重组人抗-HBs单链抗体与白细胞介素2融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定

目的 探讨抗-HBs单链抗体与白细胞介素2融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定方法。方法 将构建的目的蛋白表达工程菌M15[pQE-ScFv-IL-2]经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE及Western blot分析鉴定表达产物;再通过Ni^2 离子金属螯合亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;采用逐步透析法对纯化后的目的蛋白进行复性后,用间接ELISA实验和CTL-2细胞增殖反应实验对其进行活性鉴定。结果 SDS-PAGE及Western blot分析结果显示有分子量约为43kD的重组蛋白表达,表达量可达18％;两步纯化后凝胶成像分析目的蛋白的纯度达到95％;复性后纯化产物的活性鉴定结果表明,重组抗体融合蛋白既能与HBsAg特异性结合,也能刺激CTLL-2细胞增殖。结论 获得的抗体融合蛋白兼具亲本分子的双特异性,为慢性乙型肝炎及相关疾病的导向治疗研究打下了良好基础。     

工程化人源性抗-HBs Fab抗体的制备、纯化和鉴定

用获得的表达人源性抗 ＨＢｓＦａｂ片段的大肠杆菌,发酵表达该抗体的可溶Ｆａｂ片段。以羊抗人Ｆａｂ抗体偶联ＨｉＴｒａｐ柱,用Ａｃｔｉｓｅｐｅｌｕｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍ作为洗脱液,在ＦＰＬＣ上纯化。用ＳＤＳ ＰＡＧＥ及蛋白印迹法分析、鉴定,用固相放兔法检测其活性单位。蛋白印迹及ＥＬＩＳＡ显示转化菌株有抗 ＨＢｓＦａｂ片段的表达。经ＦＰＬＣ纯化的抗体Ｆａｂ片段呈单一峰,与抗 ＨＢｓ阳性血清相似。纯化后的抗体Ｆａｂ片段达到电泳纯,具有较高的活性。     

对比增强超声心动图对拟肝移植患者肺内分流的研究

目的探讨对比增强超声心动图(CEE)对晚期肝病肺内分流的临床诊断价值.方法采用对比超声的检查方法,对连续24例拟肝移植患者进行了前瞻性研究,筛查晚期肝病肺内右向左分流的发生率,并根据左心室微泡的显示程度半定量分析为1～3 .将CEE证实有或无肺内分流的患者分为二组,对比分析其与临床各相关因素(临床特征、肺功能检查、肝功能检查、右心室功能)的关系.结果①24例患者, 10例(41.7%)CEE证实肺内右向左分流.左心室显影异常程度1～2 (6例1 ;4例2 )出现在右心室显影后6～10余个心动周期;②两组患者在年龄、性别、动脉血气分析、肝功能化验等检查结果差异无统计学意义(P＞0.05);③两组间在上消化道出血(4/10 vs 0/14)、脾脏厚度(SP)[(65.4±13.3) mm vs (45.4±12.6) mm]对比,差异有统计学意义(P＜0.05);④两组间在肺动脉收缩压(PASP)及右室Tei指数对比差异有统计学意义[(30.2±14.7)mm Hg vs (11.5±11.8) mm Hg及(0.47±0.16 vs 0.29±0.10);P＜0.05].结论①晚期肝病合并肺内分流而无低氧血症的肺血管扩张(IPVD)比较常见,CEE对诊断IPVD提供了一种简便、敏感、非创伤性的早期检查手段;②门脉高压症是发生IPVD的主要因素;③右室Tei指数可作为评估IPVD患者右心功能的重要参数.     

国产胸腺肽治疗慢性乙型肝炎患者HBeAg阴转与HBV前C区热点变异相关性的分析

目的 了解大剂量胸腺肽治疗后HBeAg阴转与HBV前C区1896位点，c基因启动子(CP)1762.1764位点变异的关系。方法 常规检测血清乙肝标志物，用斑点杂交．图象分析法检测HBV-DNA相对含量。用VGI基因测序仪对25例CHB患者治疗前后双份血清HBV前C／CP序列分析。结果 25例CHB(轻-中度)患者治疗后HBeAg阴性者，抗-HBe阳转20例，HBV-DNA阴转16例，PCR检测阴性无法进行HBV-DNA前C／CP测序检测，9例经巢式PCR，第二次PCR产物经纯化后直接测序，未发现1896、1764、1762位点变异，其中2例出现1858位点C→T变异，无1896位点变异。25例HBeAg阴转患者治疗前血清第一次PCR均呈阳性，PCR产物经纯化后直接测序，未发现1896、1764、1762位点变异，亦无其他位点变异。结论 本研究未发现大剂量胸腺肽治疗后HBeAg阴转与1896、1764、1762位点变异有关的直接证据，但胸腺肽治疗是否影响HBV前C／CP变异的问题，因病例数尚少，仍有待进一步积累病例，总结分析。     

