MAPK/ERK信号通路在逆转乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路在逆转乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用。方法 采用人乳腺癌细胞系MCF-7和T47D分别建立他莫昔芬治疗耐药细胞株MCF-7/TAMR和T47D/TAMR。分析MCF-7细胞与MCF-7/TAMR细胞、T47D细胞与T47D/TAMR细胞增殖能力和MAPK/ERK信号通路分子表达情况的差异。分析丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）抑制剂U0126抑制MAPK/ERK信号通路后,对MCF-7/TAMR和T47D/TAMR细胞增殖的抑制作用、细胞周期分布以及转录因子表达的影响。结果 与MCF-7细胞和T47D细胞比较,MCF-7/TAMR细胞和T47D/TAMR细胞的增殖速度显著加快（P<0.05）,克隆形成能力显著增强（P<0.000 1）,MAPK/ERK信号通路分子[ERK、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（pERK）和c-MYC]表达量显著增高。采用MEK抑制剂U0126抑制MAPK/ERK信号通路后,MCF-7/TAMR细胞和T47D/TAMR细胞的增殖速度显著减慢（P<0.000 1）,细胞周期发生...     

siRNA干扰Ezrin基因对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的探讨细胞膜与细胞骨架连接蛋白埃兹（Ezrin）对人脐静脉内皮细胞生长和转移能力的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞,选择3对小干扰RNA（siRNA）序列下调Ezrin的表达,实时定量PCR和Western-blot印迹法分别检测Ezrin mRNA和蛋白表达水平的变化。BrdU ELISA法检测Ezrin siRNA干扰后细胞增殖能力的改变,伤口愈合实验检测Ezrin siRNA干扰后细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡能力。结果实时定量PCR和Western-blot印迹结果显示,siRNA干扰后Ezrin的基因和蛋白水平均显著下调;BrdU法显示Ezrin siRNA干扰后细胞生长速率降低（P〈0.05）,划痕实验显示Ezrin siRNA干扰后细胞迁移率降低（P〈0.05）,流式细胞仪检测显示Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡率升高。结论 Ezrin蛋白可影响脐静脉内皮细胞的增殖和迁移能力,推测其在血管功能和肿瘤研究中可能具有重要意义。     

siRNA干扰Ezrin基因对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的探讨细胞膜与细胞骨架连接蛋白埃兹(Ezrin)对人脐静脉内皮细胞生长和转移能力的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞,选择3对小干扰RNA(siRNA)序列下调Ezrin的表达,实时定量PCR和Western-blot印迹法分别检测Ezrin mRNA和蛋白表达水平的变化。BrdU ELISA法检测Ezrin siRNA干扰后细胞增殖能力的改变,伤口愈合实验检测Ezrin siRNA干扰后细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡能力。结果实时定量PCR和Western-blot印迹结果显示,siRNA干扰后Ezrin的基因和蛋白水平均显著下调;BrdU法显示Ezrin siRNA干扰后细胞生长速率降低(P<0.05),划痕实验显示Ezrin siRNA干扰后细胞迁移率降低(P<0.05),流式细胞仪检测显示Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡率升高。结论 Ezrin蛋白可影响脐静脉内皮细胞的增殖和迁移能力,推测其在血管功能和肿瘤研究中可能具有重要意义。     

外周血M2/M1单核细胞比例在乳腺癌诊断中的临床价值

目的比较外周血M2/M1单核细胞比例在乳腺癌患者和体检健康者间的差异,初步探讨外周血M2/M1单核细胞比例作为循环肿瘤标志物的临床意义。方法采用流式细胞术检测89例乳腺癌患者、53名体检健康者外周血M2/M1单核细胞比例,并与癌胚抗原(CEA)和糖类抗原15-3(CA15-3)进行比较分析。结果乳腺癌患者外周血M2/M1单核细胞比例明显高于体检健康者(P0.001)。外周血M2/M1单核细胞比例诊断乳腺癌的受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积大于CEA和CA15-3。结论应用流式细胞术检测的外周血M2/M1单核细胞比例具有较高的乳腺癌诊断价值,其可能成为新的用于乳腺癌诊断的循环肿瘤标志物。     

