白细胞介素-10在川崎病炎性细胞因子介导的血管损伤中的作用初探

目的　探讨白细胞介素 10 (IL 10 )在炎性细胞因子介导的川崎病血管内皮损伤中的作用及机制。方法　建立人脐静脉内皮细胞培养模型 ,ELISA双抗体夹心法检测川崎病患儿外周血单个核细胞 (PBMC)活化后培养上清IL 6、IL 1β、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、IL 10的分泌量 ;AnnexinV/PI双染色法 ,流式细胞仪检测川崎病患儿PBMC培养上清所诱导的内皮细胞凋亡率 ;凝胶电泳迁移率转换实验 (EMSA)检测所活化PBMC核因子NF κB活性。结果　川崎病组患者PBMC体外刺激活化后IL 6、IL 1β、TNF α等炎性细胞因子及IL 10的分泌量均明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ,其培养上清所诱导内皮细胞凋亡率 (38 4± 7 8) %较正常组 (2 8± 0 8) %明显升高。抗IL 6、TNF αMcAb、IL 1ra加入川崎病患儿PBMC培养上清 ,可不同程度抑制川崎病患儿PBMC培养上清所诱导内皮细胞的凋亡 ,而抗IL 10McAb加入川崎病患儿PBMC培养上清所诱导内皮细胞的凋亡细胞反而增多 ,凋亡细胞的百分率高达 (5 8 6± 14 6 ) %。川崎病患儿PBMC刺激活化后核因子NF κB活性显著增高。于PBMC培养上清加入IL 10 ,可见伴随着IL 6、IL 1β、TNF α等炎性细胞因子在PBMC中的表达降低 ,NF κB活性也降低 ,同时内皮细胞凋亡明显减少。结论　IL 10抑制川崎病患儿免疫     

人IL-4基因修饰增强瘤细胞特异性CTL杀伤活性机制初探

目的 探讨IL－4基因修饰瘤苗增强细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性的机制。方法 通过逆转录病毒载体pL-IL-4-SN将人IL－4基因导入肝癌细胞系HepG2细胞,以IL－4基因修饰瘤苗和野生型瘤细胞作刺激细胞诱导CTL反应,通过流式细胞仪检查肿瘤细胞表面分子表达。结果 IL－4基因修饰诱导瘤细胞表达MHCⅡ类抗原、B7－1及ICAM－1等细胞表面分子,对MHCⅠ类抗原表达无影响,其瘤苗诱导的CTL杀伤活性为罢生型瘤细胞的7倍（P＜0.01）,加入抗IL－4单克隆抗体（McAb）可完全阻断IL－4诱导的细胞表面分子表达,IL－4基因修饰瘤苗诱导CTL反应时培养上清可测及大量IL－2产生,抗IL－4或抗细胞表面分子的McAb可降低IL－2产生及抑制CTL反应。结论 IL－4基因修饰可能是通过诱导MHCⅡ类抗原等表达分子表达,促进IL－2产生而增强CTL杀伤活性。     

白血病细胞多药耐药细胞系的建立及白细胞介素4对其多药耐 …

目的 研究重组人白细胞介素４（ＩＬ－４）对人白血病细胞（ＨＬ－６０）多药耐药（ＭＤＲ）的逆转作用及可能机制。方法 采用长期、间隔、单一、小剂量用药的方法诱导ＨＬ－６０细胞系成为ＭＤＲ细胞长春新碱（ＶＣＲ）系ＨＬ－６０／ＶＣＲ,建立ＭＤＲ细胞模型;以流式细胞仪间接免疫荧光染色检测ＨＬ－６０、ＨＬ－６０／ＶＣＲ及ＩＬ－４处理的ＨＬ－６０／ＶＣＲ细胞中ｐ－糖蛋白（ｐ－ｇｐ）表达;四氮甲基唑蓝（ＭＴＴ）生     

