自噬相关基因同膀胱癌预后的关系研究

目的 分析自噬相关基因在膀胱癌中表达模式并基于自噬相关基因构建膀胱癌预后模型。方法 基于癌症基因组图谱数据库中膀胱癌患者基因表达谱数据和临床相关信息,分析自噬相关基因在膀胱癌中的表达模式;利用单因素、多因素Cox回归模型,筛选同膀胱癌预后相关的自噬相关差异表达基因,建立预后风险模型;利用不同来源的数据集（GSE48075）评估建立的预后风险模型。结果 共筛选出38个膀胱癌组织中差异表达的自噬相关基因,MYC、SPHK1、NAMPT、 P4HB、 SPNS1、 DIRAS3、 TP63、 APOL1、 ITGA3等自噬相关基因表达同膀胱癌预后相关,利用MYC、SPHK1、NAMPT等自噬相关基因成功构建了膀胱癌预后风险模型,风险模型验证结果表明该模型对膀胱癌预后有较好的预测效果,表现为预后模型低风险组预后良好,高风险组预后较差。结论 膀胱癌风险预后模型可较好地预测膀胱癌患者生存情况。     

膀胱上皮特异性重组腺病毒的构建及其对膀胱癌细胞的抑制作用

目的构建特异作用于尿路上皮细胞的重组腺病毒并研究其对膀胱癌细胞株的抑制作用。方法 RT-PCR测定人类uroplakinⅡ（hUPⅡ）基因的表达模式以及柯萨奇病毒腺病毒联合受体（CAR）对多重细胞系的影响。瞬时转染和荧光素酶检测分析技术测定hUPⅡ启动子的组织特异性。构建重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A和Ad-UPⅡ-Null,限制性内切酶酶切分析和PCR技术检测其构建的正确性。Western blot分析细胞感染重组腺病毒后腺病毒E1A蛋白在膀胱癌细胞株BIU-87中的表达。测定重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对于膀胱癌细胞系BIU-87细胞的抑制作用。结果膀胱癌细胞系BIU-87细胞表达hUPⅡ和CAR,其中hUPⅡ启动子具有高活性。在细菌技术上使用同源重组,将hUPⅡ启动子和E1A基因插入到5型的重组腺病毒的基因组中。在BIU-87细胞感染重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A后,E1A蛋白的表达呈强阳性。MTT分析证实重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A抑制了膀胱癌BIU-87细胞的生长。结论 hUPⅡ启动子有高组织特异性。重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对膀胱癌细胞系BIU-87细胞有抑制作用。     

基于生物信息学数据库探讨FOXO3基因在膀胱癌中的表达及临床意义

目的：探讨叉头转录蛋白O亚族3（FOXO3）基因在膀胱癌中的表达及临床意义。方法：利用GEPIA数据库分析FOXO3基因在膀胱癌与其癌旁正常组织中的表达情况,及其与患者预后的关系,利用UALCAN数据库分析膀胱癌中FOXO3表达与淋巴结转移的关系;通过TIMER数据库分析FOXO3基因表达与膀胱癌免疫浸润水平的相关性;通过String数据库分析与FOXO3相互作用的蛋白。结果：GEPIA数据库分析结果显示,FOXO3基因在膀胱癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织（P < 0.01）;低表达FOXO3基因的患者总生存率（OS）和无疾病生存率（DFS）均显著高于高表达者（P < 0.05）。UALCAN数据库分析结果显示膀胱癌中FOXO3的表达与淋巴结转移无明显相关。TIMER数据库分析显示FOXO3基因表达与B细胞（r=0.133,P < 0.05）、CD8⁺T细胞（r=0.262,P < 0.01）、CD4⁺T细胞（r=0.12,P < 0.05）、巨噬细胞（r=0.252,P < 0.01）、中性粒细胞（r=0.242,P < 0.01）和树突状细胞（r=0.162,P < 0.01）的免疫浸润水平呈正相关。蛋白相互作用网络分析发现,AKT1、SIRT1、EP300、BCL2L11、SOD2、SGK1、AKT2、CREBBP、CDKN1B、SMAD4等蛋白与FOXO3具有明显相互作用。结论：基于肿瘤基因数据库分析发现,FOXO3基因在膀胱癌组织中低表达,其高表达与患者预后不良相关;FOXO3表达与膀胱癌免疫细胞的浸润水平有关。     

