转染组织纤溶酶原激活物及内皮型一氧化氮合酶基因的内皮细胞和平滑肌细胞共同种植于人工血管对内膜增生的影响

背景:前期研究表明,双层细胞种植能有效提高内皮细胞保留率,将组织纤溶酶原激活物基因转染到内皮细胞中能提高其细胞溶解纤维蛋白的能力.目的:采用双细胞种植及修饰内皮的组织纤溶酶原激活物基因提高内皮细胞保留率和抗栓能力,通过内皮型一氧化氮合酶基因调控平滑肌细胞的增殖,观察对小口径人工血管通畅率的影响.方法:以4种不同组合细胞(内皮细胞+平滑肌细胞SMC,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞,内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)种植在PTFE管腔面.将新西兰大白兔随机分成4组,4种人工血管经旁路分别移植在4组兔的腹主动脉上.结果与结论:移植后60 d,种植内皮细胞+平滑肌细胞组和内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组内膜厚度无明显差异(P > 0.05).与内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组相比,未转染内皮型一氧化氮合酶组(内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞)内膜明显增厚(P < 0.05);未转染组织纤溶酶原激活物组(内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)内膜较薄(P < 0.05).提示组织纤溶酶原激活物基因转染可以促进血管内膜增生导致血管狭窄,但同时转入内皮型一氧化氮合酶基因可以抑制组织纤溶酶原激活物的促进平滑肌细胞增殖及内膜增生的作用.     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对移植人工血管内膜增生的作用

背景：平滑肌细胞增殖移行和血小板激活导致血栓形成是移植皿管再狭窄的主要原因，一氧化氮可以抑制上述生物反应，但内皮型一氧化氮合酶基因转染是否可以抑制种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生还未得到证实。 目的：拟进一步观察内皮型一氧化氮合酶基因转染对种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生的影响。 设计、时间及地点：重复观察测量，于2006-04／2007-05在西安交通大学医学院中心实验室及分子生物学实验室完成。 材料：1月龄新西兰大白兔1只，用来获取平滑肌细胞。成年新西兰大白兔18只．随机分成3组，正常对照组植入未转染的人工血管．LacZ转染组植入种植转染lacZ的平滑肌细胞的人工血管，内皮型一氧化氮合酶转染组植入种植内皮型一氧化氮合酶的平滑肌细胞的人工血管。6只/组。 方法：构建含有报道基因lacZ和内皮型一氧化氮合酶基因的假型反转录病毒载体小鼠白血病病毒/疱疹性口炎病毒G糖蛋白，并转染平滑肌细胞。将转染了基因的细胞种植在人工血管上，并用血管旁路移植的方法植入兔腹主动脉。 主要观察指标：瓜氨酸法检测细胞培养上清中一氧化氮含量。移植血管内膜X-gal染色观察，种植的平滑肌细胞为蓝色，而内源性细胞为红色。显微镜下测量血管内膜增生厚度。 结果：18只兔均进入结果分析。内皮型一氧化氮合酶转染组一氧化氮含量明显高于正常对照组（P〈0．05）。转染lacZ基因的平滑肌细胞经X-gal染色呈蓝色。血管平滑肌细胞植入30d，各组内膜厚度基本相似（P〉0．05）：植入100d．正常对照组与内皮型一氧化氮合酶转染组内膜厚度基本相似（P〉0．05），两组明显均低于lacZ转染组（P〈0．05）。 结论：内皮型一氧化氮合酶基因转染可抑制种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生。     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对移植人工血管内膜增生的作用

目的:平滑肌细胞增殖移行和血小板激活导致血栓形成是移植血管再狭窄的主要原因,一氧化氮可以抑制上述生物反应,但内皮型一氧化氮合酶基因转染是否抑制种植了平滑肌细胞的人工血管内膜增生还未得到证实.实验拟进一步观察内皮型一氧化氮合酶基因转染对种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生的影响.方法:实验于2006-04/2007-05在西安交通大学医学院中心实验室及分子生物学实验室完成.①实验材料:1月龄新西兰大白兔1只,用来获取平滑肌细胞.成年新西兰大白兔18只,随机数字表法分成3组,每组6只.正常细胞组移植未种植细胞的人工血管;LacZ转染组移植种植转染lacZ的平滑肌细胞的人工血管,内皮型一氧化氮合酶转染组移植种植内皮型一氧化氮合酶的平滑肌细胞的人工血管.②实验方法:构建含有报道基因lacZ和内皮型一氧化氮合酶基因的假型反转录病毒载体小鼠白血病病毒/疱疹性口炎病毒G糖蛋白,并转染平滑肌细胞.将转染了基因的细胞种植在人工血管上,并用血管旁路移植的方法植入兔腹主动脉.③实验评估:测定转染内皮型一氧化氮合酶基因及LacZ基因细胞培养上清中一氧化氮含量.血管植入30,100 d 后X-gal染色及苏木精-伊红染色观察人工血管上的平滑肌细胞,同时显微镜下测量每段血管内膜增生的厚度.结果:纳入成年新西兰大白兔18只,均进入结果分析.①内皮型一氧化氮合酶转染组一氧化氮含量明显高于未转染的正常细胞组(P ＜ 0.05).平滑肌细胞转染lacZ基因后经X-gal染色,倒置显微镜下可见转染了基因的细胞被染成蓝色.②血管植入30 d,与正常细胞组比较,LacZ转染组和内皮型一氧化氮合酶转染组内膜厚度差异无显著性(P ＞ 0.05);100 d后,内皮型一氧化氮合酶转染组内膜厚度与正常细胞组无明显差异,与LacZ转染组相比较,差异显著(P ＜ 0.05).结论:内皮型一氧化氮合酶基因转染抑制了种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生.     

