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161.
目的:优化诱导条件大批量表达生物素化酶BirA底物肽(BSP)与HLA-A*0203重链胞外域的融合蛋白(HLA—A*0203、BSP),并制备负载HLA-A*0203限制性EB病毒抗原肽EBNA3 596-604的四聚体(HIA—A}0203/SVR)。方法:以HLA—A*0203-BSP原核表达载体转化E.coli BL21(DE3)菌株,优化诱导条件进行大批量重组蛋白的表达。通过稀释法复性可溶性HLA-A*0203/SVR单体,然后以BirA对其进行生物素化,并以阴离子交换树脂纯化。将纯化的HLA-A*0203/SVR单体与荧光素标记的链亲和素按4:1的比例混合形成四聚体,通过对特异性CTL进行染色验证其结合活性。结果:当IPTG的浓度为0.4mmol/L,于37℃诱导过夜后,融合蛋白的表达最多。该重组蛋白相对分子质量(Mr)为34003,与HLA—A*0203-BSP的理论Mr相一致。该重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀部分,约占菌体总蛋白的30%。负载抗原肽的可溶性HLA-A*0203/SVR单体是在同时存在HLA-A*0203,BSP、β2微球蛋白及HLA-A*0203限制性抗原肽SVR的情况下通过稀释法复性而获得。该单体生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4:1的比例混合后即形成四聚体。流式细胞术(FCM)分析证实,该四聚体具有与HLA—A2^+供者特异性CTL结合的活性。结论:HLA—A*0203-BSP融合蛋白在优化条件下获得高效表达。以此蛋白制备的HLA-A*0203/SVR四聚体具有与HLA-A2^+供者特异性CTL结合的活性,为研究HLA—A*0203个体EB病毒特异性CTL的免疫应答打下了基础。 相似文献
162.
目的探讨慢性充血性心力衰竭(CHF)患者存在胰岛素抵抗(IR)的机制以及雷米普利对CHF患者胰岛敏感性的影响.方法对40例CHF患者检测雷米普利(2.5mg~5mg,1次/d)治疗前和治疗4周后及25例健康对者空腹血糖(FPG)、空腹血清胰岛素(FINS)和空腹血清C肽(CP)水平,并计算出FPG/FINS比值、IAI值[IAI=-ln(F×FINS)]作为机体胰岛素敏感性评价指标,分别比较CHF组与对照组、CHF组患者治疗前后的胰岛素敏感性变结果CHF组患者的胰岛素敏感性明显低于对照组,FINS水平高于对照组.治疗4周后,雷米普利组CHF患者的岛素敏感性显著增加.结论①CHF患者存在继发性IR和/或高胰岛素血症,IR和高胰岛素血症可能与CHF患者功能进一步恶化有关.②雷米普利有改善CHF患者IR的作用. 相似文献
163.
164.
165.
166.
目的 将Arg-Gly-Asp(RGD)肽偶联到壳聚糖(cH)材料表面,并制备成包载质粒DNA的纳米粒子,以未偶连RGD的壳聚糖载质粒DNA作为对照,进行体外内皮细胞转染,观察其是否能提高对内皮细胞的转染效率.方法 以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)为偶联剂,通过酰胺键将RGD肽偶联到壳聚糖表面,对其进行表征,并以未偶连RGD的壳聚糖作为对照,制备载pEGFP-C1质粒DNA纳米粒子,比较2者对Hy926细胞的转染效率.结果 壳聚糖-RGD(CH-RGD)载基因纳米粒子转染Hy926细胞的效率明显高于未偶连RGD的壳聚糖载基因纳米粒子(35.7%vs 14.3%,P<0.001).结论 RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子可用于体外细胞转染,其对细胞的转染效率明显优于未偶连RGD的壳聚糖. 相似文献
167.
目的 探索 pp60c-src( + ) 在神经生长端的表达特征及其生理意义。方法 用免疫细胞化学方法检测 pp60c-src( + ) 在初代培养鸡胚脊神经节细胞内的分布特征。结果 pp60c -src( + ) 的免疫活性分布在神经细胞的细胞膜下、核周体、神经突起 ;在生长端体部和丝状伪足 ,pp60c -src( + ) 的免疫活性较强 ,少数免疫活性较弱。在伸长的突起上有时可见 pp60c-src( + ) 免疫活性分布在串珠样膨体上。结论 pp60c-src( + ) 参与生长端的运动和生长 ;在生长端分化、神经生长过程中 ,pp60c-src( + ) 的调控作用具有时空特异性 相似文献
168.
胰岛素样生长因子(IGF)与子宫内膜异位症关系的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对IGF家族的组成、结构、在多种肿瘤中的作用机制及其在内异症中的研究进展作一综述,旨在为内异症的诊治提供新的依据。其中研究较明确的是IGF-I和IGFBP-3。IGF-I促进甾体激素的生成、促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,与多种肿瘤的发生有关。IGF-I促进异位子宫内膜生长,与内异症形成有关。IGFBP-3作用与IGF-I相反,可能是通过与IGF-I的结合而实现。 相似文献
169.
目的 探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法 以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 从活化的人白细胞中克隆到常规剪切体PD L2Ⅰ和新型剪切异构体PD L2Ⅱ的cDNA ,后者删除了编码胞外区Ig C结构域的外显子 3。进而构建了PD L2Ⅰ EGFP和PD L2Ⅱ EGFP融合蛋白表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞。流式细胞仪分析显示 ,转染前者的细胞中既可检测到EGFP的表达又可在细胞膜上检测到PD L2表达 ;而转染后者的细胞中只能检测到EGFP的表达 ,在其细胞膜上不能检测到PD L2表达。共聚焦显微镜观察显示 ,PD L2Ⅰ EGFP主要分布于细胞膜表面 ,PD L2Ⅱ EGFP则主要分布于细胞内。结论 常规剪切体PD L2Ⅰ能正确定位于细胞膜表面 ,而新型剪切异构体PD L2Ⅱ则位于细胞内 ,不能运输至细胞膜 ,提示不同PD L2剪切异构体可能与其功能的调变有关 相似文献