胃癌KATO-Ⅲ细胞CD133基因的siRNA干扰及其效果比较

目的 比较3段化学合成的siRNA对KATO-Ⅲ胃癌细胞中CD133基因的抑制效果,并初步探讨CD133基因表达被抑制后对胃癌细胞增生的影响.方法 实验分为空白对照组、阴性对照组、CD133siRNA-1组,CD133siRNA-2组和CD133siRNA-3组.针对CD133mRNA序列设计并合成3段siRNA,利用荧光标记的siRNA转染KATO-Ⅲ胃癌细胞后,通过共聚焦显微镜荧光计数检测其转染率,用RT-PCR法和Western blot法检测并比较3段siRNA对CD133基因表达的沉默效果,采用CCK-8法检测CD133表达被抑制后对胃癌细胞增生的影响.结果 siRNA在KATO-Ⅲ细胞中的转染效率可达到(85±8)％,所设计的3段siRNA均可显著抑制胃癌KATO-Ⅲ细胞CD133基因的表达,抑制率分别为(11±2)％、(19±2)％和(24±3)％.与空白组比较,CD133siRNA-3转染组细胞的增生活性降低了(42±4)％(P＜0.05).结论 成功转染并抑制了KATO-Ⅲ胃癌细胞中CD133基因的表达,并从中筛选出了干扰效果最佳的CD133siRNA片段,为后续CD133+胃癌细胞的干扰提供初步的实验研究.     

胃癌切除术式的研究进展

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤，预后很差。虽对胃癌发生、发展及演进的临床和基础研究已获长足进步，但相关基因和分子病理学研究尚未揭示其病因学、发病机制、浸润及转移的明确机制，由此导致5年生存率非常低下。因此，本文就胃癌早期诊断、适宜淋巴结廓清、适宜胃切除范围、适宜腹膜转移治疗、适宜器官联合切除的理论基础和临床研究的现状及进展予以综述。     

CD133/prominin-1与胃肠道肿瘤的研究进展

目的:探讨CD133/prominin-1在胃肠道肿瘤患者中的表达情况及其在肿瘤诊断治疗中的意义。方法:应用PubMed及CHKI期刊全文数据库检索系统,以胃癌、结肠癌、直肠癌、胃肠道肿瘤和CD133等为关键词,检索1989-01-2009-10的相关文献,共检索到英文文献1 071条,中文文献79条。纳入标准:1)CD133/prominin-1的基本资料介绍。2)CD133/prominin-1在正常胃肠道中的表达研究。3)CD133/promi-nin-1在胃肠道肿瘤患者体内表达、与临床病理和预后关系的研究。4)CD133/promi-nin-1与胃肠道肿瘤干细胞的关系及在肿瘤诊治中的应用研究。根据纳入的标准,精选了55篇文献,最后纳入了33篇文献进行分析综述。结果:CD133/prominin-1是一个含有5个跨膜区域的单链糖蛋白,主要在干细胞、祖细胞和肿瘤干细胞表达,一直被作为分离和鉴定这些细胞的标志。胃肠道中的正常组织和肿瘤组织中均有CD133的表达,胃肠道肿瘤中的CD133表达与肿瘤干细胞、临床病理和预后有关。结论:了解CD133在胃肠道肿瘤中的表达,可以加深我们对胃肠道肿瘤发生发展机制的认识,...     

mTOR信号通路与胃癌复发转移关系的研究进展

mTOR及其信号通路在胃癌的复发和转移过程中起重要作用,以mTOR为靶点的靶向药物联合化疗药物对于克服胃癌复发及转移治疗胃癌具有广阔的临床应用前景。笔者就国内、外近年来有关mTOR信号通路在胃癌复发转移中作用机制的研究进展作一综述。

     

