氨基胍对糖尿病大鼠肾脏保护作用的实验研究

目的：研究糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）活性变化，探讨氨基胍对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法：将60只雄性Wistar大鼠随机分为3组，正常对照组（A）、糖尿病对照组（B）及糖尿病氨基胍治疗组（C），每组各20只， C组大鼠给予氨基胍治疗24周，分别测定治疗8、24周时大鼠的体重、血糖、糖化血红蛋白 （HbA1c）、肾功能、尿蛋白、PKC活性和肾小球总二酰基甘油（DAG）的含量, 比较各组治疗结果。结果：治疗8、24周后，测得B组大鼠血糖、HbA1c、肌酐清除率（Ccr）、尿蛋白、肾小球PKC活性和肾小球总DAG的含量均升高，C组糖尿病大鼠的血糖、HbA1c及体重变化无显著性差异，但C组糖尿病大鼠的Ccr、尿蛋白、24周时肾小球PKC活性和肾小球总DAG的含量与B组大鼠对照明显下降。结论：糖尿病大鼠肾脏PKC活性升高，氨基胍可下调PKC活性并可能是一种新的PKC抑制剂，氨基胍阻止或延缓糖尿病肾脏损害可能涉及多种机制，通过抑制PKC活性是其机制之一。     

缬沙坦联合霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾脏TRAIL及NF-κB的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其核因子-κB(NF-κB)在糖尿病大鼠肾组织的表达及其联合应用缬沙坦(valsartan)和霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾组织TRAIL及其NF-κB的影响.方法 采用一侧肾切除腹腔注射STZ(55 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,将80只Wistar大鼠随机分为:对照组(NC)、糖尿病组(DM)、缬沙坦治疗组(DM+V)、霉酚酸酯治疗组(DM+M)、联合治疗组(DM+V+M).取材,检测各项生化指标,并采用荧光实时定量RQ-PCR方法检测肾皮质TRAIL及其NF-κB的mRNA的表达.免疫组织化学测定肾组织TRAIL及其NF-κB蛋白的表达.结果 ①DM组24 h尿蛋白和肾重/体重比均高于NC组(均P＜0.05),并随糖尿病时程延长逐渐增高,于DM12周时达到最大值;血白蛋白在DM8周组开始下降(P＜0.01),并逐渐降低;血肌酐、尿素氮于DM16周组开始下降(P＜0.01).各治疗组与DM8周组相比较,肾重/体重比变小(P＜0.05),24 h尿蛋白总量降低(均P＜0.05),血白蛋白回升(P＜0.05).以联合组最为明显.②荧光定量PCR显示TRAIL在12周前表达降低(均P＜0.01),16周时其表达量明显升高(P＜0.01).各治疗组与DM8周组比较表达增加(P＜0.05),以霉酚酸酯组和联合组最为明显(P＜0.01).DM组NF-κB的mRNA表达随时间延长逐渐增强(P＜0.01),各治疗组与DM8周组比较表达均降低(均P＜0.05),以联合组最为明显.③免疫组化显示TRAIL主要在肾曲小管表达,肾小球和脉管系统没有表达.DM各组在12周前表达均降低(均P＜0.05),差异有统计学意义;16周后表达明显增强(均P＜0.01).各治疗组阳性细胞数明显增加(均P＜0.05).NF-κB在肾小球和肾小管均有表达,DM各组NF-κB表达量随时间逐渐增高,各治疗组可显著降低NF-κB表达.结论 TRAIL作为自身免疫系统的一个重要监控因子,其在糖尿病大鼠肾脏中的表达说明其密切参与了糖尿病肾病的发生发展,机制可能由NF-κB调节.早期缬沙坦和霉酚酸酯联合干预治疗可通过来增强TRAIL的表达,对肾脏产生保护作用.     

缬沙坦对早期糖尿病肾病的治疗作用探讨

目的：探讨血管紧张素Ⅱ Ⅰ型受体拮抗剂（AT1Ra)缬沙坦（Valsartan）对伴微量白蛋白尿的早期糖尿病肾病的治疗作用。方法：64例Ⅱ型糖尿病患者（24h尿蛋白排泄率20-200μg/min）在原抗糖尿病的基础上,随机分为四组,一组为正常对照（16例）,其余三组分别给予缬沙坦80mg/d(16例）、缬沙坦160mg/d(16例）;依那普利20mg/d(16例）。观察12周后平均动脉压（MAP）、14h UAER、HbA1c及Ccr等指标的变化。结果：12周后,MAP、24h UAER均有明显变化（P＜0.05),但尿微量白蛋白排泄率的下降下血压下降无显著性关性（r=0.365)。结论：缬沙坦可以降低早期糖尿病肾病的蛋白尿,对早期糖尿病肾病具有肾脏保护作用,且具有良好耐受性。     