不同产地干姜中6-姜辣素含量的考察

目的建立干姜中6-姜辣素含量测定的HPLC法,测定不同产地不同批次干姜中6-姜辣素的含量,以控制其质量。方法采用高效液相色谱法(HPLC)进行测定,HPLC色谱条件为:分析柱为Inertsil ODS-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-甲醇-水(V/V/V,40:5:55);流速为1.0 ml/min;柱温为25℃;紫外检测波长为280 nm;采用外标法定量测定。结果 6-姜辣素的含量在进样量为0.2146~2.146μg范围内与峰面积呈良好线性关系(R^2=1.0000),其平均加样回收率为97.35%,RSD值为0.44%。结论 HPLC法可快速、稳定的测定不同产地干姜中6-姜辣素的含量,结果显示,不同产地因生长环境、田间管理、采收加工方法不同,其含量也有所不同,对临床用药具有一定的参考价值。     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对移植人工血管内膜增生的作用*★

目的：平滑肌细胞增殖移行和血小板激活导致血栓形成是移植血管再狭窄的主要原因，一氧化氮可以抑制上述生物反应，但内皮型一氧化氮合酶基因转染是否抑制种植了平滑肌细胞的人工血管内膜增生还未得到证实。实验拟进一步观察内皮型一氧化氮合酶基因转染对种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生的影响。 方法：实验于2006-04/2007-05在西安交通大学医学院中心实验室及分子生物学实验室完成。①实验材料：1月龄新西兰大白兔1只，用来获取平滑肌细胞。成年新西兰大白兔18只，随机数字表法分成3组，每组6只。正常细胞组移植未种植细胞的人工血管；LacZ转染组移植种植转染lacZ的平滑肌细胞的人工血管，内皮型一氧化氮合酶转染组移植种植内皮型一氧化氮合酶的平滑肌细胞的人工血管。②实验方法：构建含有报道基因lacZ和内皮型一氧化氮合酶基因的假型反转录病毒载体小鼠白血病病毒/疱疹性口炎病毒G糖蛋白，并转染平滑肌细胞。将转染了基因的细胞种植在人工血管上，并用血管旁路移植的方法植入兔腹主动脉。③实验评估：测定转染内皮型一氧化氮合酶基因及LacZ基因细胞培养上清中一氧化氮含量。血管植入30，100 d 后X-gal染色及苏木精-伊红染色观察人工血管上的平滑肌细胞，同时显微镜下测量每段血管内膜增生的厚度。 结果：纳入成年新西兰大白兔18只，均进入结果分析。①内皮型一氧化氮合酶转染组一氧化氮含量明显高于未转染的正常细胞组（P < 0.05)。平滑肌细胞转染lacZ基因后经X-gal染色，倒置显微镜下可见转染了基因的细胞被染成蓝色。②血管植入30 d，与正常细胞组比较，LacZ转染组和内皮型一氧化氮合酶转染组内膜厚度差异无显著性（P > 0.05）；100 d后，内皮型一氧化氮合酶转染组内膜厚度与正常细胞组无明显差异，与LacZ转染组相比较，差异显著（P < 0.05）。 结论：内皮型一氧化氮合酶基因转染抑制了种植平滑肌细胞的人工血管内膜增生。     

高剂量X射线对人离体外周血中有核细胞DNA的损伤及其修复

目的:应用单细胞凝胶电泳技术检测X射线对离体外周血中有核细胞的DNA的损伤及损伤修复.方法:采用血常规正常的离体人外周血,用能量为6MV的X射线给予0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy的剂量照射,分别在0.5h、1h、2h用单细胞凝胶电泳技术检测全血中有核细胞的彗星率、慧尾长度和尾部DNA含量.结果:0Gy...     