体外三步法诱导胚胎干细胞定向生成神经干细胞的实验研究

目的 探讨体外定向诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)生成高纯度神经干细胞(neural stem cells，NSCs)的方法。方法 模拟体内神经细胞分化发育的不同阶段及微环境，以脑星形胶质细胞为支持细胞，用全反式维甲酸(All-trans retinoic acid，ATRA)等分三阶段诱导ESCs定向生成NSCs。形态学观察及畸胎瘤形成试验对ESCs的全能性进行鉴定；形态学观察结合免疫组织化学、流式细胞术和RT-PCR检测胚胎干细胞标志OCT-4和神经干细胞标志Nestin蛋白和(或)基因表达对诱导全过程进行动态监测；NSCs分化试验对所诱导的NSCs的分化潜能进行检测。结果(1)体外培养的小鼠ESC-D3细胞在胚胎成纤维饲养层细胞上连续传代培养，仍保持向三胚层分化的能力；(2)随着诱导的进行，OCT-4表达逐渐减弱并消失，而Nestin表达逐渐增强，经三步法最终可诱导形成纯度高达90％以上的Nestin阳性细胞；(3)所诱导生成的细胞在NSCs选择性培养基中反复传代，仍表现为Nestin阳性和具有生成神经球的能力，在含血清培养基中可进一步分化为神经元、星形神经胶质细胞和少突胶质细胞。结论采用星形胶质细胞作为诱导基质，模拟体内神经分化过程的三步诱导法，可诱导ESCs生成较高纯度的NSCs，并能较好维持其干细胞特性和具有进一步分化的能力。     

胚胎干细胞及其在移植治疗中的研究进展

胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)因具有多向分化潜能及能在体外不断被扩增的特点,自发现起就受到生命科学领域关注。本文综述了胚胎于细胞的来源,生物学特性,在细胞、组织和器官移植中的应用及人Es应用研究中所面临的问题。     

AGM区来源的基质细胞促进造血干细胞扩增的体外实验研究

目的： 探讨主动脉-性腺-中肾（aorta-gonad-mesonephros，AGM）来源的基质细胞对造血干细胞（HSC）增殖的促进作用，为探寻HSC的体外扩增方法奠定实验基础。 方法： 分别从孕11 d BALB/c小鼠胚胎AGM区及6周龄小鼠骨髓分离、培养基质细胞，流式细胞仪等对基质细胞进行鉴定；利用小鼠胚胎干细胞（ESC）向造血细胞定向分化的模型，结合高增殖潜能集落（HPP-CFC）、原始细胞集落（BL-CFC）形成实验及流式细胞仪分析CD34+、CD34+Sca-1+细胞比例，对比研究AGM及骨髓基质细胞对ESC来源的HSC的扩增作用。 结果： 小鼠AGM和骨髓基质细胞在形态及表型上基本相似，均符合基质细胞的特征。AGM和骨髓基质细胞均可促进ESC来源的HPP-CFC的形成，但AGM基质细胞还可促进ESC来源的 BL-CFC的形成；流式细胞仪检测发现：在骨髓基质细胞支持下，CD34+细胞增加了3-4倍，但CD34+/Sca-1+却无明显增加；而在AGM基质细胞支持下CD34+、CD34+Sca-1+细胞均明显增加了4-5倍。 结论： AGM基质细胞在有效扩增小鼠HSC同时，能很好地维持HSC自我更新及多向分化的潜能。     

