ORC1在大鼠血管平滑肌细胞G1/S和S期的表达

目的检测大鼠血管平滑肌细胞(VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELLS,VSMCS)G1/S、S期中起始识别复合物(ORIGINRECOGNITION COMPLEX1,ORC1)的表达。方法采用组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉原代培养VSMCS。利用胸苷双阻断法造成细胞同步,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、流式细胞仪检测分别测定G1/S、S期VSMCS的ORC1MRNA及蛋白表达。结果经光镜、免疫组化鉴定证实分离培养的细胞为VSMCS。ORC1MRNA在GO期的VSMCS无明显表达、G1/S期达到高峰,到S、G2/M期明显减少。流式细胞仪检测的VSMCS ORC1蛋白质表达与MRNA变化相似。结论ORC1可能在VSMCS细胞周期调节过程中起重要作用。     

妊娠期糖尿病产妇分娩镇痛过程血糖水平的健康干预

目的探讨健康干预对分娩镇痛产妇及新生儿血糖水平的影响。方法选择妊娠期糖尿病的孕妇120例随机分为观察组和对照组,每组60例。对照组常规开展糖尿病专科门诊护理项目,观察组在专科门诊护理基础上进一步进行糖尿病专科指导。记录分娩镇痛前产妇孕周、体质量指数、新生儿体质量、脐静脉血糖水平以及产妇实施分娩镇痛前(T_1),分娩镇痛后30 min(T_2)、60 min(T_3),宫口开至10 cm(T_4),胎儿娩出后2 h(T_5)时点末梢血糖水平。结果 2组产妇分娩时孕周和体质量指数比较,差异无统计学意义(P 0.05),新生儿出生后体质量和脐静脉血糖水平比较,差异有统计学意义(P 0.05)。2组T_1、T_2时点血糖水平比较,差异无统计学意义(P 0.05),T_3、T_4和T_5时点血糖水平比较,差异有统计学意义(P 0.05)。结论通过糖尿病专科护理门诊的健康干预,分娩镇痛产妇分娩过程及新生儿的血糖水平更加稳定。     

347例大肠息肉及其癌变的光镜、电镜观察及细胞核DNA含量的测定和形态定量分析

应用光镜、电镜、细胞核DNA含量测定和形态定量分析方法对347例大肠息肉及其癌变的病理变化进行了研究。显示大肠息肉癌变与其组织学类型、体积大小和不典型增生程度三个因素有关。并随腺瘤不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级至癌变,细胞核DNA含量和形态测定ING、ISA均值逐渐递增,同时Ⅱ、Ⅲ级不典型增生与腺瘤癌变有相似的超微结构变化。证实大肠腺瘤是大肠癌主要的癌前病变,不典型增生系腺瘤癌变的危险因素。     

流式细胞仪双色术检测机采血小板活化方法

目的 探讨一种流式细胞仪检测机采浓缩血小板悬液活化状态的方法。方法 用CD41—FTTC、CD62—PE双色标记，避光反应15min后加入1ml 1％多聚甲醛固定，上机分析。结果 采用此方法测定22℃保存下不同时间的血小板CD62P表达，表明随着时间的延长CD62P阳性率增加，保存达到3d及以上，CD62P阳性率增加非常显著。标本以多聚甲醛固定在24h对CD62P测试结果无明显影响，样品不固定处理，不同时间测定对结果影响非常大。结论 双色标记流式细胞术检测机采血小板活化敏感、特异，重复性好，操作简便，能较好地反映储存中血小板的CD62P的变化。可方便应用于血小板的保存及输注的质量监控。     

卵巢浆液性囊腺瘤细胞DNA的显微分光光度计镜扫描测定

测定细胞DNA用生物化学方法必须把DNA分离提纯,然后才能定量测定。由于分离提纯步骤多,操作复杂,不易掌握。用显微分光光度计,可直接在光学显微镜观察的标本上对单个细胞进行DNA定量测定。标本制作简单,测定迅速,操作方便,用电子计算机进行程序控制,测量精度高,数据可靠。但测量方法大多采用静态测量法,如     