胃癌组织中c-met、e2f-1和Ki-67的表达

目的 检测肝细胞生长因子受体c-met、转录因子e2f-1和Ki-67抗原在胃癌组织中的表达,探讨三者的相关性及与临床病理特征和预后的关系.方法 免疫组织化学染色法检测86例胃癌患者手术标本中c-met、e2f-1和Ki-67的表达,单因素与多因素法分析其与临床病理特征的关系及三者的相关性,Log rank检验分析其与患者预后的关系.结果 c-met、e2f-1和Ki-67在胃癌组织中均广泛表达.c-met的高表达与Ki-67高表达、生存期较短、肿瘤位置较高、淋巴结转移率较高、累及淋巴站较远及TNM分期较晚有关(P<0.05);e2f-1的低表达与肿瘤直径较大、TNM分期较晚、浸润较深、淋巴结转移率较高、累及淋巴站较远有关(P<0.05).多因素分析显示,浸润深度、累及淋巴站、TNM分期和Ki-67表达是c-met表达的独立相关因素,而年龄和生存期是e2f-1表达的独立相关因素.Log rank检验显示,与术后生存相关的因素有c-met、e2f-1和Ki-67表达、累及淋巴站、肿瘤直径、肿瘤位置、淋巴结转移率、浸润深度和TNM分期.结论 c-met阳性表达的胃癌患者生存期显著缩短.e2f-1在早期胃癌中高表达,晚期胃癌的进展可能与e2f-1表达降低有关.     

胃癌CD133阳性细胞的纯化及其生物学特性研究

目的检测人胃癌KATO-Ⅲ、SGC7901、AGS及MKN-45细胞株中CD133基因及蛋白的表达,研究CD133阳性(CD133+)细胞与CD133阴性(CD133-)细胞的生物学特性的差异。方法采用半定量聚合酶链反应及免疫蛋白印迹法分别检测KATO-Ⅲ、SGC7901、AGS及MKN-45细胞株中CD133基因和蛋白的表达;免疫磁珠细胞技术将KATO-Ⅲ细胞株中CD133+和CD133-细胞分离纯化,对比两者生长形态特点、体外增殖能力及分化能力的差异;采用CCK-8法分析CD133+和CD133-细胞对不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mg/ml)化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的差别。结果 KATO-Ⅲ细胞中CD133基因及蛋白表达量均明显高于SGC7901、AGS及MKN-45细胞(P<0.05)。CD133+细胞在无血清培养基中呈球形克隆悬浮生长,相比CD133-细胞具有更强的体外增殖能力及潜在分化能力。5-FU耐药性实验中,CD133+细胞在0.50mg/ml浓度下的抑制率较CD133-细胞明显降低(P<0.05),但其他浓度时二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论人胃癌细胞株KATO-Ⅲ中的CD133+细胞具有一定增殖、分化及耐药潜能,CD133可作为胃肿瘤起始细胞亚群的表面标志之一。     

胃癌基因异常表达与腹主动脉周围淋巴结转移的研究

目的探讨与腹主动脉周围淋巴结（No．16）转移相关的基因异常表达及临床病理因素。方法回顾性分析51例行D，术的原发胃癌（单病灶）患者的临床病理资料，采用免疫组化染色方法检测51例胃癌原发灶中增殖细胞核抗原（PCNA）和Ki-67增殖指数（LI）、P53、C—erbB2、survivin、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-7及MMP-9表达及其与No．16转移的关系。结果单因素分析显示肿瘤大小、浸润深度、累及淋巴站别、淋巴管浸润、Ki-67u、MMP．2表达与No．16转移有关（均P〈0．05）。多因素分析显示淋巴管浸润、Ki-67LI增高和MMP-2阳性是No．16转移的独立危险因素（均P〈0．01）。结论淋巴管浸润、Ki-67LI增高及MMP-2阳性是No．16转移的独立危险因素。     

