碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵和外膜孔蛋白表达水平的研究

目的探讨我国临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB—OprM和外膜孔蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系。方法收集我国15个省市28所医院临床分离的铜绿假单胞菌655株，琼脂稀释法测定该菌加入外排泵抑制剂羟基氰氯苯腙（CCCP）前后对亚胺培南和美罗培南的MIC；RTPCR检测外排泵MexAB-OprM和孔蛋白OprD2的表达水平；十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳（SD-PAGE）和蛋白印迹（Western blot）检测外膜孔蛋白OprD2。结果收集到的655株铜绿假单胞菌菌株对亚胺培南和美罗培南敏感率分别为52．5％和59．2％，加入CCCP前后其对亚胺培南和美罗培南的敏感率无明显变化；52．0％（51／9B）美罗培南耐药株MexAB-OprM显著高表达（P〈0．05），43．7％（59／135）亚胺培南耐药株OprD2显著低表达（P〈0．05），14．8％（20／135）亚胺培南耐药株OprD2表达缺失；SDS-PAGE和Western—blot显示与标准菌株PAO1相比，OprD2表达水平减低菌株ZZ20显影减低，表达缺失菌株BJ1不显影。结论MexAB-OprM表达升高和OprD2表达降低甚至缺失是我国铜绿假单胞菌对美罗培南和亚胺培南耐药的重要机制。     

2010年中国CHINET血流感染的病原菌分布及耐药性

目的了解2010年CHINET血培养分离菌的菌种分布和耐药性。方法对CHINET细菌耐药监测网2010年1月至2010年12月所有血标本按常规方法进行细菌分离、培养、鉴定。按统一方案用K-B纸片扩散法进行抗菌药敏感试验。结果 2010年自血液标本中共获分离细菌5 646株,其中革兰阳性球菌占64.3%,革兰阴性杆菌占35.6%。最常见的分离菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌(47.0%)、大肠埃希菌(1 5.0%)、肠球菌属细菌(7.4%)、克雷伯菌属细菌(6.0%)、金葡菌(5.6%)、不动杆菌属细菌(3.9%)、假单胞菌属细菌(2.9%)、草绿色链球菌(2.9%)、肠杆菌属细菌(1.9%)、沙门菌属细菌(1.2%)和嗜麦芽窄食单胞菌(1.1%),占分离菌株的94.8%。MRSA及MRCNS分别占金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌的51.1%和56.8%。粪肠球菌对高浓度庆大霉素和氨苄西林的耐药率分别为34.3%和14.7%,屎肠球菌对多数测试药物的耐药率显著高于粪肠球菌。草绿色链球菌对青霉素的耐药率为11.2%。葡萄球菌、肺炎链球菌和其他链球菌属细菌中均未发现万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药菌株,粪肠球菌和屎肠球菌对万古霉素的耐药率分别为2.1%和7.0%。大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、变形菌属和枸橼酸菌属细菌等肠杆菌科细菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率在0～10%,但克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属和变形菌属细菌对厄他培南的耐药率达10%～20%。不发酵糖革兰阴性杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药率较高,铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率为18.3%～22%,但不动杆菌属细菌耐药率达57%。结论 2010年CHINET监测资料显示革兰阳性菌,尤其是CNS在血流感染中占重要地位,血培养分离株对常用抗菌药严重耐药,因此应合理应用抗菌药物,并加强医院感染控制措施以抑制耐药菌传播。     

耐万古霉素肠球菌二株的耐药基因及传播机制研究

肠球菌是重要的条件致病菌之一,不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染,还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等.近年来抗菌药物的广泛应用,使肠球菌对多种抗菌药物产生耐药,并成为导致医院感染的重要致病菌.由于肠球菌对抗生素的耐药性增加,特别是近年出现的万古霉素耐药肠球菌(VRE)给临床治疗造成困难.本研究分析了杭州市分离到的两株VRE菌株的克隆相关性、耐药性及耐药传播机制,为VRE感染的防治提供基础.     

源自同一患者的二株血和粪便对碳青霉烯类耐药大肠埃希菌

目的 了解对碳青霉烯类抗菌药物耐药大肠埃希菌的耐药机制及与内源性感染的关系.方法 将临床分离的来源于同一患者血培养和粪便培养的大肠埃希菌2株,采用浓度梯度法(E-test)测定亚胺培南、美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)值,纸片扩散法测定其他16种抗菌药物的敏感性,等电聚焦电泳(IEF)检测所产生的β-内酰胺酶,PCR及序列分析确定其基因型,接合试验和Southern杂交进行耐药基因定位,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析2株菌株的同源性.结果 亚胺培南、美罗培南对2株大肠埃希菌的MIC值均≥32 mg/L,均产KPC-2(等电点值为6.7)和SHV-12(等电点值为8.2).blaKPC-2基因位于可转移的54 kb质粒上.PFGE显示2株大肠埃希菌为同一克隆株.结论 2株大肠埃希菌的耐药性及染色体DNA酶切图谱均一致,该患者大肠埃希菌败血症极可能是肠道的大肠埃希菌移位引起的内源性感染.     

