蛋白芯片筛选胶质瘤蛋白标志物的初步应用

目的 探索表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, SELDI TOF MS)蛋白芯片技术在星形细胞瘤早期诊断和预后判断中的应用. 方法 应用蛋白芯片生物系统(proteinchip biosystems, PBSⅡ)以及强阴离子交换芯片(strong anion-exchange, SAX2),对26例星形细胞瘤患者和22例正常人血清进行蛋白芯片检测,并用蛋白芯片软件包3.0进行数据处理和质谱分析. 结果 肿瘤组与对照组在质荷比(mass/charge, M/Z)为5911 Da、4948 Da、16494 Da、4521 Da和8593 Da处蛋白含量有显著差异,并且构建成的蛋白树状分析模式可以有效区分肿瘤患者,其灵敏度为88.46%(23/26),特异度达100%(22/22).此外,在不同级别的星形细胞瘤之间也存在差异表达的蛋白峰.结论 应用蛋白芯片质谱技术可以得到星形细胞瘤患者血清中特异性的蛋白质谱图,在早期诊断及预后判断中具有重要意义.     

SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测脑胶质瘤中RASSF1A mRNA

目的　建立检测RASSF1A(RASassociationdomainfamily 1ARASSF1A)mRNA的SYBRGreenⅠ实时定量PCR的方法 ,了解脑胶质瘤中RASSF1A的表达水平 ,研究RASSF1AmRNA的表达和肿瘤恶性程度的关系。方法　构建克隆载体作为定量模板 ,RocheLightCycler 定量检测 4 8例不同恶性程度胶质瘤组织和 6例正常脑组织标本。结果　 4 8例脑胶质瘤组织中有 5例未检出RASSF1AmRNA。与内参照三磷酸甘油醛脱氢酶基因GAPDH(glyceraldehycle 3 phosphatedehydrogenase,GAPDH)比较后 ,RASSF1AmRNA的表达范围从 0 .0 8～ 1.0 0 /μg ,均值为 (0 .5 0± 0 .0 0 4 ) /μg。 6例正常脑组织标本均有RASSF1AmRNA的表达 ,范围从 0 .70～ 1.80 /μg ,均值为 (1.0 5± 0 .0 8) /μg。各期胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织 ,但胶质瘤不同病理级别组之间的差异无显著意义。结论　胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织。成功地建立了SYBRGreenⅠ实时定量检测RASSF1A基因表达方法 ,为研究RASSF1A表达水平下调的机制、表达水平和肿瘤的恶性程度、转移、预后等的关系打下基础     

类风湿因子检测中乳胶凝集试验与比浊法对比研究

目的：美国风湿病学会（ACR）1987年制订的类风湿性关节炎（类风关）分类标准中，将血清类风湿因子（RF)1：32以上阳性（乳胶法）作为诊断的依据之一。目前国内较多单位采用比浊法进行类风湿因子定量测定取代乳胶凝集试验的滴度测定，在使用ACR标本时常带来一定困难。本文对比浊法与乳胶凝集试验进行对比研究，以期明确两种不同方法的相关性，并提出比浊法诊断的临界值。方法：对210例风湿科门诊衣住院患者血清标本同时采用乳胶法、比浊法进行类风湿因子检测，检测数据输入Foxpro数据库，采用SPSS－PC统计分析软件进行描述性统计分析，回归分析、Spearman等级相关分析，以0．05作为显著性界限。结果：乳胶凝集试验的敏感性、特异性分别为80．55％、89．86％。乳胶法与比浊法检测结果经Spearman等级相关分析，相关系数为0．835，P＝0．01。结论：对比地与乳胶凝集试验进行对比研究后发现，比浊法与乳胶法滴度呈较好的一致性。传统上以20IU／ml作为正常参考值，但作用RA诊断界限并不妥当。在50IU／ml的灵敏度、特异度均较高，分别为94．44％和94．21％，因此建议将50IU／ml作为类风关诊断的界限值。     

Ⅰ型胶原羧基端末肽的测定及临床应用

Ⅰ型胶原羧基端末肽ICTP（Carboxy－terminaltelopeptideoftypeⅠcollagen）是Ⅰ型胶原的降解产物，90年代以来，作为反映骨吸收程度的血清学标志物日益受到人们的重视。测定ICTP的水平对溶骨性疾病及骨转移瘤的早期诊断和预后有重要意义。近来发现ICTP的浓度与肝脏疾病也有一定的关系，本文对ICTP的测定和临床意义作一概述。     

