荧光定量PCR法检测肿瘤慢性贫血患者外周血淋巴细胞铁调素mRNA

目的建立检测肿瘤慢性贫血患者铁调素(hepcidin)mRNA表达水平的荧光定量PCR法,初步观察肿瘤慢性贫血患者淋巴细胞铁调素mRNA水平。方法建立荧光定量PCR检测铁调素mRNA的标准曲线,评价其灵敏度、特异性及重复性;检测50例体检健康者、49例肿瘤慢性贫血患者外周血淋巴细胞铁调素mRNA水平,同时检测血清白细胞介素6(IL-6)及血清铁(SI)水平。结果荧光定量PCR检测铁调素mRNA的灵敏度为10 copies/μL,线性范围为101~107copies/μL;熔解曲线示扩增峰单一;检测3份低、中、高浓度的阳性质粒批内CV分别为1.83%、1.27%、1.39%,批间CV分别为6.13%、7.48%、6.87%。肿瘤慢性贫血组铁调素mRNA水平为[10.51(8.02~16.31)]×10-3copies/cell,高于健康人对照组[2.57(2.20~3.20)]×10-3copies/cell,P0.01;外周血铁调素mRNA水平与IL-6水平呈正相关(r=0.92,P0.01),与SI呈负相关(r=-0.83,P0.01)。结论建立了定量检测外周血淋巴细胞铁调素mRNA的荧光定量PCR法,肿瘤慢性贫血患者铁调素mRNA水平高于健康人,可能与炎症反应有关。     

非小细胞肺癌源性外泌体提取方法探讨

目的:比较3种提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清中外泌体 (Exosomes) 的方法,为获得高质量的Exosomes提供参考?方法:分别采取超速离心法?进口ExoQuick-TC提取法?国产Ribo提取法提取A549细胞培养上清中的Exosomes?利用透射电镜进行形态学观察,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠法进行蛋白定量,Western blot检测Exosomes表面标志物 CD63表达?结果:3种方法均可提取到Exosomes,电镜下可观察到圆形膜性囊泡结构?进口ExoQuick-TC提取法及国产Ribo提取法提取样本浓度显著高于超速离心法(P < 0.05);3种方法提取样本均有Exosomes特异性标志蛋白 CD63表达,超速离心法CD63表达最高?结论:超速离心法?进口ExoQuick-TC提取法?国产Ribo提取法均可成功分离Exosomes,超速离心法获得的Exosomes纯度较高,应用试剂盒方法获得的Exosomes浓度高?     

Survivin和SIRT1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达及两者相关性分析

目的检测survivin和SIRT1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达,探讨其相互关系。方法用实时定量PCR的方法检测江苏省肿瘤医院42组非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织中survivin和SIRT1 mRNA的表达,统计survivin与SIRT1的相关性。观察EGFR酪氨酸酶抑制剂吉非替尼处理非小细胞肺癌细胞系HCC827后survivin和SIRT1的表达改变。结果 85.7%(36/42)肿瘤组织survivin mRNA表达明显高于对应的癌旁组织。61.9%(26/42)肿瘤组织SIRT1 mRNA的表达低于其癌旁组织,33.3%(14/42)肿瘤组织SIRT1 mRNA表达高于其癌旁组织。Survivin表达与SIRT1表达有统计学意义的相关性(P0.05)。吉非替尼能增加HCC827细胞中的SIRT1表达,降低survivin的表达水平,呈时间和剂量依赖性。结论 Survivin在非小细胞肺癌组织中高表达,而大部分SIRT1基因呈低表达状态。survivin与SIRT1表达呈负相关。在细胞水平上,吉非替尼能增加SIRT1的表达从而降低survivin的水平。提示两者在非小细胞肺癌的发生发展中可能发挥重要作用。     

铁调素在非小细胞肺癌组织和血清中的表达及其与临床病理特征的相关性

目的:检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者肿瘤组织及血清标本中铁调素的水平,并探讨两者与其临床病理特征之间的相关性.方法:免疫组织化学检测60例NSCLC标本中铁调素的表达,应用ELISA检测血清中铁调素的含量,统计两者与临床病理特征的相关性.结果:组织中铁调素表达及血清铁调素水平与NSCLC的年龄、性别、病理类型、分化程度以及是否有淋巴结转移无显著相关性,但均与肿瘤分期及是否有远处转移相关.组织中铁调素表达与血清中铁调素水平并无显著相关性.结论:组织和血清中铁调素水平与NSCLC肿瘤分期及是否有远处转移相关,具体机制需要进一步研究.     