核酪注射液足三里穴位注射治疗支气管哮喘临床研究

目的探讨核酪注射液足三里穴位注射治疗支气管哮喘的临床效果。方法收集2017年12月~2019年6月就诊亳州市中医院门诊及住院支气管哮喘患者60例,依照奇偶顺序分为治疗组(n=30)、对照组(n=30)。对照组给予常规治疗,治疗组于常规治疗基础上予以核酪注射液足三里穴位注射治疗。比较两组治疗前后肺功能指标[1秒用力呼气容积(FEV1)、呼气峰流速(PEF)日变异率、1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)]、哮喘控制测试量表(ACT)评分、圣乔治调查问卷(SGRQ)评分、血清免疫球蛋白E(IgE)水平。结果治疗后治疗组FEV1、FEV1/FVC高于对照组,PEF日变异率低于对照组(P<0.05);治疗后治疗组ACT评分高于对照组,血清IgE水平低于对照组(P<0.05);治疗后治疗组SGRQ症状、活动度、影响度评分低于对照组(P<0.05)。结论核酪注射液足三里穴位注射治疗支气管哮喘效果显著,能有效控制病情,改善肺功能及免疫功能,提高生活质量。     

IVF/ICSI-ET术后早期妊娠丢失患者绒毛组织拷贝数变异异常的高危因素分析

目的 探讨体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)后行新鲜胚胎移植(ET)的早期妊娠丢失(EPL)患者绒毛组织拷贝数变异(CNV)异常的高危因素,为遗传咨询提供依据。方法 采用回顾性队列研究,选择2020年6月至2022年12月就诊宁夏医科大学总医院生殖医学中心接受IVF/ICSI助孕新鲜胚胎移植后EPL患者中绒毛组织CNV结果异常的周期作为病例组(n=29),随机抽选同期IVF/ICSI-ET术后正常活产的周期作为对照组(n=60)。比较两组患者的一般资料、临床及实验室指标,并对病例组流产绒毛组织CNV异常的构成及占比进行分析讨论。结果 (1)病例组年龄[(33.45±3.78)岁]及自然流产次数[(0.41±0.73)次]显著高于对照组[分别为(29.52±4.27)岁、(0.05±0.22)次](P<0.05),抗苗勒管激素(AMH)水平显著低于对照组[(2.49±2.05)ng/ml vs.(4.03±2.67)ng/ml,P<0.05];(2)病例组促性腺激素(Gn)启动日FSH水平[(6.63±6.31)U/L]、Gn启动日LH水平[(2.28±1.8...     

转染组织纤溶酶原激活物及内皮型一氧化氮合酶基因的内皮细胞和平滑肌细胞共同种植于人工血管对内膜增生的影响

背景：前期研究表明,双层细胞种植能有效提高内皮细胞保留率,将组织纤溶酶原激活物基因转染到内皮细胞中能提高其细胞溶解纤维蛋白的能力。 目的：采用双细胞种植及修饰内皮的组织纤溶酶原激活物基因提高内皮细胞保留率和抗栓能力,通过内皮型一氧化氮合酶基因调控平滑肌细胞的增殖,观察对小口径人工血管通畅率的影响。 方法：以4种不同组合细胞(内皮细胞+平滑肌细胞SMC,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞,内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)种植在PTFE管腔面。将新西兰大白兔随机分成4组,4种人工血管经旁路分别移植在4组兔的腹主动脉上。 结果与结论：移植后60 d,种植内皮细胞+平滑肌细胞组和内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组内膜厚度无明显差异(P > 0.05)。与内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组相比,未转染内皮型一氧化氮合酶组(内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞）内膜明显增厚(P < 0.05);未转染组织纤溶酶原激活物组(内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)内膜较薄(P < 0.05)。提示组织纤溶酶原激活物基因转染可以促进血管内膜增生导致血管狭窄,但同时转入内皮型一氧化氮合酶基因可以抑制组织纤溶酶原激活物的促进平滑肌细胞增殖及内膜增生的作用。     

双细胞种植改善人工血管内皮细胞的保留率

背景: 前期研究表明,在人工血管内壁种植内皮细胞,使其早期快速内皮化,可以改善移植血管的通畅性,但种植的单层内皮细胞往往黏附力差,在血流的冲击下容易脱落.目的: 采用血管内皮细胞和平滑肌细胞双层种植方法,提高人工血管腔面内皮细胞的保存率.方法: 采用标准酶分离技术和细胞培养技术分离培养兔内皮细胞.采用组织贴块法分离培养兔平滑肌细胞.并分别以lacZ和GFP基因转染内皮细胞及平滑肌细胞.双层细胞种植组在聚四氟乙烯人工血管管腔面先后种植平滑肌细胞和内皮细胞,以单纯种植血管内皮细胞为对照.在体外将受试的人工血管接入作者设计的灌流模型下灌注2 h,计算比较灌注前后受试标本内皮细胞密度.体内实验,将人工血管植入兔子体内7 d,分别测定内皮细胞保留率.结果与结论: 灌注2 h后,单纯内皮细胞种植组细胞保留率为0.39±0.04,而双层细胞种植组内皮细胞保留率为0.73±0.07,双层细胞种植组细胞保存率明显高于单纯内皮细胞种植组(P<0.01).人工血管植入兔体内7 d,单纯内皮细胞种植组内皮细胞保留率为0.63±0.10,双层细胞种植组内皮细胞保留率为0 95±0.06,两组间差异有显著性意义(P<0.05).结果证实在内皮细胞和人工血管壁之间种植平滑肌细胞在体外和体内均可提高内皮细胞的保存率.