相对分子质量透明质酸在脐静脉内皮细胞增殖及连接蛋白Ezrin磷酸化表达中的作用研究

目的探讨高相对分子质量透明质酸(nHA)和低相对分子质量透明质酸(oHA)对脐静脉内皮细胞增殖能力及膜-细胞骨架连接蛋白埃兹(Ezrin)表达的影响。方法分别用nHA和oHA处理人脐静脉内皮细胞,以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测透明质酸(HA)作用后细胞增殖能力;用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测HA对Ezrin mRNA和蛋白表达的影响。结果与对照组相比,72 h后oHA(10μg/mL)显著促进血管内皮细胞增殖(P<0.001),24 h后促进Ezrin基因的表达,48 h后促进Ezrin蛋白磷酸化表达。而nHA(200μg/mL)则抑制血管内皮细胞的增殖(P<0.01)和Ezrin蛋白的表达磷酸化。结论oHA能有效促进血管内皮的增殖并促进其胞内连接蛋白Ezrin的表达磷酸化,nHA则抑制内皮细胞的增殖和Ezrin蛋白的表达。     

熊果酸对兔外周血内皮祖细胞数量和功能的影响

目的观察熊果酸对兔外周血内皮祖细胞(EPC)数量和功能的影响并探讨其可能的作用机制。方法以密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,并接种于纤连蛋白包被的培养板上,予含内皮细胞生长添加剂(ECGS)的M199培养基培养14天,应用免疫荧光染色及流式细胞仪检测、鉴定内皮祖细胞,分别以MTT法、改良的Boyden小室、黏附能力测试、ELISA法观察不同浓度(5,10,50,100mmol/L)熊果酸对培养的EPC增殖、迁移、黏附及分泌功能的影响;同时观察糖皮质激素受体拮抗剂RU486预作用的效果。结果熊果酸可浓度依赖性减少兔EPC的数量,并减弱其增殖、迁移、黏附和分泌能力;RU486可部分逆转熊果酸的上述抑制作用。结论熊果酸可能部分通过糖皮质激素受体的介导影响EPC的数量和功能,而这种抑制作用可能使其在抗动脉粥样硬化和抗再狭窄的应用中受限。     

治疗药物浓度监测用质控物的制备及其质控方法的应用

目的自行制备室内质控物,用于检测治疗药物监测（TDM）系统的内部质量控制。方法将适量的甲氨喋呤标准品加入正常人体检的血清中配制成所需浓度,置-80℃保存。采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定其浓度。结果经过长期观察测定,其测定均值在1年内的差异无统计学意义（在靶值的±15％允许误差范围内）。结论自行制备的室内质控物具有良好的稳定性,可满足室内质控的要求。     

透明质酸寡糖片段促进血管内皮细胞增殖的研究

目的：研究分离纯化的透明质酸寡糖片段（o-HA）对血管内皮细胞增殖的作用。方法：选用猪髂总动脉内皮细胞（PIEC）做为靶细胞，人胚肾293细胞做为对照细胞，应用本实验室分离纯化的o-HA（4-12-mer）配成一系列浓度（0、1、3、5、10及20μg／ml），加入靶细胞及对照细胞继续培养不同时间（0、6、12、24、48、72及96h），从细胞计数、细胞周期分布和单层血管内皮细胞损伤修复来观察血管内皮细胞的增殖情况。结果：10μg／mlo-HA作用于PIEC时能显著促进增殖，继续增加o-HA的浓度，增殖作用未随之增强；o-HA刺激培养12hPIEC即明显增生，至72h达高峰（P〈0．05）；oHA对PIEC损伤模型也有显著的促愈合作用。结论：o-HA能显著促进血管内皮细胞的增殖。