人源性抗HBsAg抗体Fab段噬菌体呈现文库的构建、筛选及阳性克隆核苷酸序列测定

目的:构建一个经HBsAg主动免疫的人lgG1抗体噬菌体展示文库,通过特异的淘筛(panning)获得与HBsAg有较高亲和力的Fab抗体,并测定其编码序列。方法:从一经乙肝疫苗免疫的自愿者的外周血分离淋巴细胞提取RNA,逆转录合成cDNA。PCR扩增重链Fd和κ轻链cDNA。依次将PCR产物克隆进载体pComb3H相应的位点,构建成噬菌体呈现库,并以HBsAg包被的96孔板对抗体库进行3轮淘筛,将所获克隆分别与HBsAg进行ELISA反应,挑取显色大于对照20倍以上的阳性克隆进行DNA测序。结果:lgG1的Fd段和κ轻链cDNA得到扩增,构建了一实际库容量为1.8×10⁵的噬菌体呈现文库。通过特异性淘筛,获得与HBsAg有较高新合力的3株Fab抗体并测定其编码序列。DNA序列测定结果表明,3株抗体中两株的Fd段完全一样,且3株的轻链完全一样。结论:成功构建了一个经HBsAg抗原免疫的人源抗体Fab段噬菌体抗体库,筛选得到了3株特异性抗体的Fab片段。     

近年广州地区流脑80例临床分析

本组病例是1982～1984年本院收治的流行性脑膜炎共80例,临床分析如下。一、一般情况 1.男性51例,女性29例,男:女:1.76:1。儿童36例(其中学龄前15例),成人44例。年龄最小4个月,最大64岁。 2.发病地区:市区42例(其中越秀区14例,海珠区11例,荔湾区10例,东山区7例),郊区15例,外县10例,外省3例。     

促肝细胞生长素抗乙型肝炎病毒的体外效应观察

促肝细胞生长素抗乙型肝炎病毒的体外效应观察彭齐荣，余宙耀，李灼亮，涂荫国促肝细胞生长素（ＰＨＧＦ）已广泛地用于临床，但有无抗病毒作用目前尚无结论，我们以转染乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的ＨｅｐＧ２细胞（２２１５细胞）为模型，探讨其体外抗－ＨＢＶ的活性。ＰＨ...     

聚合酶链反应在慢性乙型肝炎病毒感染者中的实用意义

应用聚合酶链反应检测51例慢性肝炎,19例慢性HBsAg携带者(ASC)和26例HBV感染后的健康者血清中的HBV DNA。结果14例HBeAg阳性患者HBV DNA全部阳性,37例HBeAg阴性者中24例阳性(64.9％)。其中HBV·M阴性9例,有6例阳性。5例抗-HBs阳性者3例阳性。ASC和健康者PCR-HBV DNA检出率分别为36.8％和26.9％,明显低于慢性肝炎的74.5％。结果提示,慢性肝炎患者HBeAg阴性甚至HBV·M阴性时,往往大部分仍有HBV复制,且可能与病变活动有关。ASC和健康者总体病毒复制水平较低,可能与无明显的肝脏病表现有关。     

慢性肝炎患者血清肝脏特异膜脂蛋白(LSP)与肝脏病理变化的关系

本文检测30例病理证实的成年慢性肝炎患者血清 LSP 阳性率及滴度均为 CAH>CPH(阳性率二组比 P>0.05,滴度 CAH 显著为高,t=2.6269,P<0.02)。LSP 滴度与肝脏病变严重程度密切相关,以桥形坏死(P<0.001)、碎屑状坏死(P<0.001)、界板破坏(P<0.01)三组最高。纤维组织增生组次之(P<0.05),其它病变均较低。同时发现前三组病变的抗—LSP 阳性率亦比其它病变高,分别为80.00%(P<0.01)、83.33%(P<0.001)和62.50%(P<0.05),若与血清 LSP 同时阳性更表明病变严重。SGPT 水平与肝脏病理变化无显著性相关。因此,似可认为检测血清 LSP 滴度或同时检测血清 LSP 和抗—LSP 可作为能较好间接反映病变活动性及病变严重程度的血清学指标。     

胸腺肽对人淋巴细胞增殖反应的双重作用

据报道，大剂量胸腺肽有可能成为治疗慢性乙型肝炎的有效生物制品的新制剂[1]．胸腺肽能诱导淋巴细胞表面标志，表现为它能明显提高T淋巴细胞表达E受体（CD2）的能力，促进膜白细胞介素受体（mIL—2R）和人白细胞抗原（HLA—DR）表达率的增高，提示胸腺肽具有活化免疫细胞，促进其积极参与免疫应答的能力。鉴于胸腺肽含多种组分，而对胸腺肽各组分研究表明它们不仅在性质上有差别，且各具独特的生物学活性，在T细胞活化、分化、成熟等不同阶段起不同的调节作用。本文探讨多组分胸腺肽对淋巴细胞增殖反应的影响。结果表明，用植物血凝…