LXR异常激活上调p27蛋白致胰岛β细胞周期阻滞

目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXR)激动剂对小鼠胰岛β细胞系MIN6的作用。方法 LXR激动剂T0901317作用于MIN6细胞后,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量RT-PCR法检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)和p27 mRNA的表达水平;western blot检测Skp2和p27蛋白的表达情况。结果与control组相比,1、5和10μmol/L药物处理后的细胞存活率分别为(98.54±0.94)%、(87.03±0.93)%和(75.57±1.85)%,各组间差异有统计学意义(F=301.90,P0.01)。与control组G1期(35.93±2.25)%和S期(52.87±1.19)%相比,1、5和10μmol/L药物处理组G1期细胞比例分别为(38.45±0.91)%、(45.46±1.34)%和(53.28±1.14)%,差异有统计学意义(F=80.83,P0.01)。S期细胞比例分别为(48.65±0.85)%、(36.31±1.37)%和(31.45±1.22)%,差异有统计学意义(F=221.30,P0.01)。10μmol/L T0901317处理组p27蛋白表达水平(2.84±0.14)明显高于control组(2.28±0.10),差异有统计学意义(t=4.54,P0.05)。但两组间p27 mRNA水平差异无统计学意义(t=0.28,P0.05)。10μmol/L T0901317下调Skp2 mRNA(0.52±0.02,t=29.22,P0.01)和蛋白质水平(相对灰度值为0.98±0.12,control组为1.89±0.01,t=10.98,P0.01)。以对照组(100%)为参照,转染组、药物处理组和干扰组的细胞存活率分别为(100.97±1.08)%、(75.03±1.83)%和(86.67±2.45)%,与对照组比较,转染组间差异无统计学意义(t=1.542,P0.05),药物处理组细胞活力下降(t=23.58,P0.01);药物处理组和干扰组间差异亦有统计学意义(t=7.77,P0.01)。结论 LXR异常激活可导致胰岛β细胞增殖抑制,p27蛋白表达量增加,其机制可能为降解调控p27蛋白的Skp2 mRNA和蛋白质表达水平下降。     

胰岛素样生长因子与乳腺癌的相关性研究

乳腺癌的发病率和死亡率在逐年增加,且越来越趋于年轻化态势.体内的胰岛素样生长因子(IGF)对细胞的增殖、凋亡发挥着重要的调控作用;而大量人群资料和临床基础试验也均表明,IGF系统不仅对机体的正常生长发育起着重要的调控作用,在肿瘤的发生发展中也扮演着重要角色.该文将从IGF系统概况、IGF系统与乳腺癌等几个方面深入研究I...     

非小细胞肺癌EGFR启动子区甲基化和mRNA表达临床意义的探讨

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)组织学类型和淋巴结转移的关系,分析EGFR启动子区甲基化与其mRNA表达的关系.方法:应用免疫组织化学法检测60例非小细胞肺癌组织中EGFR的表达,统计EGFR与病理类型及淋巴结转移的关系.用实时定量PCR方法检测其中30例非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织中EGFR mRNA的表达,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测EGFR启动子区的甲基化状态.结果:鳞癌中EGFR阳性率为38.5％(10/26),明显低于腺癌中EGFR阳性率76.5％ (26/34),差异有统计学意义,x2=8.87,P=0.002 9;且有淋巴结转移的NSCLC中EGFR的阳性率为73.7％(28/38),而无淋巴结转移的NSCLC中EGFR的阳性率为45.5％(10/22),差异有统计学意义,x2=4.78,P=0.028.30例有癌旁组织的标本中,11例患者肿瘤组织EGFR的表达高于其癌旁组织;12例标本中存在肿瘤组织EGFR基因启动子区甲基化水平与EGFR mRNA表达呈负调节关系.结论:EGFR的表达与NSCLC的病理类型及淋巴结转移相关,部分NSCLC患者中存在EGFR基因启动子区甲基化水平与EGFR基因mRNA表达呈负调节关系.     

结直肠癌微卫星不稳定状态与MTHFR基因多态性及临床病理特征的相关性

目的检测结直肠癌标本中微卫星稳定性及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性,并探讨两者的相关性。方法用限制酶内切法检测52例结直肠癌标本的MTHFR基因的多态性,应用毛细管电泳法检测微卫星稳定与否,统计MTHFR多态性、微卫星稳定性与临床病理特征的关系及两者的相关性。结果微卫星不稳定的结直肠癌共14例(26.92%),与结直肠癌患者年龄(χ2=0.051,P0.05)、性别(χ2=0.083,P0.05)和肿瘤分期(χ2=0.259,P0.05)无相关性,而与肿瘤分化程度(χ2=6.361,P0.05)和远处转移与否(χ2=4.798,P0.05)相关。MTHFR CC型29例,CT+TT型23例,两组间结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤分期和有无远处转移差异均无统计学意义(P0.05)。MTHFR C677T多态与微卫星不稳定性呈正相关性。结论 MTHFR C677T多态与结直肠癌微卫星不稳定性有统计学相关性,但具体机制尚需要进一步研究。     

miR-181a在实体瘤及血液恶性肿瘤中的研究进展

miRNAs是一种参与转录后调控的非编码小RNA,其可通过与靶基因的3’UTR区结合负性调控靶基因。但由于其与靶基因具有低互补性,造成一个miRNA可以对应多个靶基因。因此,miRNAs在疾病的发生发展过程中起到错综复杂的作用。论文讨论近年来miR-181a在实体瘤及血液恶性肿瘤病理发展过程中起到的作用,旨在揭示miR-181a与实体瘤及血液恶性肿瘤间复杂的反馈关系。