流式细胞仪对缺氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞周期和细胞凋亡的测定

慢性阻塞肺病(Chronic obstructive pulmonary disease，COPD)发展的一个重要病理进程就是肺血管结构改造，表现为动脉平滑肌细胞异常的增生肥大，导致血管中膜增厚血管肌化，成纤维细胞增殖等变化。各种病因作用于机体最终导致缺氧。本实验通过培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(Pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMC)来进行缺氧处理，可以从细胞水平上探明缺氧在COPD中的作用。本实验是利用流式细胞技术对通过缺氧处理的培养ASMC细胞进行细胞周期和细胞凋亡可以方便快捷地检测各种细胞参数。     

小鼠肺纤维化模型中衰老对肺干细胞的影响

目的 研究衰老对肺干细胞在博来霉素致肺纤维化小鼠模型中修复能力的影响.方法 利用博来霉素处理年轻,年老小鼠建立肺纤维化模型,通过流式细胞术等方法比较肺组织干细胞在年轻、年老小鼠肺纤维化模型中的比例及增殖情况,研究衰老对肺组织干细胞的损伤修复能力的影响.结果 在博来霉素致肺纤维化的模型中,年老小鼠相对年轻小鼠肺组织干细胞增殖明显降低,肺上皮干细胞和肺间质干细胞比例显著下降.结论 在衰老过程中肺组织干细胞在肺纤维化损伤后修复能力明显减弱.     

T细胞表达CD137L分子介导对血管内皮细胞的活化刺激效应

目的探讨活化T细胞表面表达的CD137L分子对内皮细胞功能的影响.方法将活化的T细胞与内皮细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-1、IL-8的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达变化,并观察用融合蛋白CD137-Fc阻断CD137-CD137L共刺激通路后内皮细胞分泌细胞因子的变化.结果活化的T细胞刺激了内皮细胞活化,诱导了内皮细胞合成和分泌细胞因子IL-1、IL-8以及粘附分子ICAM-1的表达;可溶性融合蛋白CD137-Fc成功地阻断了CD137-CD137L的相互作用,内皮细胞合成和分泌细胞因子的能力降低.结论证明CD137-CD137L的相互作用在内皮细胞与T细胞的相互作用中发挥了重要的作用,提示CD137与其配体交联具有刺激内皮细胞活化的生物学功能.     

青藤碱促进树突状细胞分化抑制其成熟

目的 探讨青藤碱对树突状细胞(Dendritic cell,DC)体外分化发育、成熟、抗原递呈及刺激T细胞活化能力的影响.方法 DC体外培养时,青藤碱处理,观察细胞生长情况,流式检测细胞表型及抗原内吞能力,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞活化的能力,E(I)ISA检测细胞因子分泌.结果 与对照组相比,青藤碱处理DCCD1a表达上调而CD14下调,IL-12分泌减少,共刺激分子表达减少,同种T细胞刺激活性降低.结论 合适剂量的青藤碱能刺激单核细胞分化为不成熟DC但能抑制其进一步成熟.     

基于survivin的"模拟病毒"瘤苗对结肠癌免疫治疗的作用

背景与目的：结肠癌的免疫治疗在肿瘤的综合治疗中发挥了重要作用。本研究以结肠癌的survivin为靶分子，构建基于survivin的“模拟病毒”瘤苗，并探讨该瘤苗对结肠癌的免疫治疗作用。方法：制备基于survivin的“模拟病毒”瘤苗，用扫描电镜和免疫印迹（Western blot）进行鉴定。酶联免疫斑点试验（Enzyme linked immunospot assay,ELISPOT）和标准^51Cr释放试验分别检测瘤苗所诱导的特异性CTL活性，并对Babl／c小鼠荷瘤模型进行免疫学效应评价。结果：扫描电镜和免疫印迹证实“模拟病毒”瘤苗制备成功，并能有效介导“模拟病毒”瘤苗所携带基因的表达。ELISPOT和标准^51Cr释放试验显示体内有效激发抗原特异性CTL效应，可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子，对结肠癌细胞系CT26有明显的杀伤毒性，杀伤率为56．4％；肿瘤治疗实验证实“模拟病毒”瘤苗能有效抑制肿瘤的生长速度，提高荷瘤动物的生存率，与对照组相比差异显著（P〈0．05）。结论：基于survivin的“模拟病毒”瘤苗能有效激发出特异性CTL应答，并在荷瘤动物模型中有效抑制结肠癌细胞CT26的生长，提高荷瘤动物的生存率，为新型结肠癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。