胃癌淋巴管生成、淋巴管浸润及淋巴结微转移的临床意义

目的探讨胃癌淋巴管生成、淋巴管浸润及淋巴结微转移的临床意义。方法免疫组化法检测68例胃癌原发灶中D2-40的表达及其中51例胃癌的791枚淋巴结中CK20和CKpan的表达，结合患者的l临床病理特征进行综合分析。结果胃癌HE染色淋巴管浸润（LVI-HE）和D240染色淋巴管浸润（LVI-IM）的阳性率分别为66．2％（45／68）和76．5％（52／68），差异无统计学意义（P=0．118）。LVI-IM阳性率与肿瘤浸润深度（P=0．044）、TNM分期（P=0．003）及存在淋巴结转移（P=0．000）有关。68例胃癌平均淋巴管密度（LVD）为（18．19&#177;7．44）个／HP.LVD升高与LVI-HE阳性（P=0．040）、LVI—IM阳性（P=0．001）、静脉浸润（P=0．037）、TNM分期较晚（P：0．020）及存在淋巴结转移（P=0．001）有关系。LVD值≥15个／HP者近期生存率较LVD值≤14个／HP者明显降低（P=0．032）。51例胃癌HE染色和CK（CK20或CKpan）染色检出淋巴结转移率分别为74．5％（38／51）和88．2％（45／51），791枚淋巴结的转移淋巴结检出率由HE染色的32．0％（253／791）提高到CK染色的41．5％（328／791），P〈0．001。CKpan的微转移检出率明显高于CK20（P=0．003）。微转移淋巴结数量与肿瘤大小（P=0．001）、LVIHE（P=0．040）、肿瘤浸润深度（P=0．018）及TNM分期（P=0．012）有关。微转移淋巴结的检出使淋巴结转移站别及TNM分期迁移：7例N0→N1，6例N1→N2，1例N2→N3；4例Ⅰb→Ⅱ，4例Ⅱ→Ⅲa，3例Ⅲa→Ⅲb，1例Ⅲb→Ⅳ。结论D2-40及CK检测在诊断淋巴管浸润和淋巴结微转移上优于HE检查。CK20和CKpan的联合检查有利于发现微转移淋巴结。肿瘤TNM分期越晚，越易发生淋巴结微转移。LVI-IM、LVD及淋巴结微转移三者都与胃癌淋巴结转移有关。LVD值较高者近期生存率较低。     

CD133通过上皮间质转化促进胃癌侵袭和转移的研究

目的观察胃癌细胞CDl33表达与胃癌侵袭的关系,进而探讨其是否通过上皮间质转化（EMT）促进胃癌侵袭和转移。方法通过免疫磁珠分选技术,将KATO-Ⅲ细胞分为CDl33阳性细胞和CDl33阴性细胞,利用Transwell小室法检测其侵袭能力,并通过Western blot和RT-PCR方法检测siRNA干扰CDl33基因沉默前后其EMT相关因子的表达差异。Western blot法检测50例胃癌组织及癌旁组织CDl33和EMT相关因子的表达．并分析其相关性。结果CDl33阳性组穿膜细胞数（67．7±10．5）显著高于CDl33阴性组（13．3±6．8,P=0．001）。CDl33阳性细胞中Snail和N-cadherinmRNA及蛋白表达显著高于CDl33阴性细胞．而E-cadherin表达则明显低于CDl33阴性细胞（均P〈0．05）。siRNA干扰后,Snail和N-cadherinmRNA及蛋白表达明显下调,而E-cadherin表达则显著上升（均P〈0．05）。胃癌组织中CDl33、Snail及N-cadherin蛋白相对表达为0．635±0．119、0．599±0．114及0．754±0．154,明显高于癌旁组织的0．485±0．116（P=0．029）、0．259±0．108（P=0．020）和0．329±0．134（P=0．001）,而E-cadherin蛋白表达相对表达为0．378±0．123,明显低于癌旁组织的0．752±0．156（P=O．003）。相关分析显示,Snail及N-cadherin的表达与CDl33表达呈正相关（P〈0．05）,而E-cadherin的表达则与CDl33表达呈负相关（P〈O．05）。结论CDl33阳性胃癌细胞具有更强的侵袭能力,并可能通过EMT促进胃癌的侵袭和转移。     

腹腔镜胃切除术在胃癌治疗中应用的现状

如今腹腔镜技术已经广泛应用于各种临床疾病的诊断与治疗,以其微创的优势显著改善患者的预后.而在胃癌治疗中,常常根据肿瘤生长的位置以及侵袭情况选择不同的腹腔镜胃切除术.但是,腹腔镜胃切除术在胃癌手术治疗中并没有得到广泛的推广应用,原因主要在于存在的一些技术难题,不能很好地控制术后并发症和缺乏长期肿瘤学转归证据.随着一些新兴技术的出现和外科医师的经验积累,这些问题可能会得到一定程度的解决.本文就腹腔镜技术在胃癌手术治疗中的应用现状作一概述.