羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记大鼠肝脏NK细胞体内转输示踪

目的 利用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记大鼠肝脏NK细胞进行体内示踪,观察其在受鼠体内的存活.方法 经SD大鼠门静脉转输1×106个/ml CFSE体外标记新鲜分离的SD供鼠肝脏NK细胞,于输人后1、3、7、15 d分别切取肝脏和脾脏行冰冻切片免疫荧光观察,并收集门静脉血监测淋巴细胞和中性粒细胞的比例变化.结果 CFSE对大鼠肝脏NK细胞的标记率为98.63%;转输NK细胞后第1天受鼠肝脏内CFSE荧光最强,7 d时荧光变微弱,15 d时荧光基本消失;脾脏在第1、3天时可见较弱荧光,7 d时荧光消失.转输NK细胞后相同时间点肝脏内CFSE荧光均明显强于脾脏.转输肝脏NK细胞的受鼠门静脉血中性粒细胞比例第1天时最高,随时间延长逐渐下降,第15天时基本回复正常水平,淋巴细胞比例仅一过性降低.结论 转输的肝脏NK细胞在受体内的数量随时间延长而减少,在受体内的存活时间约为15 d.     

暂时性关闭腹腔治疗结肠憩室穿孔一例并文献回顾

<正>患者,男性,82岁,急性病程,于2019年7月24日晚因腹痛腹胀2 d至中山大学附属第六医院急诊就诊。患者2 d前无明显诱因出现腹痛腹胀,阵发性,伴肛门停止排气排便,无胸闷胸痛,无身目黄染,无恶心、呕吐,无发烧,于外院行CT检查提示消化道穿孔,遂转至本院。入院体格检查:体温37.5℃,脉搏105次/min,呼吸20次/min,血压106/60 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa);急性面容,腹部膨隆,无腹壁静脉曲张,腹肌稍紧张,全腹压痛、反跳痛明显。患者进入手术室时已出现感染性休克表现(脉搏111次/min,呼吸22次/min,血压89/62 mmHg)。急诊当晚行胸腹盆CT检查提示:膈下、腹腔多发游离气体,     

酸性微环境下大蒜素增强大鼠自然杀伤细胞的功能活性

Objective To investigate the role of allicin on rat nature killer (NK) cell activity in vitro under acidic microenvironment, and its possible mechanism. Methods CD3- NKR-P1+ NK cells isolated from the rat spleen were cultured in the complete RPMI 1640 medium ( pH 5. 6, pH 6. 5, or pH 7. 2 respectively), and treated with allicin at final concentration of 30 mg/L. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to determine supernatant interferon (IFN)-γ levels. The percentage of NK cells proliferation and apopotosis was analyzed by flow cytometry. NK cell cytotoxicity toward YAC-1 tumor cells was detected by LDH release assay. Results Proliferation and cytotoxicity of NK cells were significantly suppressed by acidic microenvironment in vitro. Under the cultured condition of acidic pH below 7. 2, allicin seemed to promote NK cells proliferation, which reached to highest level of 33% at pH 5. 6 cultured for 16 h. Correspondingly, at pH of 5. 6, allicin induced a marked increase of IFN-γ concentration in the supernatant from (50. 07 ± 0. 38) (cultured for 4 h) to (64. 59 ± 0. 09) ng/L ( cultured for 16 h). The cytotoxicity of NK cells toward YAC-1 tumor cells was also found strongest under the condition of pH 5. 6 cultured for 16 h. Conclusion Allicin favored to enhance the cytotoxicity of NK cells under the acidic cultured condition, which might be related to the increase of IFN-γ production.     