P73基因与结肠癌相关的关系

目的　探讨 P73蛋白和 m RNA的表达水平与结肠癌发生发展的可能关系。方法　用免疫组化法检测 2 7例结肠癌和癌旁组织中 P73蛋白表达水平。用半定量 RT- PCR检测 2 8例结肠癌和 2 0例正常组织中 P73m RNA的表达水平。结果　 1 P73蛋白在 78% (2 1 /2 7)结肠癌组织中的表达水平高于配对的结肠癌旁组织 44% (1 2 /2 7) (P<0 .0 5)。从癌旁组织、高分化和中分化腺癌到低分化腺癌 ,P73蛋白的表达水平呈递增趋势 (P<0 .0 0 0 1 ) ,呈正相关。 2 P73 m RNA在 89% (2 5/2 8)结肠癌组织中的表达水平高于正常结肠组织 55% (1 1 /2 0 ) (P<0 .0 1 )。结论　 P73基因的高表达可能与结肠癌的发生发展有关     

运用高分辨率熔解技术检测骨髓增殖性疾病患者JAK2 V617F突变

JAK2基因V617F突变与真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(PMF)等慢性骨髓增殖性疾病(MPD)的病理变化明显相关,在新修订的2008年WHO分类系统中,有无JAK2突变已经成为慢性MPD主要的诊断指标[1].     

视网膜母细胞瘤中DLC-1启动子甲基化异常

目的探讨肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)启动子在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的甲基化情况及与临床参数的关系。方法收集37例RB石蜡切片,4例正常眼部组织标本和2株RB细胞系(WERI-Rb1及Y79)。用甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)法定量检测DLC-1甲基化情况,用亚硫酸氢盐测序对其进行验证,并用RT-PCR检测WERI-Rb1和Y79细胞系中DLC-1 mRNA的表达。结果 35.1%的RB中存在DLC-1启动子甲基化,而在正常眼部组织中未发现甲基化;WERI-Rb1和Y79检测出DLC-1 mRNA表达。DLC-1启动子甲基化与肿瘤分化、伴随其他肿瘤和家族史均无显著关系,但单侧RB患者中的DLC-1甲基化率明显高于双侧患者(P<0.05)。结论 RB患者DLC-1启动子存在一定程度的甲基化,DLC-1甲基化在RB的发生、发展中具有一定的作用。     

骨髓增殖性肿瘤的分子标志研究进展

Bcr/Abl融合基因阴性的cMPDs是由迟发的慢性造血功能障碍引起的一组疾病,其特征是一系或多系造血干细胞或祖细胞克隆性增殖,导致外周血成熟或不成熟血细胞增加.     

中枢神经系统真菌感染的病原谱和实验室指标

中枢神经系统（CNS）真菌感染以病情严重、诊断困难、治疗棘手而具挑战性。本文介绍了导致CNS真菌感染的高危因素、病原谱和实验室指标。由于CNS真菌感染患者常伴有免疫功能低下,尤其需要临床采取有效预防措施,一旦感染则需要早发现、早诊断,及时有效开展优化诊疗方案,预防病情进一步恶化。     

PEDF肽段44-mer对前列腺癌细胞PC-3分化作用的研究

目的观察色素上皮细胞衍生因子（PEDF）肽段44-mer（57-101）诱导激素非依赖性前列腺癌（PCa）细胞PC-3发生神经内分泌分化（NED）,并探讨其对前列腺癌的治疗机理。方法体外合成44-mer并对PC-3的生长进行干预,以采用不同浓度44-mer诱导作为实验组,未用44-mer诱导作为对照组。从形态、标志物两方面证实部分细胞发生NED;采用水溶性四氮唑（WST-1）、流式细胞仪检测诱导后细胞的增殖情况及细胞周期。建立荷瘤裸鼠模型,实验组腹腔注射44-mer,定期测量肿瘤体积,并对标本进行免疫组化染色以检测嗜铬粒素A（ChrA）的表达情况;对照组腹腔注射磷酸盐缓冲液（PBS）,并定期测量肿瘤体积。结果实验组PC-3中发生NED形态学改变的细胞所占的比率为18.65%±1.26%,明显高于对照组（3.62%±0.44%）（P〈0.01）;1、10、100 nmol/L44-mer分别诱导PC-3 3 d后培养液中的ChrA水平分别为（168.97±5.36）、（263.95±5.30）、（325.24±5.74）ng/mL,均高于对照组[（115.97±2.16）ng/mL]（P均〈0.01）;免疫印迹法显示实验组PC-3神经特异性烯醇化酶（NSE）、ChrA的表达升高;实验组G0/G1期的细胞占79.24%±3.24%,明显高于对照组（65.18%±4.53%）（P〈0.05）;1、10、100 nmol/L44-mer诱导PC-3 6 d后WST-1实验的吸光度值分别为2.05±0.07、1.98±0.06、1.78±0.09,均低于对照组（2.54±0.08,P均〈0.01）。与对照组肿瘤体积[（574.70±63.78）mm3]相比,实验组的肿瘤体积明显减小[（222.21±49.51）mm3]（P〈0.01）,且标本中ChrA表达上升。结论 44-mer诱导PC-3发生NED,并抑制其在体内外的增殖。