Pim-3基因转染对心肌缺氧／复氧损伤的保护作用

目的：克隆原癌基因Pim-3并构建其GFP表达质粒，探讨Pim-3对心肌细胞遭受缺氧／复氧损伤时所起的保护作用。方法：采用RT-PCR从Wistar大鼠心肌组织中提取并克隆Pim3基因，经酶切和连接反应构建GFP表达质粒，分别为pEGFP-N2-Pim-3质粒和pEGFP-N2（空载质粒），经脂质体转染人原代培养的心肌中，随机分为七组，分别为对照组、对照＋pEGFP-N2组、对照＋pEGFP-N2-Pim-3组、缺氧复氧损伤组、缺氧复氧损伤＋pEGFP-N2组、缺氧复氧损伤＋pEGFPN2-Pim-3组、缺氧预适应处理组。实验结束时全自动生化仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、四唑盐（MTT）比色试验测定细胞存活率、TUNEL法与P1-An-nexin V法测定心肌细胞凋亡、流式细胞仪测定心肌细胞线粒体膜电位（△ψm），并且测定Pim-3 mRNA及蛋白表达水平（RT-PCR、Western-blotting法）的改变。结果：经酶切证实和测序鉴定，成功克隆大鼠Pim-3基吲，并且细胞转染效率达15％；在缺氧复氧损伤后，pEGFP-N2-Pim-3转染组较pEGFP-N2转染组／未转染组的LDH值明显降低（p〈0．01），细胞存活率则明显升高（P〈0．01），凋亡细胞明显减少（P〈0．01），线粒体膜电位（△皿m）则明显升高（P〈0．01）；电镜结果表明转染了pEGFP-N2-Pim-3的心肌细胞线粒体膜大都完整，嵴清晰，较之pEGFP-N2转染组／未转染组损伤明显减轻；RT-PCR和Western-blotting结果显示，Pim-3在正常组几乎不表达，缺氧复氧损伤组明显升高（p〈0．01），缺氧预处理组的表达则比缺氧复氧损伤组更为升高（P〈0．05）。结论：外源性Pim-3基因转染人心肌细胞，对心肌细胞的缺氧／复氧损伤具有明显的保护作用。     

Paxillin和CD44v6在食管癌中的表达及其意义

目的探讨食管鳞癌和癌旁组织中Paxillin和CD44v6的表达水平与食管癌侵袭转移的关系.方法采用免疫组化方法检测正常食管上皮组织和食管原发癌组织及癌旁组织Paxillin和CD44v6表达水平.结果癌组织和癌旁1 cm组织中Paxillin和CD44v6表达阳性率均明显高于正常食管上皮组织(P＜0.01);距离原发癌组织越远,Paxillin和CD44v6阳性表达率呈减少趋势;Paxillin和CD44v6表达呈正相关.结论Paxillin和CD44v6在食管癌的恶性转化和侵袭转移过程中起重要作用.     

心肌细胞内的CI^-／HCO3-交换蛋白及其在实验性心肌缺血损伤中的作用

心肌细胞中存在阴离子交换蛋白（AE），其主要作用是转运Cl^-／HCO3^-，调节细胞内PH和细胞内[Cl^-]。文献表明AEI、AE2、AEa在心肌细胞mRNA水平均有表达。但在蛋白水平上表达的主要有nAE1和cAE3。缺血条件下，心肌细胞膜上Cl^-／HCO3^-交换蛋白可激活，导致[Cl^-]i增加与酸中毒。造成一。肌细胞损伤。除去细胞外Cl^-或运用Cl^-阻断剂，多种原因诱导的再灌注性一。律失常发生率显著降低，表现出较好的抗心律失常作用。     

解脲支原体感染患者早孕绒毛MMP_9和TIMP_1蛋白的原位杂交检测

目的:探讨解脲支原体感染对早孕绒毛表达MMP9和TIMP1蛋白的影响。方法:收集生殖道解脲支原体感染女性患者的早孕绒毛组织采用原位杂交法从RNA水平检测其MMP9和TIMP1的表达。结果:正常妊娠时MMP9和TIMP1蛋白在早孕绒毛中呈强阳性表达,而胚胎绒毛组织解脲支原体感染者其早孕绒毛中MMP9和TIMP1蛋白表达减弱,差异有显著性(P<0.05),其MMP9/TIMP1比值显著小于正常妊娠时的比值,两者比较差异有显著性(P<0.05)。结论:解脲支原体感染状态下能对早孕绒毛中MMP9和TIMP1蛋白表达造成影响,使其MMP9/TIMP1比值显著降低,从而对早孕绒毛滋养细胞侵蚀力造成影响。     

HLA-G在无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者早孕绒毛滋养细胞的表达及意义

目的:研究无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者HLA-G在母胎界面的表达变化,及其对早孕绒毛滋养细胞侵蚀力的影响。方法:采用SP法对正常早孕和无症状沙眼衣原体及解脲支原体感染患者早孕绒毛组织中HLA-G免疫组化染色并观察HLA-G的定位和分布;采用免疫印迹法检测正常与无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者早孕绒毛组织中HLA-G的表达情况;分离正常与无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者绒毛外滋养细胞并进行培养和鉴定,应用免疫细胞化学法检测HLA-G的表达。结果:免疫组化结果显示正常妊娠时HLA-G主要表达于绒毛滋养细胞;免疫印迹灰度分析显示,对比正常妊娠无症状沙眼衣原体和解脲支原体绒毛感染者的早孕绒毛中HLA-G蛋白表达减弱;培养的正常早孕绒毛外细胞滋养细胞中HLA-G呈强阳性表达,而无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染者其早孕绒毛外细胞滋养细胞中HLA-G表达减弱。结论:无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染能对早孕绒毛HLA-G表达产生影响,造成母胎界面局面免疫功能紊乱,滋养细胞容易受到母体的攻击,从而影响到滋养细胞的侵蚀能力。     