肠系膜下静脉汇入角度与左半结直肠癌肝转移灶分布规律的关系

［摘要］ 目的 分析肠系膜下静脉（IMV）汇入门静脉系统角度与左半结直肠癌肝转移灶分布的关系。方法 中山大学附属第六医院2012年1月至2017年1月期间收治的113例行全腹部+盆腔CT 检查的左半结直肠癌肝转移患者的影像学资料。根据门静脉系统重建三维图像,将门静脉系统的解剖类型分为IMV汇入门静脉角、IMV汇入肠系膜上静脉（SMV）、IMV汇入脾静脉（SV）3种类型,分析IMV汇入门静脉系统分型和成角情况以及成角与肝转移灶分布关系。结果 全组男性68例,女性45例,平均年龄58.4岁;同时性肝转移93例（82.3%）,异时性肝转移20例（17.7%）;其中结肠脾曲癌2例（1.8%）,降结肠癌7例（6.2%）,乙状结肠癌42例（37.2%）,直肠上段癌62例（54.8%）;肝内单发病灶共38例（33.6%）,多发病灶共75例（66.4%）。根据三维重建结果将IMV汇入门静脉系统情况分为3型：IMV汇入门静脉角（17例,15.0%）,IMV汇入SMV（31例,27.4%）,IMV汇入SV（65例,57.6%）。113例左半结直肠癌伴肝转移患者中,IMV汇入门静脉角共17例,IMV与SMV成角>90°患者转移灶100%位于肝左叶,IMV与SMV成角<90°患者转移灶位于肝右叶（20%）和肝左叶（80%）,肝转移灶分布构成比的差异有统计学意义（P<0.05）; IMV与SV成角>90°患者转移灶位于肝右叶（25%）、肝左叶（0%）和肝左右叶（75%）,IMV与SV成角<90°患者转移灶位于肝右叶（20%）、肝左叶（80%）和肝左右叶（0%）,肝转移灶分布构成比的差异有统计学意义（P<0.05）。IMV汇入SMV共31例,IMV与SMV成角>90°患者转移灶位于肝右叶（66.7%）、肝左叶（8.3%）和肝左右叶（25%）,IMV与SMV成角<90°患者转移灶位于肝右叶（26.3%）、肝左叶（36.8%）和肝左右叶（36.8%）,肝转移灶分布构成比的差异有统计学意义（P<0.05）。IMV汇入SV共65例,IMV与SV成角>90°患者转移灶位于肝右叶（50%）、肝左叶（35.7%）和肝左右叶（14.3%）,IMV与SV成角<90°患者转移灶位于肝右叶（21.6%）、肝左叶（25.5%）和肝左右叶（52.9%）,肝转移灶分布构成比的差异有统计学意义（P<0.05）。结论 根据IMV汇入方式进行门静脉系统的三类分型中,IMV汇入门静脉系统的角度均与左半结直肠癌肝转移灶分布密切相关,尤其在IMV以成角>90°汇入门静脉系统时,能更好地预测左半结直肠癌肝转移灶分布区域,对于疾病的临床预判、监测和治疗具备相当参考价值。     

银杏酮酯缓释微丸多成分体内吸收动力学与体外释药动力学的相关性研究

目的建立整合动力学对银杏酮酯(GBE)缓释微丸多成分(包括黄酮类和内酯类)体内吸收动力学与体外释药动力学相关性进行分析,为更准确地评价体内外相关性提供参考。方法利用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)技术测定GBE缓释微丸中主要成分(槲皮素,异鼠李素,白果内酯,银杏内酯A、B、C)的体外释放率,采用各成分质量浓度加和法计算整合药物浓度,并绘制整合药物释放曲线。收集大鼠口服GBE缓释微丸后不同时间点的血浆,测定各类成分血药浓度,利用各成分曲线下面积百分率作为自定义权重系数(Wj),计算体内整合血药浓度。采用Wagner-Nelson法计算各成分体内整合吸收率与体外对应的整合释放率进行线性拟合,评价体内外相关性。结果各成分体内外释放良好,采用自定义Wj得各组分的Wj分别为槲皮素0.248 1、异鼠李素0.009 2、白果内酯0.228 2、银杏内酯A 0.296 4、银杏内脂B 0.132 4、银杏内酯C 0.090 3,体内整合吸收动力学与体外整合释药动力学相关性良好(Y=0.930 8 X+12.84,r=0.962 9)。结论中药药效是多种成分综合作用的结果,采用多成分整合动力学可以兼顾各个组分,并有利于进行体内吸收动力学与体外释药动力学的相关性研究。     

