抗Sclerostin单链抗体基因的构建、表达及活性分析

目的 构建抗Sclerostin（SOST）单链抗体原核表达载体并对表达蛋白进行活性分析.方法 提取抗SOST单克隆抗体5H3D1杂交瘤细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增抗体轻链可变区基因（VL）和重链可变区基因（VH）并通过重叠延伸拼接（SOE）PCR方法,在VL和VH基因之间引入Linker（Gly4Ser）3,连接成单链抗体SOST-scFv（VL-Linker VH）.将scFv基因克隆至表达载体PET-22b（＋）后转入HEK293细胞进行分泌表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA和West-blot检测表达蛋白的反应活性,茜素红结节染色法评估单链抗体对体外培养骨髓间充质干细胞成骨矿化的影响.结果 VL基因序列全长为339个碱基对,VH基因序列全长330个碱基对,均符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,而SOST-scFv基因全长包括4个框架区（FR）、3个抗原互补决定区（CDR）以及具有抗体特征性的2个半胱氨酸残基;本研究构建的scFv全长687个碱基对,VL-Linker-VH为连接结构,SDS-PAGE分析表明大肠杆菌表达的scFv为可溶性蛋白,ELISA和West-blot检测证实表达scFv具有与SOST特异性结合的活性,细胞实验结果证实scFv能够促进骨髓间充质细胞成骨分化及矿化结节的形成.结论 成功构建抗SOST单链抗体表达载体,而且表达的scFv产物具有确切的免疫结合活性以及体外诱导成骨分化、矿化作用,为该抗体应用于骨质疏松疾病治疗奠定了实验基础.     

黄芩甙和奥曲肽对重症急性胰腺炎肺损害保护作用

目的 观察黄芩甙和奥曲肽对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肺损害的影响,探讨两药对SAP的治疗作用与机制。方法 采用改良Aho法,经大鼠胰胆管内逆行注射3．5％牛磺胆酸钠制成SAP模型。制模后大鼠随机分为3组：模型组、黄芩甙治疗组、奥曲肽治疗组,另选一组作为假手术组。于术后相应时间点观察各组大鼠的病死率,随后分批处死大鼠,观察肺脏的大体及光镜下病理学变化;观察肺脏的病理学评分变化;应用组织微阵列技术制备肺脏微阵列片,并进行Bax、bcl-2染色,光镜下观察各指标的表达水平变化,同时应用TUNEL技术进行肺脏凋亡细胞的观察及凋亡指数的计算,分析以上各指标间的相关性。结果 黄芩甙治疗组、奥曲肽治疗组12h生存率明显大于模型组,差异有显著性（P〈0．05）;各组肺脏病理评分比较显示：不同时间点模型组、黄芩甙治疗组明显大于假手术组（P〈0．01）,6h及12h点黄芩甙治疗组明显小于模型组（P〈0．05）,奥曲肽治疗组明显小于模型组（P〈0．01）。各组肺脏Bax蛋白表达水平的变化显示：3h点黄芩甙治疗组、奥曲肽治疗组明显大于假手术组和模型组（P〈0．05）,同时黄芩甙治疗组明显大于奥曲肽治疗组（P〈0．01）;各组肺脏bcl-2蛋白表达水平的变化显示：模型组和黄芩甙治疗组明显大于假手术组（P〈0．01）,并明显大于奥曲肽治疗组（P〈0．05）;6h点黄芩甙治疗组明显小于模型组（P〈0．05）,各组肺脏凋亡指数的表达水平变化显示各组无明显差别（P〉0．05）。结论 （1）黄芩甙和奥曲肽对SAP肺损害均具有保护作用,其治疗机制可能与细胞凋亡有关。（2）在胰腺炎病理检测中应用组织微阵列技术可以节约成本、提高效率、代表性好,值得推广。     

腹腔镜低位直肠前切术术后吻合口瘘的临床分析

目的探讨腹腔镜低位直肠前切术术后吻合口瘘的预防和处理。方法选择因直肠癌在我院接受腹腔镜低位直肠前切术的415例患者。研究吻合口瘘与性别、年龄、BMI值、肿瘤分期、手术时期等因素的关联性;在后期阶段,课题组对术中的一些保护性措施进行了改进,探讨不同时间段,吻合口瘘患者二次手术率的情况。结果术后吻合口瘘的发生与性别、年龄、肿瘤分期、是否行保护性造口等因素无关(P0.05),而与BMI值相关(P0.05)。吻合口瘘的发生可明显增加患者的住院费用和住院时间(P0.05)。415例病例中(90例在前期完成,325例后期完成),仅1例需要中转开腹(0.24%)。术后吻合口瘘的总发生率为5.3%(22/415),前期阶段和后期阶段吻合口瘘发生率分别为5.6%(5/90)和5.2%(17/325),差异无统计学意义(P=0.885)。在前期阶段,5例吻合口瘘患者有4例行腹腔镜二次手术(80%);后期的17例吻合口瘘仅2例因瘘出现较早、感染扩散而行再次手术(11.8%),差异有统计学意义(P0.05)。结论需要手术干预的吻合口瘘患者,接受腹腔镜再次手术是安全有效的;保护性措施对降低吻合口瘘患者二次手术率发挥着积极作用。     

PICC导管相关性感染的危险因素Logistic多元回归分析

目的:探讨引起PICC导管相关性感染的独立危险因素。方法:对2002年9月～2009年12月实施PICC患者的所有资料进行汇总分析,比较发生导管相关性感染和无导管相关性感染组临床及各项置管指标,对可能影响感染因素进行多因素Logistic回归分析。结果:380例PICC患者发生导管相关性感染30例(7.89%),单因素分析影响导管相关性感染因素包括8项指标,多因素回归分析显示操作经验少、特殊药物应用、导管留置时间长、年龄大是导管相关性感染的独立危险因素。结论:PICC导管相关性感染的发生率较高,与多种因素有关,应针对相关因素进行预防。     