UBE2C基因在肾透明细胞癌中的临床预后价值及分子机制探究

目的 探讨泛素结合酶E2C(UBE2C)在肾透明细胞癌(KIRC)中的表达模式、临床预后价值以及调节KIRC的分子机制。方法 通过肿瘤基因组图谱数据库(TCGA)和人类蛋白质表达图谱数据库(HPA)分析UBE2C基因在KIRC组织和正常组织中的表达差异。结合KIRC患者的临床信息,利用单因素及多因素Cox回归模型分析UBE2C基因在KIRC患者中的预后价值。通过基因富集分析(GSEA)了解UBE2C基因调控KIRC的分子机制。计算KIRC患者中的浸润免疫细胞含量,并评估UBE2C基因表达水平与免疫细胞浸润含量的相关性。结果 KIRC组织中的UBE2C基因和蛋白表达水平均高于正常肾组织(P<0.05)。KIRC组织中UBE2C表达与肿瘤位置、组织学分级、病理分期及TNM分期有关(P<0.05)。单因素及多因素Cox回归分析结果显示,UBE2C可作为预测KIRC患者总生存期(OS)的独立预后因素(P<0.05)。GSEA结果表明,UBE2C可能参与调节细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞周期检查点、ECM糖蛋白等多条信号通路。UBE2C基因表达水平与KIRC肿瘤微环境中T...     

紫草素在缺血再灌注损伤中的应用研究

缺血再灌注损伤(IRI)发生于缺血组织或器官恢复血液灌注后,炎症损伤是其主要病理机制之一,主要与自由基生成增多、细胞内钙超载和炎症反应过度激活有关.中药紫草素是一种天然萘醌类药物,临床应用广泛,具有抗炎、抗氧化、抗癌、免疫调节、血管保护等药理作用.紫草素的保护作用主要集中在减轻组织水肿和细胞坏死、抑制炎症细胞聚集激活、...     

槲皮素对膀胱癌细胞生长抑制相关基因的去甲基化作用

本研究观察槲皮素对膀胱癌细胞的增殖抑制效应及对肿瘤细胞生长相关基因高甲基化程度水平的影响,阐明槲皮素抗膀胱癌细胞的相关机制。一、材料与方法1.试剂:槲皮素及噻唑蓝(MTT)购自Sigma公司。Taq多聚酶和DNA纯化试剂盒购自Promega　公司,引物对购自Invilrogen公司。     

黄嘌呤氧化脱氢酶在大鼠肾移植急性排斥反应中的作用

目的 观察黄嘌呤氧化脱氢酶(XOD)在大鼠肾移植急性排斥反应中的作用.方法 实验分同系移植组和异系移植组两组.采用左肾原位移植术建立大鼠.肾移植模型.分别于术后1、4、7 d切取受体左肾,观察其形态学改变,应用比色法检测移植肾组织中XOD和活性氧(ROS)的活力,应用免疫组织化学技术检测XOD的表达.结果 异系移植组术后第4、7天呈现典型的急性排斥反应的病理改变.该组各时间点的XOD活力、ROS水平、Banff总分及免疫组织化学评分与同系移植组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).异系移植组移植肾XOD活力、ROS水平、Banff总分及免疫组织化学评分之间均呈正相关(r≥0.751,P＜0.01).XOD表达于肾小管上皮细胞、肾小球内皮细胞和浸润的单核巨噬细胞中.结论 XOD与肾移植急性排斥反应的发生发展密切相关.     

