双语教学在医学八年制生物化学教学中的改革探索

医学八年制教育模式目标是培养高素质复合型人才,熟练掌握和综合应用专业英语是八年制教学中的重点.生物化学是一门涵盖内容广泛的基础医学必修课程,与诸多医学基础学科广泛联系,相互交叉、相互渗透.在医学八年制生物化学教学中开展双语教学顺应了培养国际化高素质综合型人才的需要,为今后学生能在学习及工作中进行国际交流与合作打下坚实基础.本文从多年的探索及不断改革中探讨双语教学在医学八年制生物化学教学中的应用.     

胃癌单抗MGd1的噬菌体呈现型ScFv的制备

目的 制备胃癌单抗MGd1的单链可变区片段（single chain variable fragment,ScFv),为胃癌体内诊疗研究提供候选靶向载体分子。方法 从MGd1杂交瘤分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因（VH和VLDNA）,二者经linkerDNA连接形成ScFvDNA,将ScFvDNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv,以高表达MGd1结合抗原的细胞株KATOⅢ对重组噬菌体抗体ScFv进行峡谷轮筛选后;随机挑取克隆经ELISA筛选MGd1ScFv单克隆,并对其结合抗原的能力进行鉴定。结果 VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp,经两轮亲和筛选后,在随机筛检的30个克隆中得到12个噬菌体呈现型MGd1ScFv单克隆,其中结合抗原能力强的克隆有5个。结论 用噬菌体呈现技术成功地获得了单抗MGd1的ScFv,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础。     

Androsterone在血管内皮细胞Eahy926中对SR-BI表达的影响

目的 研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对B类清道夫受体Ⅰ(scavenger receptor class B typeI,SR-BI)表达的调控.方法 FXR配体androsterone不同浓度处理Eahy926细胞,RT-PCR检测FXR特异靶基因小异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner,SHP)表达量的变化.RT-PCR和Real-time PCR分析经androsterone处理后Eahy926细胞中SR-BI mRNA表达的变化.用Western blot检测SR-BI蛋白表达的变化.结果 经androsterone刺激,Eahy926细胞中SHP的表达明显升高,表明FXR被活化.在经androsterone刺激的血管内皮细胞中,SR-BI在转录水平和翻译水平,表达均显著上升.结论 FXR可在血管内皮细胞系Eahy926中上调SR-BI的表达水平.

Abstract：

Objective To investigate the effect of FXR on scavenger receptor class B type Ⅰ(SR-BI) expression.Methods Human vascular endothelium Eahy926 cells were treated with FXR agonist androsterone,and the specific target gene of FXR SHP mRNA was detected by RT-PCR. SR-BI mRNA and protein were determined using RT-PCR, real-time PCR and Westem blotting. Results The level Of SHP mRNA in Eahy926 cells increased after androsterone treatment at different concentrations for 24 h,demonstrating FXR activation in the cells.RT-PCR,real-time PCR and Western blotting detected increased SR-BI expression at both mRNA and protein levels after FXR activation.Conlusion FXR increases the expression of SR-BI in human vascular endothelium cells.     

miR-134通过下调叉头盒蛋白M1抑制肝细胞癌细胞增殖

目的 探讨miR-134下调叉头盒蛋白M1 (forkhead box M1,FOXM1)的机制及其影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用.方法 应用CCK-8法检测miR-134对HCC细胞增殖的作用;经Western blot和Real-time PCR检测人正常肝细胞L02和5种HCC细胞系中FOXM1和miR-134的表达;用miR-134模拟物(miR-134 mimic)或miR-134抑制剂(miR-134 inhibitor)转染HCC细胞后,经Western blot和Real-time PCR检测FOXM1及其下游靶基因CyclinD1的表达;应用生物信息学分析miR-134在人FOXM1 3'-UTR的可能结合位点,通过报告基因检测实验分析miR-134与FOXM1的3'-UTR的特异性结合;将miR-134 mimic和FOXM1表达质粒(无3'-UTR)共转染于HCC细胞后,经CCK-8法检测细胞的增殖情况.结果 miR-134可显著抑制HCC细胞增殖(P＜0.05);与人正常肝细胞L02相比,miR-134在HCC细胞中的表达明显降低(P＜0.05),而FOXM1蛋白表达明显增强,二者存在负相关(R2=0.705,P＜0.05);miR-134可显著下调FOXM1蛋白及其下游靶基因CyclinD1的表达(P＜0.05);报告基因检测实验证实miR-134可特异性结合于FOXM1 mRNA的3'-UTR(P ＜0.01);细胞增殖实验检测结果显示,过表达缺失3'-UTR的FOXM1可显著减弱miR-134对HCC细胞增殖的抑制效应(P＜0.05).结论 miR-134通过靶向结合于FOXM1的3'-UTR而下调FOXM1蛋白的表达,从而抑制HCC细胞的增殖.     