Sonic hedgehog信号通路对AGM区来源的成血-血管细胞增殖、迁移和分化作用

目的探讨Sonichedgehog（Shh）信号通路对小鼠主动脉-中肾-肾上腺（AGM）区来源的成血．血管细胞增殖、分化和迁移的影响。方法联合应用抗小鼠CD34、Flkl单克隆抗体（单抗）的磁珠，从孕11dBALB／c鼠胚胎AGM区分离培养成血-血管干细胞，并同时培养AGM区来源基质细胞，用流式细胞术对所分离细胞进行表型鉴定。用免疫组织化学法检测基质细胞表达Shh蛋白的情况；借助TransweU细胞共培养体系，观察在AGM的基质细胞共培养体系中，不同浓度的Shh活性肽及其单抗对成血．血管干细胞增殖、细胞周期、迁移及向内皮细胞定向分化的影响。结果AGM区基质细胞高表达Shh蛋白（阳性率高达90％以上），并可促进成血-血管干细胞增殖，其增殖效应可被10．00μg／mlShh单抗阻断；0．10-10．00μg／ml外源性Shh活性蛋白与AGM区基质细胞共培养的成血-血管干细胞，可使成血．血管干细胞长时间增殖，并促进细胞迁移，但并不诱导细胞凋亡与分化；而当0．10-10．00μ／ml外源性Shh活性蛋白作用于单独培养的成血-血管干细胞，细胞经过短时间增殖后，随后发生凋亡并向内皮细胞分化。结论Shh信号通路参与了成血-血管干细胞的增殖、分化、凋亡及迁移等生物学特性的调控，但其具体作用存在时空的差异，AGM区微环境对Shh信号通路具有整合和调试的作用。     

特发性血小板减少性紫癜Ⅰ白细胞介素-4启动子区-590 C→T多态性分析

目的探讨人白细胞介素-4(IL-4)启动子-590C→T多态性与特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病的可能关系.方法酶联免疫法测定血小板相关抗体IgG及IL-4水平,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法分析94名ITP患者和106名正常健康志愿者IL-4启动子-590C→T的基因型和等位基因频率.结果ITP组血小板相关抗体IgG[(273.71±90.45)ng/107PA]明显高于正常组[(72.35±23.32)ng/107PA],同时血清IL-4水平[(92.43±20.69)ng/L]也明显高于正常组[(46.71±11.9)ng/L];在ITP组,IL-4启动子区-590位点C等位基因频率为0.16,T等位基因频率为0.84;正常对照组C等位基因频率为0.30,T等位基因频率为0.70,两组基因型和等位基因频率有显著性差异(P＜0.05).结论ITP患者IL-4启动子-590C→T基因型和等位基因频率存在多态性;IL-4启动子-590C→T多态性可能导致ITP患者血清IL-4及PAIgG升高,在ITP的发病中起一定作用.     

长链非编码RNA LINC01503在哮喘患儿中的表达及作用的病例对照研究

目的研究长链非编码RNA LINC01503在哮喘患儿中的表达及在巨噬细胞极化中的调控作用,为完善哮喘发病机制及发现新的防治靶点提供实验依据。方法纳入2017年8月26日至2018年1月11日复旦大学附属儿科医院(我院)呼吸科门诊确诊的哮喘患儿(哮喘组)及我院健康体检儿童(健康对照组),分离2组外周血中的单个核细胞,采用RTq PCR检测LINC01503在两组中的表达; LPS与IL-4分别诱导巨噬细胞向M1及M2方向极化,采用RT-qPCR检测LINC01503的动态变化;脂质体转染siRNA敲低LINC01503表达,采用RT-qPCR及Western blot检测LINC01503对巨噬细胞极化的影响。结果哮喘组28例,健康对照组46例。与健康对照组相比,LINC01503在哮喘组中的表达显著升高。LINC01503在M1巨噬细胞中明显下调,而在M2巨噬细胞中明显上调。siRNA敲低实验发现,LINC01503促进M1巨噬细胞的极化,上调M1标志基因如IL-6、TNF-α和CXCL10等的表达; LINC01503抑制M2巨噬细胞的极化,下调M2标志基因如CD206和CD209的表达。Western blot发现LINC01503主要通过促进细胞外调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化而影响巨噬细胞极化。结论 LINC01503在哮喘患儿中高表达,通过负反馈调控巨噬细胞的活化,有望成为哮喘治疗的新靶点。