低氧诱导因子-1的病毒载体制备及感染效果

目的 制备低氧诱导因子(HIF)-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果.方法 Ad/HIF-1质粒经酶切鉴定后,以4μg质粒转染1.2×106个HEK293细胞,2 d后荧光显微镜下观察转染效率.1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行病毒扩增,待扩增的细胞及上清量达300 ml时进行病毒纯化及滴度测定.最后用制备的病毒载体感染表皮角质细胞,流式测定其感染效果.结果 Ad/HIF-1质粒酶切鉴定正确;转染或感染HEK293细胞后有绿色荧光蛋白(GFP)表达;获得的腺病毒滴度为1.8×1011PFu/ml.病毒以MOI=50感染表皮细胞,2 d后GFP阳性细胞的比例为97.46%.结论 成功制备了HIF-1腺病毒载体,且感染表皮角质细胞后能得到较高的感染效率,从而为腺病毒介导的基因功能研究提供理论基础.     

Ontogeny of expression of basic fibroblast growth factor and its receptors in human fetal skin

The wounds in skin of early gestational fetus healwithout scar formation by a process resemblingregeneration rather than repair.1The ability torepair congenital anomalies in uterus such as cleft lipwith scarless healing will revolutionize the field ofreconstructive plastic surgery. Furthermore, if thebiological properties of scarless fetal healing aredetermined, these characteristics mightbe replicated inthe adult environment with tremendous clinicalbenefits. This non-scarring phenomenon is ge…     

去分化表皮干细胞的来源鉴定和分析

目的：利用染色体特异性分析方法鉴定去分化表皮干细胞的来源。方法：包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定无表皮干细胞后移植到雌性BALB／c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,5d后用免疫组化法检测皮片内角蛋白10（CK10）、CK19和β1整合素的表达,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内去分化来源的表皮干细胞,并采用PCR的方法检测去分化细胞内的Y染色体。结果：未经处理的表皮片基底部细胞呈CK10染色阴性,CK19和β1整合素染色阳性;Ⅳ型胶原处理后的表皮片内细胞全呈CK10染色阳性。而去基底皮片移植后5d,在皮片的基底侧重新出现CK10染色阴性、CK19和β1整合素染色阳性的细胞。Ⅳ型胶原粘贴分离去分化来源的表皮干细胞,结果表明,移植皮片组在10min内约有4．56％的贴壁细胞出现,而未移植皮片组3h内无贴壁细胞出现。PCR分析结果显示在上述贴壁细胞内能检测到Y染色体的特异序列,而宿主来源的组织检测不到。结论：去分化表皮干细胞来源于移植皮片内成熟表皮细胞的去分化,而非宿主体内的干细胞。     

分离培养汗腺导管部细胞的新方法

目的 探讨建立汗腺导管部细胞分离的新技术.方法 成人仞厚皮片和薄中厚皮片标本(n=10)剪碎后用Ⅱ型胶原酶消化12 h,吸取并转移汗腺导管到培养皿中贴壁培养.应用流式细胞仪、免疫组织化学染色和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)以及蛋白印迹(Western Blot)分析检测培养细胞的汗腺特异标志CEA、CK8、CK18、CK19抗原表达,并用膜片钳技术检测培养细胞膜上阿米洛利(amiloride)敏感Na~+离子通道,用t检验比较分析两组间实验数据.结果 汗腺导管贴壁48 h后,围绕汗腺导管出现单层扁平的上皮细胞,生长2～4周融合成片.流式细胞学检查示原代培养汗腺导管细胞与原代培养汗腺细胞在癌胚抗原(CEA)阳性率[(90.26±1.12)%vs.(89.70±1.43)%]和细胞角蛋白8(CK8)阳性率[(94.41±1.84)%vs.(93.65±1.63)%]上,差异无统计学意义(P>0.05).形态学染色汗腺导管细胞抗CEA、CK8、CK18、CK19染色均为阳性.RT-PCR表明原代培养汗腺导管细胞表达CEA、CK8、CK18、CK19基因,Western Blot清晰显示CEA条带,CK8、CK18、CK19蛋白条带.膜片钳检测表明原代培养汗腺导管细胞膜上存在amiloride敏感Na~+离子通道.无血清表皮细胞EpiLife培养基在汗腺导管细胞生长过程中抑制成纤维细胞生长.结论 从仞厚皮片和中厚皮片分离培养汗腺导管部细胞的方法较传统的分离方法具有简便快速的优点,EpiLife培养基可抑制培养过程中成纤维细胞的生长,可以在体外建立最佳汗腺导管细胞模型.     

表皮干细胞表型的成纤维样细胞在瘢痕中的表达

目的：探寻正常皮肤与增生性瘢痕中表皮干细胞标记物的表达,从组织学角度探讨表皮干细胞参与瘢痕增生的证据。方法：术中切取8例伤后6月增生性瘢痕患者的瘢痕组织及同例患者的正常皮肤,将其制备切片并分组,用E1iviSion二步法免疫组织化学检测表皮干细胞表面标志物β1整合素和CK19的表达,计数阳性细胞并进行统计学处理。结果：瘢痕组织真皮层中,表达阳性细胞数β1整合素和CK19较正常皮肤β1整合素和CK19明显增多（P〈0．05）,成纤维细胞数显著增多。结论：在病理性瘢痕的发生中,表皮干细胞可能在细胞因子作用下分化为成纤维细胞,从而参与瘢痕形成。     