冬虫夏草对lgA肾病小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的 :探讨冬虫夏草对lgA肾病小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法 :将 30只BALB/c小鼠按体重随机分为正常对照组 ,模型组与虫草组 ,采用半体内法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力 ,以吞噬百分率和吞噬指数作为腹腔巨噬细胞吞噬功能的指标。结果 :虫草组腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数均高于模型组 (P <0 .0 5) ,血清循环免疫复合物 (CIC)低于模型组 (P <0 .0 5)。结论 :冬虫夏草可以改善lgA肾病小鼠巨噬细胞吞噬功能 ,降低CIC     

冬虫夏草对IgA肾病小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

IgA肾病是目前包括我国在内的一些国家和地区最常见的肾小球肾炎,通过尾静脉注射葡萄球菌肠毒素’‘）与o眼免疫法t‘］制成IgA肾病动物模型,观察了冬虫夏草对该模型腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。1．材料与方法1．1材料1．1．1实验动物雌性BALB／C小鼠,体重18克一22克,山东医科大学实验动物中心提供。1．1．2牛血清白蛋白（BSA）：天津生化制品厂提供三．呈．3葡萄球菌肠毒素（SEB）：解放军军事医学科学院提供1．1．4FITC标记的羊抗鼠lgA血清由解放军军事医学科学院提供l·l·550％冬虫夏草酸提液：市售人工发酵虫草茵粉,用65…     

糖尿病大鼠早期肾小球蛋白激酶C活性变化

近年来,有关细胞内信息传导与细胞功能调节在糖尿病并发症的研究中越来越引起人们的重视。二酰基甘油（ＤＡＧ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）是细胞内重要的信息传导系统［１］,本研究中,我们旨在利用ＡＴＰ底物磷酸化的方法,检测糖尿病大鼠早期肾小球ＰＫＣ活性变化,以探讨肾小球ＰＫＣ的变化在肾小球高滤过和肾小球超微结构改变中所起的作用。 一、材料和方法 １．实验动物：体重２４０～２６０ｇ之间雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠４０只（山东大学实验动物中心提供）,随机分为正常对照组和糖尿病组,每组２０只,单只分笼饲以蛋白含量为２１％标…     

非肽类Ang(1-7)受体激动剂AVE0991对大鼠糖尿病肾病的保护作用

目的 探究非肽类Ang(1-7)受体激动剂AVE0991对链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠糖尿病肾病(DN)的保护作用。 方法 30只Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组(NC组)、糖尿病肾病组(DN组)、AVE0991处理组(AVE组),每组10只。DN组与AVE组腹腔注射STZ(65 mg/kg),STZ注射8周后,给予AVE组AVE0991灌胃处理,NC组及DN组取等量生理盐水灌胃,连续灌胃4周。12周末收集标本,检测各项生理生化指标;高碘酸-希夫(PAS)及免疫组化观察各组肾脏病理变化;实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附实验(ELISA)法分别检测白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA及蛋白水平变化。 结果 与NC组相比,DN组与AVE组大鼠血肌酐、24 h尿蛋白定量、肾质量体质量比明显升高,肾小球硬化指数、胶原Ⅰ(CollagenⅠ)表达量、炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA及蛋白水平明显上升。AVE组与DN组相比,大鼠血肌酐、24 h尿蛋白定量、肾小球硬化指数、CollagenⅠ表达量及肾组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.01)。 结论 AVE0991可以降低大鼠DN的纤维化及炎症水平。     

