人DNA指纹检测的初步研究(科研简讯)

1985年,Jeffreys等首次报道用人肌红蛋白基因内含子中一个33bp的重复序列片段探针揭露出人小卫星DNA片段的高度多态性,并称之为DNA“指纹”。此后,若干学者对此进行了研究,并己逐渐应用于法医学亲权鉴定和个体识别的案件,取得了可喜的进展。 目前,国内人基因组DNA重复序列克隆还不易获得,用人工合成还较昂贵。我们根据随机探针检测DNA限制性片段长度多态性时,对探针的选择不在于它的来源或它原来的功能,重要的是能检测出多态性的原则,以及鼠与人的髓鞘碱性蛋白(MBP)基因cDNA有90％以上同源序列的事实,选用rMBP。cDNA3′-端非表达区高度重复序列的0.81Kb片段(从质粒pMBP-1获得),以α_32p-dCTP经随机引物延伸标记法标记后作探针。人白细胞DNA分别用HinfⅠ和HaeⅢ酸消化,经0.8％琼脂糖凝     

基因工程及其在医学上的应用：第六讲 应用基因检测技术诊断疾病

基因工程及其在医学上的应用第六讲用基因检测技术诊断疾病中山医科大学生物化学教研室伍新尧间：前面几讲介绍了基因工程技术的基本概念和基本理论。我们想进一步了解这一高新技术在医学中具体应用的情况，比如在疾病诊断方面，基因工程技术能发挥什么作用？答：这是一个...     

聚合酶链反应与限制性内切酶片段长度多态性检测沙门菌

聚合酶链反应与限制性内切酶片段长度多态性检测沙门菌陈汝光朱美玲黄龙伍新尧罗超权沙门菌是人和动物致病的最常见的肠道传染病病原菌之一，有２３２４个血清型［１］，目前临床上检查沙门菌仍沿用传统的细菌培养、血清学分型。整个过程需４～７天，而且血培养阳性率低，...     

不同分离方法分离脐血造血细胞效率的比较

目的　探索一种高效快捷可适用于大型脐血库分离脐血造血细胞的理想方法。方法　以改良的羟乙基淀粉 (HES)分离法为主体 ,Ficoll密度梯度离心法、明胶法和自然离心沉降法进行对比 ,系统比较 4种分离方法分离脐血总有核细胞 (TNC)、单个核细胞 (MNC)和CD34+ 造血细胞分离的得率效果。结果　 4种分离方法在分离脐血TNC、MNC及CD34+ 造血细胞得率方面存在着显著性差异 ,其中以HES法和明胶法效果较好 ,两方法间无显著性差异 ,分别能使TNC、MNC及CD34+ 造血细胞的得率平均可达 90 .0 %、89.0 %、90 .0 %和 82 .7%、83.3%、84 .5 %。相比之下 ,HES无论在操作时间、操作过程、造血细胞的终体积和细菌污染率等方面都更具有明显优势。结论　HES法是一种高效、实用的脐血造血细胞分离方法 ,可适用于大型脐血库     

亲权鉴定的新手段—DNA指纹检测法——法医破案技术选萃(14)

甲(进修法医):老师,目前一些发达的国家都在努力将生命科学领域高科技的新成就应用于法医物证学实践中,我们对脱氧核糖核酸(DNA)指纹检测法特别感兴趣,请您给我们介绍一些有关方面的知识好吗? 老师:好。自1985年英国遗传学家杰夫列斯(Jeffreys)博士发现DNA指纹以来,由于它具有十分明显的优越性,许多国家的法医学工作者都认为这是法医物证检验的一个革命性飞跃,并立即行动起来,积极开展这一技术的研究和应用。到目前为止。     

Y染色体短串联重复序列基因座荧光复合扩增体系的法医学应用

目的探讨Y染色体DYS456、DYS464、DYS527、DYS531、DYS709、DYS448和DYS522共7个短串联重复序列(STR)基因座(相当于11个位点)荧光复合扩增体系在法医学中的应用价值。方法提取法医学应用中生物检材的基因组DNA,复合扩增7个Y-STR基因座,然后采用毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测扩增产物。结果盲测试验结果正确;可作为"人"与"非人"的种属特异性检测工具;用同一个体不同组织所获得的分型结果一致;调查同一父系家庭的男性成员样品,未观察到变异;对强奸案混合斑的分析,可直接检出7个Y-STR基因型,协助确定嫌疑人。结论荧光复合扩增Y染色体7个STR基因座方法可靠,对混合斑和微量检材中男性DNA的分析具有较高的应用价值。     

