miR-134通过下调叉头盒蛋白M1抑制肝细胞癌细胞增殖

目的 探讨miR-134下调叉头盒蛋白M1 (forkhead box M1,FOXM1)的机制及其影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用.方法 应用CCK-8法检测miR-134对HCC细胞增殖的作用;经Western blot和Real-time PCR检测人正常肝细胞L02和5种HCC细胞系中FOXM1和miR-134的表达;用miR-134模拟物(miR-134 mimic)或miR-134抑制剂(miR-134 inhibitor)转染HCC细胞后,经Western blot和Real-time PCR检测FOXM1及其下游靶基因CyclinD1的表达;应用生物信息学分析miR-134在人FOXM1 3'-UTR的可能结合位点,通过报告基因检测实验分析miR-134与FOXM1的3'-UTR的特异性结合;将miR-134 mimic和FOXM1表达质粒(无3'-UTR)共转染于HCC细胞后,经CCK-8法检测细胞的增殖情况.结果 miR-134可显著抑制HCC细胞增殖(P＜0.05);与人正常肝细胞L02相比,miR-134在HCC细胞中的表达明显降低(P＜0.05),而FOXM1蛋白表达明显增强,二者存在负相关(R2=0.705,P＜0.05);miR-134可显著下调FOXM1蛋白及其下游靶基因CyclinD1的表达(P＜0.05);报告基因检测实验证实miR-134可特异性结合于FOXM1 mRNA的3'-UTR(P ＜0.01);细胞增殖实验检测结果显示,过表达缺失3'-UTR的FOXM1可显著减弱miR-134对HCC细胞增殖的抑制效应(P＜0.05).结论 miR-134通过靶向结合于FOXM1的3'-UTR而下调FOXM1蛋白的表达,从而抑制HCC细胞的增殖.     

非基因组活性对雌激素受体阳性乳腺癌细胞Herceptin敏感性的影响

目的探讨雌激素(estrogen,E2)通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)非基因组活性干扰ER阳性(ER+)乳腺癌细胞对人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)的人源化单克隆抗体赫赛汀(Herceptin)的敏感性及其机制。方法采用Western blot和瞬时转染结合荧光素酶报告基因分析,确定BT-474乳腺癌细胞(ER+/HER2+)和SKBR-3乳腺癌细胞(ER-/HER2+)作为对比研究对象;在E2存在与否的情况下,采用细胞增殖分析比较Heregulin(HRG)诱导的BT-474和SKBR-3细胞对Herceptin敏感性的改变;采用Western blot检测HER2途径下游关键分子MAPK的磷酸化水平。结果在没有E2存在的情况下,Herceptin可有效抑制BT-474和SKBR-3细胞的增殖(P<0.01);在E2存在的情况下,Herceptin对BT-474细胞增殖的抑制效应消失(P<0.01),同时,Herceptin不能降低MAPK的磷酸化;这些现象在SKBR-3乳腺癌细胞中却不会出现。结论 E2可通过ER非基因组活性影响ER+的乳腺癌细胞Herceptin的治疗效果,并可能参与了Herceptin抵抗的发生。     

利用学科专题论坛培养八年制学生科研意识和创新能力

八年制医学教育要求更高的教学目标和更好的教学模式.第二课堂活动在培养具有创新意识、科学思维的创新人才方面有着重要作用.通过开展“代谢异常与相关疾病”的学员论坛,不仅加强了专业基础知识与临床病例之间的联系,而且很好的激发和培养了八年制学员的科研兴趣和创新能力.     

肿瘤的基因治疗策略

本文简要介绍了当今肿瘤基因治疗的基本策略，包括保护正常细胞，同时杀伤瘤细胞，抑制癌基因的表达以及基因水平上的免疫修饰等。     

大鼠烧伤复合内毒素血症致肝脏细胞凋亡实验研究

目的 研究大鼠烧伤复合内毒素血症早期肝细胞的凋亡规律，并初步探讨其机制。方法 烧注组以大鼠体表面积20％Ⅲ度烧伤复合内毒素血症为模型，与正常对照、单烧组、单注组比较，观察其肝脏病理变化、TUNEL检测、DNA凝胶电泳的改变，并测量血浆MDA浓度和SOD活性。结果 烧注组凋亡细胞的数量明显比后两组多且发生时间早，于伤后6h达到峰值。血浆MDA含量升高趋势和SOD活性降低趋势与肝细胞凋亡发生相一致。结论 烧伤复合内毒素血症大鼠早期肝细胞损伤以凋亡为主，脂质过氧化是其发生机制之一。     