载脂蛋白E基因多态性与狼疮性肾炎

应用ＰＣＲ方法对６８例狼疮性肾炎（ＬＮ）患者血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因多态性分布进行观察，结合临床表现及随访资料进行分析。结果表明，ＬＮ患者ＡＣＥ基因ＤＤ基因型的发生频率明显高于正常人（Ｐ＜０．０１），ＤＩ型患者肾脏损害较重，预后较差。说明ＬＮ临床表现可能与ＡＣＥ基因多态性有一定的联系。     

低分子肝素对肺源性心脏病伴呼吸衰竭患者呼吸机治疗影响研究

目的探讨低分子肝素对肺源性心脏病伴呼吸衰竭患者呼吸机治疗的影响。方法选取南京大学医学院附属鼓楼医院自2016年1月至2018年7月收治的95例肺源性心脏病伴呼吸衰竭患者为研究对象。按照随机数字表法,将患者分入A组(n=45)和B组(n=50)。A组患者接受常规处理和呼吸机治疗,B组患者在A组基础上联合低分子肝素钙进行治疗,两组均连续治疗1周。比较两组临床有效率,治疗前后的血气和炎症指标,以及不良反应发生情况。结果治疗后,B组有效率92.0%(46/50)高于A组的75.6%(34/45),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,A组和B组二氧化碳分压均明显低于治疗前,且B组低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,A组和B组氧分压均明显高于治疗前,且B组高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。A组和B组治疗前后pH值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,A组和B组C反应蛋白、降钙素原、白细胞介素-6均明显低于治疗前,且B组低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论低分子肝素对肺源性心脏病伴呼吸衰竭患者呼吸机治疗有积极影响,可改善患者血气和炎症指标,且安全性好。     

徐州市学龄前儿童肥胖综合干预效果初步观察

目的观察饮食与运动干预减缓学龄前肥胖儿童体重增加的效果。方法在徐州市随机抽取两所幼儿园—中国矿大(干预组)与八一(对照组)幼儿园作为研究对象,根据身高标准体重筛选出肥胖儿童,为干预组儿童设计减肥食谱、制订运动方案,于干预前及干预4个月后分别对两组儿童的身高、体重进行测量、用问卷法了解饮食习惯,用称重法结合询问法调查肥胖儿童食物与营养素摄取情况,进行干预效果的分析与评价。结果干预后,干预组儿童的总能量、宏量营养素、晚餐能量、动物性食品的摄取量均明显低于对照组;吃饭速度减慢、在家与幼儿园里能自觉减少食物摄入、在家看电视时间明显减少、运动时间增多的儿童明显多于对照组儿童。干预组儿童的体重及体重增加明显低于对照组。结论饮食与运动综合干预措施能有效地减缓学龄前肥胖儿童体重的增加。     

牙周炎患者前牙热压铸全瓷粘接桥3年临床应用研究

目的:观察IPS e.max热压铸造全瓷粘接桥修复牙周炎患者单颗上前牙或2颗以内下前牙缺失的临床效果。方法:36例牙周炎患者经系统性牙周基础治疗后共制作38件双翼前牙热压铸造全瓷粘接桥,修复后3个月、6个月、12个月、24个月、36个月随访。观察修复体完整性、颜色匹配,基牙继发龋及边缘着色。分别记录基牙菌斑指数、牙龈指数、牙周探诊深度和附着丧失,比较修复前后基牙牙周组织的变化。结果:整体修复成功率为92.1%,2例全瓷粘接桥修复后分别于6个月和10个月脱落,均重新粘接后继续使用;1例全瓷粘接桥修复后翼板边缘部分瓷层折断,局部抛光后继续使用,其余35例均无异常,基牙未出现继发龋和边缘着色,修复体颜色与邻牙协调。修复后菌斑指数、牙龈指数、牙周探诊深度较修复前均明显降低,附着丧失修复前后无明显变化。结论:前牙缺失2颗以内的牙周炎患者,采用热压铸造全瓷粘接桥修复,恢复前牙美观和功能的同时可促进病变牙周组织愈合,临床修复效果较好。     

心房颤动山羊模型转复窦性心律后血液和心房肌组织中醛固酮水平的变化

目的:研究心房颤动(Af)山羊模型恢复窦性心律后血液和心房肌组织中醛固酮水平的变化.方法:18只成年山羊,体重相仿,雌雄不限,随机分成3组,其中窦性心律组(A组)6只,Af模型组(B组)6只,Af模型复律组(C组)6只,3组均行开胸手术,左心耳缝入起搏电极,A组不起搏,B、C组持续快速心房起搏3个月形成Af模型,3个月后处死A、B组山羊,取左、右心房肌组织冻存,C组停止起搏,予心律平静脉注射或加用直流电复律,维持窦性心律3个月,之后处死C组山羊,取左、右心房肌组织冻存,用ELISA法测定各组心肌标本中醛固酮水平.C组在Af前、Af后3个月、复律后2周、1个月、2个月、3个月时各留取血清标本,用放射免疫法测定血清醛固酮水平.结果:C组心肌组织醛固酮水平低于B组(P＜0.01),与A组比较则差异无统计学意义(P＞0.05),左、右心房肌组织醛固酮水平差异无统计学意义(P＞0.05);Af复律后2周、1个月、2个月、3个月血清醛固酮水平呈递减变化.结论:Af恢复窦性心律后血液和心房肌组织中醛固酮水平下降.