无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染对早孕绒毛滋养细胞表达CXCL12/CXCR4的影响

目的研究无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者趋化性细胞因子CXCL12／CXCR4在母胎界面的表达情况，探讨其对早孕绒毛滋养细胞侵蚀力的影响。方法采用免疫组化法观察正常早孕和无症状沙眼衣原体、解脲支原体感染患者早孕绒毛组织中的CXCL12／CXCR4的定位和分布，采用免疫印迹、RT—PCR法检测其蛋白和mRNA的表达情况；将无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者绒毛外滋养细胞进行分离培养和鉴定，应用免疫细胞化学法检测CXCL12／CXCR4的表达。结果免疫组化检测显示正常妊娠时CXCL12、CXCR4主要表达于绒毛滋养细胞、绒毛间质细胞以及蜕膜组织中；RT—PCR法和Western bolt检测显示：与正常妊娠相比，无症状沙眼衣原体和解脲支原体绒毛感染者的早孕绒毛组织中CXCL12、CXCR4 mRNA和蛋白表达减弱；正常早孕绒毛外细胞滋养细胞中CXCL12、CXCR4均呈强阳性表达，而无症状沙眼衣原体和解脲支原体绒毛感染者其绒毛外细胞滋养细胞中CXCL12、CXCR4表达减弱。结论CXCL12／CXCR4受体配体系统参与了绒毛外滋养细胞的侵蚀，无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染状态下可能影响早孕绒毛CXCL12／CXCR4受体配体系统表达，导致母胎界面出现免疫紊乱现象，从而对早孕绒毛滋养细胞侵蚀力造成影响。     

基于“风、痰、虚”理论辨证治疗支气管哮喘的新思路

支气管哮喘是呼吸科常见疾病,属中医“哮病”范畴。古代文献多认为本病的核心病机为宿痰伏肺。何明教授在临床中发现,痰饮伏肺虽为哮病之“夙根”,但“风邪”和“脏腑虚损”是哮病重要的发病因素,更是难治性哮喘反复发作的重要原因。据此总结出“三因”致哮的理论,提出了以“风、痰、虚”为核心的哮病辨证治疗新思路,在治疗重症、难治性哮喘方面取得了良好效果。     

STAT3调控P13K/Akt信号通路对食管癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响北大核心CSCD

目的：探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)对食管癌EC106细胞增殖、侵袭和迁移的调控作用以及相关蛋白表达变化。方法：利用STAT3 shRNA慢病毒载体和STAT3过表达慢病毒载体干扰食管癌EC106细胞中STAT3表达。将细胞分为对照组、沉默组和过表达组,采用CCK-8法检测细胞增殖差异,流式细胞术观察细胞周期变化,细胞划痕实验和Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力。使用RT-PCR检测STAT3、P13K和Akt mRNA表达水平,通过Western blot检测Ki67、PCNA、E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平。结果：与对照组相比,沉默组的细胞增殖显著降低（P<0.05）,而过表达组的细胞增殖增加。流式细胞术显示,与对照组相比,沉默组细胞的细胞周期在G0/G1期阻滞（P<0.05）,而过表达组S期细胞增加。此外,细胞划痕实验结果表明,沉默组细胞的迁移能力显著下降（P<0.05）,而过表达组细胞的迁移能力增强。Transwell实验结果显示,沉默组细胞的侵袭能力明显减弱（P<0.05）,而过表达组细胞的侵袭能力增强;RT-PCR结果显示,与对照组相比,沉默组细胞中STAT3、P13K、Akt mRNA含量显著降低（P<0.05）,过表达组STAT3、P13K、Akt mRNA含量显著增加;Western blot分析结果表明,相对于对照组,沉默组细胞中Ki67、PCNA和Vimentin蛋白相对表达水平明显降低,E-cadherin表达显著升高,过表达组Ki67、PCNA及Vimentin蛋白相对表达增加,E-cadherin表达显著降低（P<0.05）。结论：STAT3对食管癌EC106细胞的存活具有重要作用,沉默STAT3表达后,P13K、Akt表达下调,细胞周期进程阻滞,细胞增殖、迁移和侵袭受到抑制。     

母乳喂养与人工喂养对新生儿生长发育影响的比较

目的探讨母乳喂养与人工喂养对新生儿生长发育的影响。方法将笔者所在医院足月新生儿252例分为母乳喂养组192例和人工喂养组60例,了解出生时的体重、身长及孕产史,测量满月时的体重和身长。结果母乳喂养组在满月时体重、身长增加值均优于人工喂养组,差异具有统计学意义(体重P0.05,身长P0.01);顺产母乳喂养率比剖宫产高。结论母乳喂养是新生儿期的最佳选择,对促进新生儿生长发育具有不可替代的优越性,应大力推广母乳喂养。     

肺炎支原体肺炎患儿心肌酶CK-MB变化的临床意义

目的探讨小儿肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumonia,MPP)血心肌酶CK-MB变化的临床意义。方法对128例MPP患儿全部行心肌酶谱、心电图和胸片检测,并对其结果进行分析及随访观察。结果128例MPP患儿中,CK-MB升高的34例(26.56%),心电图异常13例(10.16%),胸片显示心胸比率均正常。大部分患儿治疗后复查心肌酶和心电图均恢复正常。结论小儿肺炎支原体肺炎发生心肌损害较常见,由于其主诉表达不清,症状、体征不典型,容易漏诊。对心肌损害的诊断CK-MB较心电图更敏感,故MPP患儿应常规查心肌酶,以便及早诊断,及时给予保护心肌治疗。