肠系膜下静脉汇入角度与左半结直肠癌肝转移灶分布规律的关系

目的分析肠系膜下静脉(IMV)汇入门静脉系统角度与左半结直肠癌肝转移灶分布的关系。方法中山大学附属第六医院2012年1月至2017年1月期间收治的113例行全腹部+盆腔CT检查的左半结直肠癌肝转移患者的影像学资料。根据门静脉系统重建三维图像,将门静脉系统的解剖类型分为IMV汇入门静脉角、IMV汇入肠系膜上静脉(SMV)、IMV汇入脾静脉(SV)3种类型,分析IMV汇入门静脉系统分型和成角情况以及成角与肝转移灶分布关系。结果全组男性68例,女性45例,平均年龄58.4岁;同时性肝转移93例(82.3%),异时性肝转移20例(17.7%);其中结肠脾曲癌2例(1.8%),降结肠癌7例(6.2%),乙状结肠癌42例(37.2%),直肠上段癌62例(54.8%);肝内单发病灶共38例(33.6%),多发病灶共75例(66.4%)。根据三维重建结果将IMV汇入门静脉系统情况分为3型:IMV汇入门静脉角(17例,15.0%),IMV汇入SMV(31例,27.4%),IMV汇入SV(65例,57.6%)。113例左半结直肠癌伴肝转移患者中,IMV汇入门静脉角共17例,IMV与SMV成角90°患者转移灶100%位于肝左叶,IMV与SMV成角90°患者转移灶位于肝右叶(20%)和肝左叶(80%),肝转移灶分布构成比的差异有统计学意义(P0.05);IMV与SV成角90°患者转移灶位于肝右叶(25%)、肝左叶(0%)和肝左右叶(75%),IMV与SV成角90°患者转移灶位于肝右叶(20%)、肝左叶(80%)和肝左右叶(0%),肝转移灶分布构成比的差异有统计学意义(P0.05)。IMV汇入SMV共31例,IMV与SMV成角90°患者转移灶位于肝右叶(66.7%)、肝左叶(8.3%)和肝左右叶(25%),IMV与SMV成角90°患者转移灶位于肝右叶(26.3%)、肝左叶(36.8%)和肝左右叶(36.8%),肝转移灶分布构成比的差异有统计学意义(P0.05)。IMV汇入SV共65例,IMV与SV成角90°患者转移灶位于肝右叶(50%)、肝左叶(35.7%)和肝左右叶(14.3%),IMV与SV成角90°患者转移灶位于肝右叶(21.6%)、肝左叶(25.5%)和肝左右叶(52.9%),肝转移灶分布构成比的差异有统计学意义(P0.05)。结论根据IMV汇入方式进行门静脉系统的三类分型中,IMV汇入门静脉系统的角度均与左半结直肠癌肝转移灶分布密切相关,尤其在IMV以成角90°汇入门静脉系统时,能更好地预测左半结直肠癌肝转移灶分布区域,对于疾病的临床预判、监测和治疗具备相当参考价值。     