用STR分型技术作亲权鉴定时判断标准的研究

【目的】 探讨STR分型技术作亲权鉴定时,判断是否存在亲生关系的标准｡ 【方法】 采用二项式分布定律P(m) = (1-π)n-m πm计算亲权鉴定时理论上应该检测的STR基因座数量,并用实际检案检验｡【结果】 确定以下的判断标准｡三联体案:在累积PI值超过10 000的前提下,①最少检测15个STR基因座(单个基因座非父排除率≥0.571 4),若争议父子之间没有发现不符合遗传规律基因座(简称为矛盾基因座,下同);或②检测19个基因座只出现1个矛盾基因座;或③检测28个基因座,只发现2个矛盾基因座;或④检测35个或更多基因座,只发现3个矛盾基因座,作出“肯定亲生关系”的结论;若出现4个矛盾STR基因座,则作出“否定亲生关系”的结论｡单亲案:在累计PI值≥10 000前提下,① 至少检测18个基因座(单个基因座非父排除率≥0.411),没有发现矛盾;或②检测29个以上,只发现1个矛盾基因座;或③检测41个或更多基因座,只有2个矛盾基因座,作出 “不排除亲生关系”的结论;如果出现3个或3个以上矛盾STR基因座,则作出“否定亲生关系”的结论｡本实验室实际检案表明合理｡ 【结论】 上述判断是否存在亲生关系标准符合科学､公正原则,值得推广应用｡     

DNA提取方法的比较及改良

用于处理DNA检材以分离和提取DNA的方法很多。不同的方法有不同的优缺点,其适用的分析技术也不同。在法医检案的实际应用过程中经常会遇到不少的问题,如微量检材的DNA提取,既要纯度高,又要回收率高;常用的几种方法单独进行时则很难达到这样的要求。本文就几种常用的方法进行了改良及它们效果比较。     

中国南方汉族人群9个STR基因座多态性分析

【目的】 分析中国南方汉族人群9个STR基因座的遗传多态性｡ 【方法】 用STR_Typer_10_v1荧光标记试剂盒,对1 619例中国南方汉族无关个体的9个STR基因座(D11S2368,D12S391,D13S325 D18S1364,D22-GATA198B05,D6S1043,D2S1772,D7S3048,D8S1132)进行扩增,用AB公司3100遗传分析仪和GeneMapper 3.1v软件作STR分型,用PowerState V12.xls分析软件进行等位基因频率和法医学常用参数统计分析,用Arlequin 3.11v软件包作Hardy-Weinberg equilibrium平衡检验｡【结果】 在中国南方汉族人群中,该9个STR基因座的遗传多态性高,杂合度(H)分布在0.818 ~ 0.879之间,随机匹配(MP)率分布在0.031 ~ 0.063之间, 个体识别力(PD)在 0.937 ~ 0.970之间, 非父排除率(PE)在0.632 ~ 0.753之间,多态性息含量(PIC)在0.80 ~ 0.88之间,典型父权指数(TPI)在2.74 ~ 4.13之间｡统计分析证明这些群体资料均达到Hardy-Weinberg equilibrium(P > 0.05)｡【结论】 中国南方汉族人群9个STR基因座具有较高多态性,可以用于法医学亲权鉴定和个体识别,也可以用于人类学和遗传学研究｡     

小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β和Ret蛋白融合基因的克隆、表达与纯化

目的构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β（murine macrophage inflammatory protein 1β,mMIP-1β）与原癌基因REF的融合基因并构建融合基因mMIP-REF的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达。方法用RT-PCR方法分别扩增mMIP1β和REF的基因片段,利用分子克隆的方法将这两个片段用铰链GGIPG连接,并克隆到表达载体pET22b中。双酶切且测序正确后转化大肠杆菌BL21,构建表达pET22b mMIP1β-REF／His融合蛋白的菌株。经IPTG诱导表达后,ProBond Resin进行亲和层析纯化,然后纯化产物进行复性及超滤浓缩。结果成功克隆mMIP1β和REF基因片段;成功地构建了pET22b mMIP1β-RET／His融合蛋白原核表达载体,在大肠杆菌中获得表达,并对表达产物进行了纯化,和Western blot鉴定。结论成功制备高纯度mMIP1β-Ret／His融合蛋白,为进一步研究修饰的肿瘤抗原的生物学功能奠定了基础。