原代人脐静脉内皮细胞分离和培养方法的改进

目的建立一套高效、方便、可靠的脐静脉内皮细胞的体外分离和培养方法。方法取剖腹产新生婴儿脐带,加入Ⅰ型胶原酶消化分离人脐静脉内皮细胞,内皮专用培养基EGM-2培养传代。应用相差显微镜观察细胞形态。DiL-Ac-LDL染色证实细胞具有内皮功能。免疫荧光染色证明新分离细胞表达FⅧ相关抗原。流式细胞仪检测细胞表面表达CD31。结果原代培养细胞培养10～15d左右长成单层,细胞呈多角形,铺路石样排列。DiL-Ac-LDL染色阳性,证实细胞具内皮吞噬功能。免疫荧光检测证明细胞特异性表达FⅧ相关抗原。流式细胞仪检测证明细胞表面高表达CD31。结论通过酶灌注法消化脐静脉血管获得细胞,操作简便、高效,EGM-2培养基可保证内皮细胞具有较高纯度,细胞形态学观察和细胞生物学鉴定证明获得人脐静脉血管内皮细胞。     

改良反相高效液相色谱法监测血清中甲氨喋呤浓度及临床应用

目的建立一种反相高效液相色谱法(RP-HPLC)检测肿瘤患者血清中甲氨喋呤(MTX)浓度的方法。方法色谱柱为反相柱C18(150.00 mm×4.60 mm),柱温35℃。流动相为0.15 mol/L乙酸钠∶乙腈=89∶11(体积比),流速1.5 m l/m in。进样量为10μl,检测波长303 nm,用高氯酸沉淀血清标本的蛋白。结果血清中MTX的检测范围为0.25~100.00 mg/L,决定系数(r2)=0.999,线性关系良好,平均回收率100.95%,日内及日间相对标准差(RSD)均<5%。结论RP-HPLC适用于临床对血药浓度的监测。     

原代人脐静脉内皮细胞分离和培养方法的改进

目的建立一套高效、方便、可靠的脐静脉内皮细胞的体外分离和培养方法。方法取剖腹产新生婴儿脐带,加入Ⅰ型胶原酶消化分离人脐静脉内皮细胞,内皮专用培养基EGM-2培养传代。应用相差显微镜观察细胞形态。DiL-Ac-LDL染色证实细胞具有内皮功能。免疫荧光染色证明新分离细胞表达FⅧ相关抗原。流式细胞仪检测细胞表面表达CD31。结果原代培养细胞培养10～15d左右长成单层,细胞呈多角形,铺路石样排列。DiL-Ac-LDL染色阳性,证实细胞具内皮吞噬功能。免疫荧光检测证明细胞特异性表达FⅧ相关抗原。流式细胞仪检测证明细胞表面高表达CD31。结论通过酶灌注法消化脐静脉血管获得细胞,操作简便、高效,EGM-2培养基可保证内皮细胞具有较高纯度,细胞形态学观察和细胞生物学鉴定证明获得人脐静脉血管内皮细胞。     

兔外周血内皮祖细胞种植支架的实验研究

目的体外制备兔内皮祖细胞（EPC）种植支架,并评价其可行性。方法采用密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,接种于人纤维连接蛋白包被的培养板上,予含内皮细胞生长添加剂30μg/mL的M199培养基培养。培养2周后进行免疫荧光染色和免疫细胞化学法鉴定EPC,检测其增殖、迁移、黏附和分泌血管内皮生长因子（VEGF）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）和一氧化氮（NO）的能力。培养的EPC消化后,将其浇注到有人纤维连接蛋白包被和无包被的裸支架上,6 d后行扫描电镜和荧光显微镜检查,观察其表面细胞的生长情况。结果单个核细胞培养14 d后,出现大量梭形细胞,免疫荧光染色显示细胞可同时摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和结合FITC标记的凝集素者,表明为正在分化的EPC,同时证实其表达内皮细胞的特异标志vWF。培养2周后的EPC数量呈指数增加;EPC的黏附率为96.7%±3.2%;迁移为15±4细胞/×400视野;可分泌VEGF、G-CSF和NO。与无包被的裸支架组相比,有纤维连接蛋白包被的支架组,EPC黏附多（27.80±4.26细胞/×400视野比6.10±3.07细胞/×400视野,P〈0.05）,内皮化完全。结论EPC可向内皮细胞方向分化,并且具有高增殖、高迁移和高黏附的能力。采用EPC在体外制备细胞种植支架是可行的,而纤维连接蛋白可加速其黏附。     

血清HA、HAS2在骨肿瘤辅助诊断及疗效监测中的价值

目的 探究血清透明质酸(HA)及透明质酸合成酶(HAS)2在骨肿瘤辅助诊断中的应用价值.方法 检测35例骨肿瘤患者(骨肿瘤组)手术前、后以及40例骨感染性炎症患者(骨感染性炎症组)、60名体检健康者(正常对照组)的血清HA、HAS2水平和血清HAS2 mRNA相对表达量,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标诊断...     

相对分子质量透明质酸在脐静脉内皮细胞增殖及连接蛋白Ezrin磷酸化表达中的作用研究

目的探讨高相对分子质量透明质酸（nHA）和低相对分子质量透明质酸（oHA）对脐静脉内皮细胞增殖能力及膜-细胞骨架连接蛋白埃兹（Ezrin）表达的影响。方法分别用nHA和oHA处理人脐静脉内皮细胞,以5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）酶联免疫吸附试验（ELISA）检测透明质酸（HA）作用后细胞增殖能力;用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白免疫印迹试验（Western blot）检测HA对Ezrin mRNA和蛋白表达的影响。结果与对照组相比,72 h后oHA（10μg/mL）显著促进血管内皮细胞增殖（P〈0.001）,24 h后促进Ezrin基因的表达,48 h后促进Ezrin蛋白磷酸化表达。而nHA（200μg/mL）则抑制血管内皮细胞的增殖（P〈0.01）和Ezrin蛋白的表达磷酸化。结论oHA能有效促进血管内皮的增殖并促进其胞内连接蛋白Ezrin的表达磷酸化,nHA则抑制内皮细胞的增殖和Ezrin蛋白的表达。