膀胱上皮特异性重组腺病毒的构建及其对膀胱癌细胞的抑制作用

目的构建特异作用于尿路上皮细胞的重组腺病毒并研究其对膀胱癌细胞株的抑制作用。方法 RT-PCR测定人类uroplakinⅡ（hUPⅡ）基因的表达模式以及柯萨奇病毒腺病毒联合受体（CAR）对多重细胞系的影响。瞬时转染和荧光素酶检测分析技术测定hUPⅡ启动子的组织特异性。构建重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A和Ad-UPⅡ-Null,限制性内切酶酶切分析和PCR技术检测其构建的正确性。Western blot分析细胞感染重组腺病毒后腺病毒E1A蛋白在膀胱癌细胞株BIU-87中的表达。测定重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对于膀胱癌细胞系BIU-87细胞的抑制作用。结果膀胱癌细胞系BIU-87细胞表达hUPⅡ和CAR,其中hUPⅡ启动子具有高活性。在细菌技术上使用同源重组,将hUPⅡ启动子和E1A基因插入到5型的重组腺病毒的基因组中。在BIU-87细胞感染重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A后,E1A蛋白的表达呈强阳性。MTT分析证实重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A抑制了膀胱癌BIU-87细胞的生长。结论 hUPⅡ启动子有高组织特异性。重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对膀胱癌细胞系BIU-87细胞有抑制作用。     

羟基喜树碱与噻替哌灌注化疗对膀胱肿瘤术后临床预后的meta分析

目的：评价膀胱肿瘤术后灌注羟基喜树碱（HCPT）和噻替哌（TT）对预防肿瘤复发的效果及其不良反应。方法：计算机检索Pubmed、Cochrane Library、CNKI、CBM、VIP及万方数据库,收集关于HCPT与TT膀胱灌注治疗肿瘤复发的随机对照实验（RCT）,两名研究者根据纳入排除标准独立筛选文献,应用Revman5．0和Stata11．0进行数据处理。结果：通过筛选共纳入4个RCTs。meta分析结果提示,羟基喜树碱膀胱肿瘤术后灌注较噻替哌更能有效降低肿瘤复发风险（P=0．01）。2个研究报道了药物引起的不良反应,分析结果显示两者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：膀胱肿瘤术后灌注羟基喜树碱较噻替哌更能有效降低肿瘤复发率,虽然有一定的不良反应,但都较轻微。     

鼠膀胱肿瘤原位模型构建的机制研究

目的 探讨硝酸银、盐酸、胰酶和酒精预处理构建鼠膀胱肿瘤的成瘤机制。 方法 24G静脉留置针插入膀胱,PBS冲洗后,将小鼠随机分为5组,每组6只：（1）酒精作用组：22%酒精0.1ml保留20分钟;（2）胰酶作用组：0.2%胰酶保留30分钟;（3）酸碱作用组：0.1mmol/L HCl 0.1ml作用15秒后,PBS冲洗,0.1mmol/L NaOH 0.1ml作用5秒,排空膀胱;（4）硝酸银作用组：0.15mol/L硝酸银保留10秒;（5）对照组：0.1ml生理盐水。术后1和24小时随机处死每组3只小鼠,摘取膀胱,HE染色观察膀胱粘膜病理变化;戊二醛固定,电镜下观察膀胱粘膜细胞微结构变化;甲苯胺蓝染色,观察膀胱粘膜固有层肥大细胞数目变化;过碘酸-希夫(PAS)染色,观察膀胱粘膜GAG层变化。40只小鼠应用前四组预处理因素处理膀胱后,建立膀胱癌原位模型,计算各组成瘤率。 结果 胰酶和酒精处理1小时后,局部上皮伞状细胞脱落,粘膜下层暴露;酸碱和硝酸银处理组大部粘膜完整性破坏,粘膜下层暴露较多,连续性中断;对照组和实验组间炎症细胞浸润均不表现出统计学差异。24小时后,胰酶和酒精组可见局部轻度水肿并充血,粘膜完整性恢复较好,细胞间见紧密连接;而酸碱和硝酸银组上皮粘膜薄厚不均一,仍可见部分脱落粘膜。 结论 利用硝酸银和酸碱预处理膀胱可作为鼠膀胱肿瘤原位模型构建的首选方法。