增生性瘢痕中凋亡相关基因转录的变化

目的　探讨凋亡相关基因bcl -2、bax、p5 3和c- myc在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因转录变化。方法　提取 16例不同发生时期的增生性瘢痕和 8例正常皮肤的总RNA后 ,分离mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测bcl- 2、bax、p5 3和c -myc基因在不同组织中的表达。结果　在增殖期的瘢痕中 ,凋亡促进基因bax、c- myc和 p5 3的表达量分别是正常皮肤的(62 .8± 14 .7) %、(78.0± 17.0 ) %和 (4 9.8± 4.3 ) % ,基因表达明显降低 (P <0 .0 5 ) ,而在成熟期的瘢痕中 ,这 3种基因的表达量都明显高于增殖期的瘢痕 ,恢复到正常皮肤水平。在正常皮肤中 ,bcl- 2基因表达水平较低 ,而在增殖期和成熟期的增生性瘢痕中表达量都显著升高 (P <0 .0 5 )。结论　bax、c- myc和 p5 3基因表达降低 ,bcl- 2基因表达增强可能是瘢痕中细胞凋亡减少 ,形成增生性瘢痕的机制之一 ,而bax、c- myc和 p5 3基因表达增强可能与瘢痕达到成熟状态有关。     

适度缺血再灌注诱导大鼠骨骼肌碱性成纤维细胞生长因子受体的表达

已有研究证实[1,2 ] 严重创伤将导致骨骼肌内源性碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)蛋白含量减少和基因表达下调 ,但对其相应受体却缺乏了解。为此 ,作者利用同一模型 ,观察了不同致伤条件和不同致伤时间对骨骼肌ｂＦＧＦ受体定位表达与含量的影响 ,为进一步研究ｂＦＧＦ对骨骼肌的自分泌作用提供理论根据。一、材料和方法1.致伤模型与标本采集 :健康成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 16只 ,体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ。分为正常对照、缺血 4ｈ即刻、缺血 4ｈ加再灌注 6ｈ和 2 4ｈ 4个组。详见文献 [1,2 ]。2 .ｂＦＧＦ受体与ｂＦＧＦ蛋白在正常和受创…     

低温条件下火器伤甲状腺素代谢的改变

常温条件下(15～35℃)火器伤的生物效应及其治疗,国内外已有较多报道,但低温条件下火器伤的操作特点及治疗目前却鲜见报道,为此按GB4797.1-84统计的各种气候类型,选择日平均寒冷-40℃条件下制作犬单后肢火器伤模型,观察低温条件下枪弹伤局部操作特点及甲状腺素的改变规律,为寒区战伤救治提供实验理论依据。     

有关创伤修复与组织再生的现代认识

各种原因 (如创伤、烧伤、冻伤、放射性或静脉曲张所致溃疡等 )导致的损伤以及不同部位 (如体表、内脏等 )与不同程度 (如范围、深度等 )损伤的差异 ,使创伤修复与组织再生的研究工作变得十分困难 ,但它们相同或相似的愈合机制又为我们找到了解决问题的突破口。传统理论上将组织损伤后的愈合过程分为炎症与渗出、肉芽组织的增生以及瘢痕形成与重塑 3个主要阶段。但随着分子生物学的飞速发展 ,对创伤修复的认识逐步深入 ,现在有关组织创伤后的愈合过程又被看作是各种修复细胞增殖、分化、迁移、凋亡和消失的过程。同时 ,它又是一系列不同类型…     

汗腺发生及形态结构在汗腺重建中的可能性

目的:通过对汗腺发生、形态、结构以及神经支配和汗液产生及汗腺细胞电生理实验的归纳总结,加深对汗腺再生与重建理论依据的认识。资料来源:应用计算机检索Medline1990-01/2005-01与汗腺发生、形态、结构以及神经支配及汗液产生机制的相关文章,检索词“sweatgland,structure,function”,并限定文章语种为English。同时计算机检索清华全文期刊数据库1990-01/2005-01与汗腺发生、形态、结构、神经支配及汗腺细胞电生理实验的相关文章,检索词“汗腺、发生、结构、功能”,限定语种为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与汗腺发生、形态、结构、神经支配及汗液产生相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到510篇相关文献,140篇文献符合纳入标准,排除的370篇文献是由于内容陈旧或重复。资料综合:140篇文献中,86篇涉及汗腺发生、形态与结构,31篇涉及汗腺的神经支配,23篇涉及汗液产生及汗腺细胞电生理实验。①汗腺的发生是一个非常复杂的过程,有赖于表皮基底膜区的生理性稳定与真皮-表皮间的相互作用,是基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-7与细胞外基质、表皮生长因子共同协调作用作用的结果。②汗液从汗腺的分泌部分泌时为近等渗液,流经导管时,钠、氯和一些水分被重吸收,使汗液的成分发生变化,最终以低渗液从皮肤表面排出。③汗腺导管细胞和分泌细胞具有不同的电生理现象,正常状态下分泌细胞静息膜电位明显高于导管细胞。④大量体外实验成功分离并培养了汗腺的导管细胞、分泌细胞以及肌上皮细胞,并对其形态发生、生长调控及分化与功能进行探讨以期重建汗腺。结论:由于表皮干细胞与汗腺在发育学上有共同的起源,有可能利用表皮干细胞向汗腺细胞定向分化,从而再生汗腺。另外大面积烧伤患者仍有部分残留的汗腺,有可能通过加速汗腺再生速度和消除瘢痕组织中的屏障因素来重建汗腺。