcl 2 /Bax比例下降有关。     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的　研究二烯丙基二硫 (diallyldisulfide ,DADS)诱导人胃癌MGC80 3细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法　采用MTT法、丫啶橙染色、流式细胞仪等方法检测DADS对MGC80 3的增殖抑制 ,诱导凋亡以及细胞周期分布的影响。结果　MTT法显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的抑制增殖作用 ,2 0、3 0、40mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞72h后 ,生长抑制率分别达 2 5 7%、58 6%、69% ;经 3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 48h后 ,用丫啶橙染色法观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变 ;流式细胞仪分析结果显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的G2 /M期阻滞作用 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 2 4h ,与对照组相比 ,可使G2 /M期细胞增加到 4倍多 ,且DADS呈时间依赖性诱导MGC80 3细胞凋亡 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞48h ,凋亡率从对照组的 3 5%升高到 3 9 5%。结论　DADS引起MGC80 3细胞G2 /M期阻滞并诱导凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一     

siRNA干扰Chk1抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研究

背景与目的：细胞周期检测点激酶1（checkpoint kinase1,Chk1）与肿瘤的关系及其在肿瘤发生、发展及治疗中的作用是目前研究的热点。为探索Chk1在人类肿瘤细胞中对生长增殖活性和细胞周期的调控作用,本研究旨在观察siRNA干扰Chk1基因对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响。方法：采用RNAi技术抑制BGC823细胞中Chk1表达,采用Western blot检测转染前后Chk1蛋白表达情况,实验分为未转染组、脂质体组和Chk1siRNA转染组三组。然后采用MTT法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响。结果：Western blot检测结果显示,Chk1siRNA转染24h后,BGC823细胞中Chk1蛋白相对灰度值为0.11&#177;0.08,明显弱于未转染对照组的0.66&#177;0.21和脂质体转染组的0.70&#177;0.25（P〈0.05）,而未转染对照组和脂质体转染组之间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。转染Chk1siRNA的BGC823细胞其Chk1蛋白表达量下降了83.1%。MTT法检测结果显示,Chk1蛋白表达缺失可导致BGC823细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为48.1%（P〈0.05）。FCM法检测结果显示,Chk1基因沉默后细胞周期在G0/G1期发生停滞,未转染组24和48h后细胞在G0/G1期为48.3%和50.2%,转染Chk1siRNA组细胞在转染24和48h后G0/G1期增加至63.9%和66.1%,增殖指数（PI）由51.7%（24h）和49.8%（48h）减少至36.2%（24h）和34.4%（48h）。结论：Chk1siRNA转染可明显抑制人胃癌细胞增殖,且其抑制增殖作用与诱导G0/G1期阻滞有关。     

微信联合PBL教学在病理实验教学改革中的研究

目的观察微信联合项目式学习(project-based learning,PBL)教学法在病理实验教学改革中的效果。方法选取本校2016级临床医学专业150名学生作为研究对象,其中3个班级共75名学生设为对照组,该组学生采用传统PBL法进行教学,另外3个班级共75名学生设为观察组,该组学生采用微信联合PBL法进行教学。教学计划完成后,采用笔试考试成绩反映教学效果,采用问卷调查反映学生对教学满意程度,采用大学生自主学习能力评价测评量表评价学生自主学习能力。结果观察组学生笔试考试成绩高于对照组学生[(87.59±7.80)分vs.(82.79±9.79)分],差异有统计学意义(P<0.05)。观察组学生教学满意度评分高于对照组学生[(43.20±3.86)分vs.(38.83±7.00)分],差异有统计学意义(P<0.05)。观察组学生大学生自主学习能力评价测评量表评分高于对照组学生[(91.80±6.95)分vs.(87.08±6.56)分],差异有统计学意义(P<0.05)。结论将微信联合PBL教学法应用于病理实验教学中,可提高学生理论学习成绩,改善学生对教学的满意度,同时对培养学生自主学习能力具有积极的作用。     

二烯丙基二硫对人胶质瘤U251细胞增殖及RORα表达的影响

目的探讨二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）对人胶质瘤U251细胞增殖及维甲酸相关孤核受体α（RORα）蛋白表达的影响。方法采用MTT比色实验、群体倍增时间分析DADS对人胶质瘤U251细胞的生长抑制效应;Western blot技术分析RORα蛋白在DADS处理U251细胞前后的表达改变。结果DADS浓度从15、22.5、30、37.5到45mg/L处理U251细胞,其吸光值比对照组低,而且随浓度增加逐渐降低（P〈0.05）;相反,随着浓度增加,DADS对细胞增殖的抑制率从32.88%、41.83%、49.50%、59.42%到68.53%逐渐增强（P〈0.05）;未处理的U251细胞群体倍增时间为21.86h,而DADS处理后的细胞,细胞群体倍增时间延长至36.69h（P〈0.05）;Western blot结果发现,DADS处理U251细胞24、48h后,RORα蛋白表达（0.69±0.13、1.37±0.25）较未处理组（0.22±0.16）明显上调（P〈0.05）,且48h处理组高于24h处理组（P〈0.05）。结论DADS可抑制人胶质瘤U251细胞增殖,其抑制增殖作用可能与诱导RORα蛋白表达上调有关。     

胃癌中RORα蛋白的表达及临床病理意义

目的观察维甲酸相关孤核受体α(Retinoid acid receptor related Orphan Receptorα,RORα)蛋白在胃癌中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的关系,为寻找胃癌肿瘤标记物提供一定的实验依据。方法应用组织芯片技术及免疫组化SP法检测90例胃癌组织、48例癌旁胃黏膜组织与22例正常胃黏膜组织中RORα的表达,研究RORα与胃癌发生、发展的关系。结果 RORα蛋白在胃癌组织中表达下调,正常胃黏膜、癌旁胃黏膜和胃癌组织中RORα蛋白阳性率分别为83.36%(19/22),56.25%(27/48)和24.44%(22/90),3者相比差异有显著性(P<0.05)。高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌和印戒细胞癌中,RORα阳性率分别为45.00%(9/20)、27.59%(8/29)、14.29%(3/21)、11.11%(1/9)和9.05%(1/11)。高分化腺癌RORα阳性率高于低分化腺癌(P<0.05)。结论 RORα蛋白下调与胃癌的发生、发展相关,且可能与胃癌的分化程度有关。     

Chk1和Chk2高表达人胃癌BGC823细胞的建立与鉴定

细胞周期检测点Chkl和Chk2在参与G2/M期起着重要作用,本研究构建Chk1/2的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌BGC823细胞,进一步证明Chk1/2高表达对BGC823细胞G2/M期的影响。根据NCBI GenBank Chk1/2基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序对重组质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染BGC823细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物。结果显示,菌落特异性PCR表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,经测序与NCBIBLAST分析证实为Chk1和Chk2基因。稳定转染空载体pcDNA3.1 的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的BGC823细胞,经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在BGC823细胞中的表达较对照组与空载体组明显增加(P<0.05)。流式细胞术检测显示,Chk1转染组G2/M细胞较对照组与空载体组明显增加 (P<0.05),而Chk2转染组G2/M细胞无明显差异 (P>0.05)。上述结果表明,成功构建pcDNA3.1/Chk1与pcDNA3.1/Chk2真核表达载体和Chk1与Chk2高表达的BGC823细胞,Chk1高表达可阻滞BGC823细胞于G2/M。