PNRC多肽通过影响Ras信号途径抑制BT-474细胞的增殖

背景与目的：根据富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白（proline-rich nuclear receptor coregulatory protein, PNRC）与Grb2相互作用位点资料和其他基于干扰Grb2／SH3与SOS的相互作用的富含脯氨酸短肽的设计原则，我们设计、合成了基于PNRC的抗Ras、PTD融合多肽（PTD—PARP），研究该多肽在BT474乳腺癌细胞中对Ras信号途径的影响及其抗肿瘤增殖活性。方法：用多肽合成仪合成PNRC的抗Ras PTD融合多肽PTD—PARP和其单独的PTD多肽。以PTD多肽为对照，将增加浓度的PTD—PARP与分离的、EGF刺激的BT474细胞裂解物共温育，采用免疫共沉淀结合Western blot检测Grb2免疫共沉淀复合物中SOS和PNRC的含量情况。用PTD—PARP-琼脂糖凝胶4B活化偶联磁珠免疫共沉淀BT474细胞裂解物，采用PI3K，Nck和Grb2的抗体检测沉淀复合物中这些含SH3结构域的蛋白与PTD-PARP的结合能力。Western blot检测PTD—PARP对EGF刺激的BT474细胞内Ras和MAPK活化的影响。采用软琼脂克隆形成实验考察PTD—PARP对BT474细胞体外增殖的影响。结果：PTD—PAR能以剂量依赖方式抑制SOS、PNRC与Grb2的结合，它与Grb2的结合具有特异性，PTD—PAR能降低BT474细胞中EGF刺激的Ras和MAKP活化，并能显著抑制BT474细胞的体外软琼脂克隆形成。结论：PNRC抗Ras PTD融合多肽可通过影响Ras信号途径抑制乳腺癌细胞的增殖。     

IL—2Rγ研究现状

ＩＬ－２受体γ链（ＩＬ－２Ｒγ）为细胞因子受体超家族成员，是一分子量为６４ＫＤａ的膜蛋白。它是多种细胞因子受体的功能性组成单位，参与调探淋巴细胞的分化发育和成熟、Ｔ细胞致敏以及自身免疫耐受的形成等多种免疫学功能。ＩＬ－２Ｒγ基因突变可导致Ｘ染色体连锁的重症联合免疫缺陷（ＸＳＣＩＤ）等疾病。本文深入探讨了γ链的功能机制，这将有助于多种相关疾病的诊断与治疗。     

从噬菌体构象型7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽

目的 :从噬菌体构象型 7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽。方法 :用重组人BLyS筛选噬菌体构象型 7肽库 ,用间接ELISA、竞争ELISA和细胞增殖活性试验鉴定噬菌体克隆。结果 :经过 3轮亲和筛选 ,噬菌体的回收率增加 ,阳性克隆得到富集。所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制BLyS刺激细胞增殖的活性。结论 :获得了噬菌体呈现的能够抑制BLyS的两个短肽。     

鼠疫菌重组质粒pcDNATE/F1-V的构建及其免疫效果的研究

目的 获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组质粒pcDNATE／E1-V,并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序,构建pcDNATE／F1-V融合重组质粒,转染COS-7细胞,用Western blot方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒pcDNATE／E1-V加集落刺激因子(GM-CSF)免疫Balb／c小鼠,观察免疫效果。结果pcDNATE／F11-V在COS-7细胞中表达,免疫鼠体内产生特异性抗体,抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定结果表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pcDNATE／F1-V,其具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。     

人BLyS免疫抑制分子的克隆、表达及纯化

目的用异源性T辅助细胞表位修饰人可溶性BLyS突变体（msBLyS）,构建和表达BLyS的新型免疫抑制分子。方法经PCR方法构建msBLyS cDNA,然后分别与鸡卵清溶菌酶（HEL）或卵清蛋白（OVA）Th表位DNA序列重组,行序列测定后,构建于高效原核表达载体pQE-80L并转化E．coli DH5α,经帆诱导表达,Ni—NTA层析纯化后,通过细胞增殖实验检测融合蛋白的生物学活性。结果DNA测序表明,重组HELmsBLyS和OVAmsBLyS的DNA序列与文献报道的序列完全一致。HELmsBLyS和OVAmsBLyS在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达。经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度可达90％以上。活性检测发现,重组蛋白均不能促进Raji细胞增殖。结论成功构建了BLyS的免疫抑制分子,并获得了高效表达及纯化,纯化产物已丧失了sBLyS所具有的细胞增殖活性,为进一步探讨其治疗作用打下了基础。