阴沟肠杆菌耐药及ampC基因表达状况研究

目的 了解144株阴沟肠杆菌的耐药现状及ampC基因的表达。方法 通过纸片扩散法检测阴沟肠杆菌的药敏情况。聚合酶链反应（PCR）法检测ampC基因，克隆测序分析其特异性，并根据耐药表型对ampC基因表达状况进行分析。结果 144株阴沟肠杆菌对亚胺培南的敏感率高达98.6%，对头孢吡肟和头孢哌酮/舒巴坦的敏感率分别为65.9%和63.9%，但对阿莫西林/克拉维酸，头孢呋辛和头孢噻肟等抗菌药物的敏感率较低。120株ampC基因阳性（占83.3%)，其中36株高水平表达（占30.0%),45株诱导表达（占37.5%),未表达或低水平表达的有39株（占32.5%)，有56株合并产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs)（占46.7%)，单纯诱导产AmpC酶的菌株除对阿莫西林/克拉维酸和头孢呋辛敏感率低外，对其他抗菌药物的敏感率均在90%以上；而单纯高产AmpC酶的菌株仅对亚胺培南和头孢吡肟的敏感率在85%以上，如合并产ESBLs，则对头孢吡肟的敏感率下降。结论 阴沟肠杆菌耐药状况严重。明确ampC基因的表达状况有助于临床抗菌药物的选用。     

2002～2003年中国社区呼吸道感染常见病原菌的耐药性监测

目的　调查 2 0 0 2～ 2 0 0 3年中国社区呼吸道感染常见病原菌的耐药性。方法　收集2 0 0 2年 4月～ 2 0 0 3年 4月全国 5个地区 5家医院社区呼吸道感染患者中分离的 779株肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡它莫拉菌、A群 β溶血链球菌及苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌 (MSSA) ;同时收集北京市两家幼儿园儿童鼻咽携带的 185株肺炎链球菌、流感嗜血杆菌及卡它莫拉菌。琼脂稀释法测定头孢丙烯等 10种抗生素的最低抑菌浓度 (MICs)。结果　全国 5个地区 ,青霉素中介的肺炎链球菌(PISP)为 2 3 9% ,青霉素耐药 (PRSP)为 2 2 7%。PISP发生率从高至低依次为杭州 (4 4 1% )、武汉(2 6 2 % )、沈阳 (2 1 5 % )、上海 (2 0 8% )、北京 (18 5 % )、北京幼儿园 (12 7% ) ;而PRSP的排序则为北京幼儿园 (34 9% )、上海 (31 9% )、武汉 (2 7 9% )、杭州 (2 2 1% )、沈阳 (13 8% )、北京 (8 6 % )。肺炎链球菌对左氧氟沙星的敏感率为 96 3%。 9 5 %的流感嗜血杆菌和 87 4 %的卡它莫拉菌产生 β内酰胺酶 ,这两种菌对阿莫西林 /克拉维酸、头孢克洛、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢曲松、阿奇霉素、左氧氟沙星的敏感率在 96 4 %～ 10 0 %之间。肺炎链球菌、A群 β溶血链球菌、MSSA对阿奇霉素耐药率高于 6 0 %。头孢丙烯对PISP     

老年患者耐亚胺培南鲍氏不动杆菌研究

目的 明确医院临床分离老年患者耐亚胺培南鲍氏不动杆菌的耐药件、同源性、碳青酶烯酶基因型及其基因周围环境.方法 收集医院2005年1月-2007年1月临床分离的142株鲍氏不动杆菌,纸片扩散法筛选耐亚胺培南鲍氏不动杆菌;琼脂稀释法测定亚胺培南耐药菌株对14种抗菌药物的MIC值;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析亚胺培南耐药菌株同源性;PCR扩增及克隆测序分析碳青酶烯酶基因及其周围基因环境.结果 142株鲍氏不动杆菌中筛选到97株耐亚胺堵南鲍氏不动杆菌;PFGE分型中全部菌株属于4个流行的克隆株;97株耐亚胺培南鲍氏不动杆菌中90株携带OXA-23-like基因,97株携带OXA-51-like基因,86株菌株OXA-23-like基因上游检测到插入序列ISAbal,6株OXA-51基因上游检测到ISAbal.结论 所有耐亚胺培南鲍氏不动杆菌均为泛耐药菌,克隆播散足最主要的传播方式,OXA-23组和OXA-51组D类β-内酰胺酶基因足最主要的碳青酶烯酶基因型,未检测到OXA-24组、OXA-58组、IMP型和VIM型碳青酶烯酶基因,OXA类碳青酶烯酶基因与插入序列ISAbal关系密切.     

多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排机制

铜绿假单胞菌(PA)对多种抗菌药物都有不同程度的耐药,其耐药机制包括酶的产生、生物被膜的形成、外排泵的高表达和外膜孔蛋白表达的降低或缺失,其中多药外排泵能排出多种结构和功能不相关的抗菌药物,包括β-内酰胺类、氟喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素、氯霉素等,目前被认为是导致PA固有和获得性多重耐药的重要原因.     

耐甲氧西林葡萄球菌的DNA 探针杂交检测

我们认为有效控制耐甲氧西林葡萄球菌(ＭＲＳ)感染的流行,准确的检测是关键,但常规药敏方法易受酸碱度、温度、盐浓度等因素的影响,结果不准确,主张从耐药基因型(ＭｅｃＡ基因)进行检测诊断[13],主要方法之一为ＤＮＡ探针杂交检测ＭｅｃＡ基因诊断ＭＲＳ。一、材料和方法1菌株来源:共39株菌,其中22株为本院实验室保留菌株,16株菌为最近从重症监护病房(ＩＣＵ)一次暴发流行中分离所得,另1株为质控菌(金葡菌ＡＴＣＣ25923)。2试剂:ＴＥａｓｙ载体,限制性内切酶ＥＣＯＲＩ,通用引物Ｔ7ＰｒｏｍｏｔｅｒＰｒｉｍｅｒ,ＤＮＡ探针标记试剂盒均为Ｐ…