肝X受体对血管内皮细胞EA.hy926内皮素1表达的调节作用

目的 研究肝X受体(liver X receptor,LXR)对血管内皮细胞珠EA.hy926中内皮素1(endo-thelin-1,ET-1)表达的影响,并初步探讨LXR调节ET-1表达的分子机制.方法 在培养的EA.hy926中加入LXR的特异性配体GW3965,作用28 h后收集细胞及培养上清液.细胞经Trizol法提取总RNA,以RT-PCR检测ET-1 mRNA水平的变化,以放射免疫法测定细胞上清液ET-1含量的变化;将克隆有ET-1启动子区的荧光素酶报告基因质粒phET1-Luc(克隆于pGL3-Basic)、pCMX-LXRα、pCMX-RXRα和内参照质粒psv-β-gal共同转染于EA.hy926细胞,经荧光素酶报告基因检测研究LXR对ET-1启动子活性的影响,从而初步了解LXR调节血管内皮细胞ET-1表达的分子机制.结果 LXR特异性配体GW3965能够抑制血管内皮细胞EA.hy926中ET-1的mRNA和蛋白表达水平,并且抑制ET-1启动子的转录活性.结论 活化血管内皮细胞LXR可下调ET-1的表达,且该作用与LXR抑制ET-1基因启动子的活性有关.     

鼠疫耶尔森菌重组质粒pVAX1/Fl-V的构建及其免疫效果的研究

目的获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组真核表达质粒pVAX1／F1-V，并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌Fl和V编码基因，分别与pGEM-T连接测序，构建pVAX1／F1-V融合重组质粒，转染Cos-7细胞，用Western blot方法鉴定目的蛋白的表达，重组质粒pVAXI／F1．V加GM．CSF佐剂免疫BALB／c小鼠，观察免疫效果，400个半数致死量（uk）强毒鼠疫菌皮下攻毒观察保护率。结果pVAX1／F1-V在Cos-7细胞中表达，免疫鼠体内产生特异性抗体，通过抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定表明所构建DNA疫苗以诱发TH1型免疫为主，攻毒保护率达60％。结论成功构建F1-V融合蛋白真核表达载体，具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力，对强毒鼠疫菌皮下攻毒有一定的保护效力，为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。     

人类bcl-2基因在小鼠NIH/3T3细胞中的作用观察

本实验探讨了人类ｂｃｌ－２基因对小鼠ＮＩＨ／３Ｔ３细胞增殖和存活能力的影响。结果表明，人类ｂｃｌ－２基因转染对正常培养条件下的细胞的增殖和存活能力无明显影响，但能增加细胞对血清撤退和ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＳ）两种致凋亡因素的抵抗作用。这一研究丰富了ｂｃｌ－２基因调控细胞凋亡的资料，并为深入研究奠定了基础     

从噬菌体构象型7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽

目的 :从噬菌体构象型 7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽。方法 :用重组人BLyS筛选噬菌体构象型 7肽库 ,用间接ELISA、竞争ELISA和细胞增殖活性试验鉴定噬菌体克隆。结果 :经过 3轮亲和筛选 ,噬菌体的回收率增加 ,阳性克隆得到富集。所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制BLyS刺激细胞增殖的活性。结论 :获得了噬菌体呈现的能够抑制BLyS的两个短肽。     

病例教学法在生物化学教学中的评价

第三军医大学近年在临床医学、预防医学和检验医学等不同专业五年制本科的生物化学教学中进行了病例教学法尝试和探索。通过 2 0 0名学生的问卷调查 ,结果表明 :绝大多数学生认为病例教学能激发学习兴趣 ,提高能力 ,并能引导将生化理论与临床问题相联系 ;约有 65%的学生认为病例教学不能提高学习效率。进一步分析发现 ,上述结果在不同专业的五年制学生之间没有明显差异。     