血脑同步微透析研究大鼠口服银杏酮酯后内酯类成分的血脑分布

目的研究大鼠口服银杏酮酯(GBE)后内酯类成分在脑部和血液中的药物质量浓度及药物分布系数(AUC脑/AUC血)。方法采用血脑同步微透析方法与高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)技术相结合,通过在大鼠脑部和颈静脉处同步埋置探针,收集大鼠口服GBE后不同时间段的脑部和血液微透析液,用HPLC-MS/MS对透析液中的内酯类成分进行分析,根据分析结果描绘血药浓度和脑药浓度曲线图,并分别计算各成分在脑部和血液中的药物分布系数。结果大鼠ig给予GBE混悬液(600 mg/kg)后,通过HPLC-MS/MS技术,血液微透析液中能检测到银杏内酯A、B、C和白果内酯;而脑部微透析液中只能检测到银杏内酯A、B、C,无法检测到白果内酯。各类成分在脑部和血液中的药物分布系数分别为银杏内酯A 2.911%、银杏内酯B 3.126%、银杏内酯C 0.337%。结论多点同步微透析技术可以同步检测中药中多种成分在多个效应部位的分布情况,还具有活体连续取样、节省动物、采样量小、组织损伤轻等特点,能较好地为探索多成分中药的效应物质基础提供一定的参考。     

颈部淋巴清扫术后严重淋巴漏的非手术治疗体会

目的 探讨非手术综合治疗措施在甲状腺癌颈部清扫术后严重淋巴漏防治中的应用价值。方法 回顾性分析两例颈部淋巴结清扫术后严重淋巴漏患者的临床资料和治疗过程,结合国内外文献对严重颈部淋巴漏的防治方法进行探讨。结果 通过饮食控制、营养支持、局部加压包扎、负压引流、生长抑素、以及高浓度复方泛影葡胺注射液局部注射等非手术治疗综合措施,可促进颈部淋巴结清扫术后严重淋巴漏患者的愈合。结论 饮食控制、营养支持、局部加压包扎、负压引流、生长抑素、以及高浓度复方泛影葡胺注射液局部注射等非手术治疗综合措施,在甲状腺癌颈部淋巴结清扫术后严重淋巴漏的防治中是安全有效的,可作为首选。     

消化系统恶性肿瘤术后淋巴漏的治疗

目的探讨消化系统恶性肿瘤术后淋巴漏的治疗。方法回顾性分析2008年12月至2012年2月间中山大学孙逸仙纪念医院收治的19例消化系统恶性肿瘤术后出现淋巴漏的患者的临床资料。结果19例患者淋巴漏均发生于术后2～4d,均先采用早期禁食、肠外营养、24h持续静滴生长抑素等保守治疗及腹腔引流管低负压吸引．其中8例引流液显著减少。经保守治疗6～10d治愈：10例引流液减少并稳定至200ml／d左右,进行肠内营养,并每天使用泛影葡胺30ml经引流管反复冲洗,12。24d治愈;另1例患者经保守治疗1周后引流液无明显减少,且自觉腹胀明显。于术后第11天行再次开腹手术缝扎淋巴漏管裂口．术后第4天拔除腹腔引流管．治愈出院。结论消化系统恶性肿瘤术后淋巴漏经保守治疗大多数能治愈．生长抑素的使用和腹腔引流管局部处理为主要措施。对于保守治疗无效者应行手术治疗．以防止严重并发症的发生。     

大鼠肝脏NK细胞的分离、纯化与超微结构特征

目的： 建立一种稳定而高效的大鼠全肝自然杀伤细胞（NK细胞）的分离方法,并利用该方法获得目的细胞,研究肝脏NK细胞的超微结构特征。方法：通过灌注和消化法分离大鼠肝脏非实质细胞,经大鼠淋巴细胞分离液密度梯度离心后收集单个核细胞层,磁珠分选得到肝脏NK细胞,流式细胞仪检测及免疫荧光鉴定其纯度,并通过光镜、透射电镜及扫描电镜的方法对目的细胞进行形态学特征研究。结果：分离所得NK细胞纯度为（88.64±4.36）%,存活率＞95%。肝脏NK细胞具有典型大颗粒淋巴细胞的形态学特征,胞内可见多量与其细胞毒性相关的分泌颗粒及NK细胞特有的囊泡结构。随着其被激活,细胞的形态会发生变化。结论：该方法是大鼠肝脏NK细胞分离的一种简单可行的方法。肝脏NK细胞的超微结构特征为其细胞功能发挥提供可能。