人mBAFF在原核系统的可溶性表达及功能鉴定

目的利用含重组质粒pQE80L-mBAFF的DH5α大肠杆菌，优化表达B细胞活化因子的突变蛋白（mBAFF）。方法研究mBAFF的体外诱导条件，包括诱导时间、IPTG浓度、诱导温度对表达量的影响。对表达条件进行优化后进行大量表达，经Ni^2＋ NTA亲和层析和SepharcryL S200凝胶过滤层析纯化。流式检测突变蛋白与细胞结合的能力以及MTT检测突变蛋白的生物学活性。结果最佳表达条件是诱导时间4h，诱导温度37℃，IPTG终浓度0．2mmol／L。mBAFF占菌体总蛋白的35％，蛋白纯度达98％以上，所获突变蛋白能与淋巴细胞表面受体结合，但不能刺激淋巴细胞增殖。结论优化可溶性表达后能提高mBAFF蛋白质在DH5α大肠杆菌表达，并经Ni^2＋ NTA亲和层析和Sephareryl S200凝胶过滤层析得到纯度高的表达产物，所获结果为进一步研究创造了条件。     

胃癌单克隆抗体MG7的噬菌体呈现型抗独特型单链抗体ScFv的制备

目的 获得胃癌单克隆抗体（简称单抗）MG7的噬菌体呈现型抗独特型单链抗体ScFv（抗－Id ScFv），为研制MG7的抗－Id ScFv重组胃癌瘤苗奠定基础。方法 以MG7单抗与匙孔血蓝蛋白（KLH）的交联物免疫Balb/c小鼠，取脾分离mRNA。以逆转录聚合酶链反应技术分别扩增抗体重、轻链可变区基因（VH和VL），经linkerDNA连接ScFv基因片段。将ScFv DNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1。在辅助噬菌体M13K07的作用下，获得重组噬菌体抗体ScFv。以单抗MG7对重组噬菌体抗ScFv进行四轮筛选后，随机挑取克隆，经噬菌体ELISA筛选抗－IdScFv单克隆，并对其所属抗－Id类型进行初步鉴定。结果 VH、VL和ScFvDNA分析约为340、320和750bp。经富集后，在随机筛检的60个克隆中得到24个噬菌体呈现型抗－IdScFv单克隆，阳性率为40％。在24个克隆中，有5个为β或γ型抗－IdScFv。结论 用噬菌体抗体技术能够成功地获得单抗MG7的抗－IdScFv，为开展用抗－IdScFv防治胃癌的研究创造了条件。     

PNRC多肽通过干扰核受体途径抑制BT474细胞的增殖

目的:运用核受体辅活化子PNRC的抗Ras PTD融合多肽(PTD-PARP)研究其在乳腺癌细胞BT474中的分布、对核受体信号传导途径的影响及其抗肿瘤细胞增殖活性.方法:用多肽合成仪合成PTD-PARP、单独的PARP和PTD多肽以及FTFC标记的PTD-PARP、PARP.HPLC分析和纯化后,荧光显微镜结合流式细胞仪检测PTD-PARP、PARP在BT474细胞中的分布.虫荧光素酶报告基因检测PTD-PARP对野生型PNRC辅活化ER反式激活功能的影响.MTS、软琼脂克隆形成实验检测PTD-PARP对BT474细胞的抗增殖活性.结果:PTD-PARP能进入BT474细胞,抑制野生型PNRC辅活化ER的反式激活功能并抑制BT474细胞的增殖.结论:PNRC抗RasP DT融合多肽可通过干扰核受体途径抑制乳腺癌细胞的增殖.     