宫颈癌中端粒酶抑制因子PinX1基因变异位点分析

目的探讨端粒酶抑制因子PinX1(Pin2/TRF1-interacting protein X1)在宫颈癌细胞系、正常宫颈组织标本、宫颈癌组织标本中的变异情况。方法采用3种宫颈癌细胞系(加以3种淋巴瘤细胞系、1种乳腺癌细胞系作为参照)、28例正常宫颈组织及52例宫颈癌组织标本。提取基因组DNA为模板,PCR扩增PinX1基因全部7个外显子及其部分侧翼序列,PCR纯化产物直接测序从而检测PinX1基因的变异情况,SPSS统计学软件进行数据分析。结果于宫颈癌细胞系中发现3个突变位点,于52例宫颈癌组织中发现5个变异位点,其中位于第7外显子的Ser254Cys(23.1%)及位于第2内含子的IVS2+18 G→A(51.9%)变异率与正常宫颈组织相比有显著差异(P<0.05),位于第2内含子的1个变异位点IVS2+64 C→A(9.3%)为首次报道。结论在宫颈癌中,可能存在PinX1基因的变异新位点,对PinX1基因变异的研究,可能为宫颈癌的诊断、防治和个体化诊疗提供潜在的新靶标。     

PNRC多肽通过影响Ras信号途径抑制BT-474细胞的增殖

背景与目的：根据富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白（proline-rich nuclear receptor coregulatory protein, PNRC）与Grb2相互作用位点资料和其他基于干扰Grb2／SH3与SOS的相互作用的富含脯氨酸短肽的设计原则，我们设计、合成了基于PNRC的抗Ras、PTD融合多肽（PTD—PARP），研究该多肽在BT474乳腺癌细胞中对Ras信号途径的影响及其抗肿瘤增殖活性。方法：用多肽合成仪合成PNRC的抗Ras PTD融合多肽PTD—PARP和其单独的PTD多肽。以PTD多肽为对照，将增加浓度的PTD—PARP与分离的、EGF刺激的BT474细胞裂解物共温育，采用免疫共沉淀结合Western blot检测Grb2免疫共沉淀复合物中SOS和PNRC的含量情况。用PTD—PARP-琼脂糖凝胶4B活化偶联磁珠免疫共沉淀BT474细胞裂解物，采用PI3K，Nck和Grb2的抗体检测沉淀复合物中这些含SH3结构域的蛋白与PTD-PARP的结合能力。Western blot检测PTD—PARP对EGF刺激的BT474细胞内Ras和MAPK活化的影响。采用软琼脂克隆形成实验考察PTD—PARP对BT474细胞体外增殖的影响。结果：PTD—PAR能以剂量依赖方式抑制SOS、PNRC与Grb2的结合，它与Grb2的结合具有特异性，PTD—PAR能降低BT474细胞中EGF刺激的Ras和MAKP活化，并能显著抑制BT474细胞的体外软琼脂克隆形成。结论：PNRC抗Ras PTD融合多肽可通过影响Ras信号途径抑制乳腺癌细胞的增殖。     

培养创新意识的分子生物学教学策略研究与实践

针对研究生分子生物学教学中存在的弊端,从教学内容和考核方式等方面进行了改革。实践表明,在培养学生的创新意识方面收到了良好的效果。     

左旋棉酚通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬及意义

目的 探讨左旋棉酚诱导淋巴瘤Daudi细胞发生自噬可能机制及对细胞存活率的影响.方法 采用CCK-8法检测左旋棉酚在体外对Daudi细胞增殖抑制作用的影响;采用台盼蓝排斥实验检测不同处理对细胞存活率的影响;Western blot检测细胞中自噬相关蛋白LC3、ERK和磷酸化ERK的表达情况;AO染色观察经左旋棉酚处理后Daudi细胞酸性小体的变化情况.结果 左旋棉酚能剂量依赖性地抑制Daudi细胞的增殖和促进细胞死亡;AO染色后经左旋棉酚处理的细胞内可观察到大量的酸性小体形成;Western blot显示左旋棉酚能显著上调自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达及增强磷酸化ERK的水平,抑制ERK的磷酸化能下调LC3Ⅱ的表达;ERK抑制剂U0126及自噬抑制剂CQ和3-MA均能显著增强左旋棉酚的杀细胞效力.结论 左旋棉酚可能通过ERK通路诱导Daudi细胞发生自噬,抑制ERK介导的自噬能够显著增强左旋棉酚的抗瘤效应.     

鼠疫菌重组质粒pcDNATE/F1-V的构建及其免疫效果的研究

目的 获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组质粒pcDNATE／E1-V,并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序,构建pcDNATE／F1-V融合重组质粒,转染COS-7细胞,用Western blot方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒pcDNATE／E1-V加集落刺激因子(GM-CSF)免疫Balb／c小鼠,观察免疫效果。结果pcDNATE／F11-V在COS-7细胞中表达,免疫鼠体内产生特异性抗体,抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定结果表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pcDNATE／F1-V,其具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。