虫草菌丝对慢性肾功能衰竭大鼠微炎症反应的影响

目的考察慢性肾功能衰竭(CRF)模型大鼠肾脏组织NF-κB-p65与血清C反应蛋白(CRP)和白细胞介素6(IL-6)浓度的关系,并探讨虫草菌丝对NF-κB表达的抑制作用及其用于治疗微炎症反应的可能性。方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)阳性对照组、虫草菌丝3和6g·kg-1治疗组。建模前1d各组大鼠尾静脉抽血,并留取24h尿液,第2天假手术组行假手术,其余4组切除右肾上、下两极约70%肾脏;10d后假手术组再次进行"假手术",其余4组再经左腹壁切除左肾,制备5/6肾切除CRF大鼠模型。建模2周后,PDTC组隔日ip给予PDTC0.01g·kg-1,虫草菌丝治疗组分别ig给予虫草菌丝3和6g·kg-1,每天1次,共12周;假手术组和模型组ig给予等体积生理盐水;给药12周后各组留取血样和24h尿液,处死大鼠取肾。ELISA法检测血清CRP和IL-6浓度,全自动生化仪检测血清肌酐浓度,考马斯亮蓝法测定24h尿蛋白,实时荧光定量RT-PCR法和免疫组织化学法检测肾组织NF-κB-p65mRNA和蛋白表达。结果①建模前,各组大鼠24h尿蛋白和血清肌酐浓度无明显差异;建模14周后,模型组、PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组24h尿蛋白和血清肌酐浓度较建模前均明显升高(P<0.01),模型组较假手术组亦明显升高(P<0.01);模型组大鼠肾组织均出现肾小球球囊粘连、局灶节段性硬化及肾小管灶状萎缩和代偿性肥大等CRF病理改变;给药12周后,PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组大鼠肾组织病理变化与模型组比较无明显改善,虫草菌丝3和6g·kg-1组24h尿蛋白和血清肌酐浓度明显降低(P<0.01)。②给药12周后,模型组与假手术组比较,血清CRP和IL-6浓度及肾组织NF-κB-p65mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01),PDTC组、虫草菌丝3和6g·kg-1组与模型组比较均明显降低(P<0.01),虫草菌丝6g·kg-1组比3g·kg-1组降低更为明显(P<0.05)。③各组肾组织NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度进行直线相关分析结果表明,假手术组肾脏NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度之间无相关性,其余4组肾组织NF-κB-p65mRNA表达与血清CRP和IL-6浓度明显正相关(P<0.05,P<0.01)。结论 CRF大鼠肾脏NF-κB-p65表达与血清CRP和IL-6浓度正相关;虫草菌丝可抑制CRF大鼠肾脏NF-κB-p65mRNA和蛋白表达,对CRF大鼠微炎症反应具有一定的治疗作用。     

肾淋巴循环障碍促使单肾切除大鼠肾细胞凋亡

目的探讨肾淋巴循环障碍对大鼠肾脏细胞凋亡的作用,并初步探讨该作用与Bax、Bcl-2、Caspase3表达变化的关系。方法雄性Wistar大鼠48只,随机分为模型组和假手术对照组各24只。各组大鼠分别于术后第1、7、14及28天各处死6只,留取肾组织标本提取组织蛋白、mRNA和制作石蜡切片。运用Real-time PCR、Western Blot和免疫组化检测检测Bax、Bcl-2、Caspase3在肾脏组织的表达,用肾脏细胞原位凋亡(TUNEL)的方法检测肾脏凋亡细胞。结果细胞凋亡主要发生在扩张或萎缩的肾小管;模型组的凋亡指数在第14天达到高峰(P<0.01)。模型组的Bax和caspase-3蛋白和基因表达明显增强,主要位于小管间质,尤其在远端小管。相反,Bcl-2的表达明显减弱。Bax/Bcl-2比值明显增高。结论在肾淋巴循环障碍诱导的肾脏功能和结构改变的过程中,细胞凋亡显著增加,其中Bax/Bcl-2途径发挥了积极作用。     

血管紧张素-Ⅰ转换酶基因多态性与糖尿病及糖尿病肾病的关系

目的　探讨血管紧张素Ⅰ转换酶基因（ＡＣＥ基因） 多态性与糖尿病及糖尿病肾病（ＤＮ） 的易感性之间的关系。方法　应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）方法扩增４８ 例正常人、７４ 例胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ） 患者（ 其中４０ 例不伴ＤＮ,３４ 例合并ＤＮ） 、１０２ 例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ） 患者（５７ 例不伴ＤＮ,４５ 例伴ＤＮ） 的ＡＣＥ基因上２８７ｂｐ 片断,根据插入（Ｉ） 或缺失（Ｄ） 来判断其多态性。结果　健康对照组与ＩＤＤＭ 及ＮＩＤＤＭ 组ＡＣＥ 等位基因、基因型均无显著性差异（ Ｐ＞０－０５）;在ＩＤＤＭ 组中,Ｄ等位基因及ＤＤ基因型在伴ＤＮ亚组中显著升高;在ＮＩＤＤＭ 组中,与不伴ＤＮ者比较,伴ＤＮ者其Ｉ等位基因、ＩＩ基因型频率明显为低。结论ＡＣＥ 基因多态性与糖尿病易感性无关,与ＤＮ密切相关。