PNRC肽通过影响Ras信号途径抑制BT-474细胞的增殖

背景与目的:根据富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白(proline-rich nuclear receptor coregulatory protein,PNRC)与Grb2相互作用位点资料和其他基于干扰Grb2/SH3与SOS的相互作用的富含脯氨酸短肽的设计原则,我们设计、合成了基于PNRC的抗Ras、PTD融合多肽(PTD-PARP),研究该多肽在BT474乳腺癌细胞中对Ras信号途径的影响及其抗肿瘤增殖活性.方法:用多肽合成仪合成PNRC的抗Ras PTD融合多肽PTD-PARP和其单独的PTD多肽.以PTD多肽为对照,将增加浓度的PTD-PARP与分离的、EGF刺激的BT474细胞裂解物共温育,采用免疫共沉淀结合Western blot检测Grb2免疫共沉淀复合物中SOS和PNRC的含量情况.用PTD-PARP-琼脂糖凝胶4B活化偶联磁珠免疫共沉淀BT474细胞裂解物,采用P13K,Nck和Grb2的抗体检测沉淀复合物中这些含SH3结构域的蛋白与PTD-PARP的结合能力.Western blot检测PTD-PARP对EGF刺激的BT474细胞内Ras和MAPK活化的影响.采用软琼脂克隆形成实验考察PTD-PARP对BT474细胞体外增殖的影响.结果:PTD-PARP能以剂量依赖方式抑制SOS、PNRC与Grb2的结合,它与Grb2的结合具有特异性,PTD-PARP能降低BT474细胞中EGF刺激的Ras和MAKP活化,并能显著抑制BT474细胞的体外软琼脂克隆形成.结论:PNRC抗Ras PTD融合多肽可通过影响Ras信号途径抑制乳腺癌细胞的增殖.     

睾酮对乳腺癌细胞中FEN1表达的影响

目的 探讨睾酮(testosterone,T)在乳腺癌细胞中对瓣状核酸内切酶(flap endonuclease 1,FEN1)表达的影响及其机制.方法 以MCF-7作为研究对象,采用RT-PCR观察雌二醇(17 β-estradiol,E2)单独作用以及分别与雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI182,780(ICI)和MAPK途径抑制剂U0126共同作用时FEN1表达的变化.以MCF-7aro(芳香化酶过表达的MCF-7)作为研究对象,采用RT-PCR观察加入单独的睾酮以及睾酮和芳香化酶抑制剂来曲唑(letro-zole)共同作用时FEN1表达的变化;采用Western blot观察睾酮单独作用以及分别与来曲唑和U0126共同作用时FEN1、p-ERK和p-Elk的变化.结果 与对照组比较,加入雌二醇后MCF-7细胞中FEN1 mRNA的表达升高2.04倍(P＜0.01),加入ICI和U0126后分别降低10.63倍和2.17倍(P＜0.01).加入睾酮后MCF-7aro细胞中FEN1 mRNA的表达升高1.66倍(P＜0.01),蛋白的表达升高1.80倍(P＜0.01);加入来曲唑后FEN1 mRNA的表达下降2.38倍,蛋白的表达降低1.84倍,加入U0126后蛋白的表达降低2.28倍(P＜0.01);加入睾酮后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别升高2.28倍和2.60倍(P＜0.01),加入来曲唑后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别降低2.60倍和2.37倍(P＜0.01),加入U0126后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别降低10.38倍和119.50倍(P＜0.01).结论 睾酮可通过MAPK途径上调MCF-7 aro细胞中FEN1的表达.     

以学科兴趣小组培养临床五年制学生科研思维及创新能力

在临床医学五年制学生的培养过程中科研思维及创新能力的培养是学生基本素质和后续长远发展的关键环节,在基础课程阶段开展学科兴趣小组是达到这一目标的有效措施。在五年制学生中通过开展生物化学兴趣小组,可取得较理想的效果,开启了学生的科研思维,培养了其创新能力。