牛磺酸对微囊化肝细胞生长的影响

目的：微胶囊中存在一定程度的高渗透压胁迫，可造成细胞生长代谢减慢，为改善微囊化肝细胞的生长，尝试应用抗渗透压胁迫物质牛磺酸，观察其对微囊化肝细胞生长的影响。方法：实验于2006-07／08在中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程实验室完成。将HepG2细胞悬液（非微囊化细胞）和微囊化HepG2分别接种于牛磺酸浓度为0，0．6，0．8和1．2mmol／L的MEM培养液中，在37℃体积分数为0．05的CO2中培养。MTT法测定非微囊化和微囊化HepG2细胞的生长活性，相差显微镜观察囊内细胞生长状态。结果：①非微囊化HepG2细胞：0．6，0．8和1．2mmol／L的牛磺酸对其生长无影响，吸光度值比较差异无显著意义（P〉0．05）。②微囊化HepG2细胞：0．6，0．8mmol／L牛磺酸对微囊化肝细胞的生长亦无影响（P〉0．05）：但1．2mmol／L牛磺酸町以显著改善微囊化肝细胞的生长，其吸光度值高于0mmol／L牛磺酸组（P〈0．05），并促进细胞的聚集。结论：1．2mmol／L牛磺酸可以改善微囊化肝细胞的生长并抵制微囊内的高渗透压胁迫对细胞的生长抑制作用。     

微囊化PC12细胞移植治疗帕金森病微胶囊材料的生物学特征

背景帕金森病系中脑黑质多巴胺能神经元变性,使纹状体内多巴胺减少而出现一系列临床症状.将分泌多巴胺的细胞或转染多巴胺合成限速酶基因的细胞进行脑内移植,能一定程度地逆转或改善症状,但存在免疫排斥的问题.目的探讨在不使用免疫抑制剂的情况下,应用免疫隔离的方法进行细胞移植治疗帕金森病大鼠,观察微胶囊的生物相容性及其机械强度.设计随机对照实验.单位中国科学院大连化学物理研究所生物技术部生物医用材料工程组,吉林大学第二医院神经内科.材料实验于2003-08/2004-02在吉林大学第二临床学院动物实验中心完成.选择雄性Wistar大鼠40只.PC12细胞由中国科学院上海细胞生物学研究所提供.方法在纹状体内注射6-羟多巴胺盐溶液制备帕金森病动物模型.其中制备模型成功大鼠25只,随机分为微囊化细胞移植组12只将25μL的微囊化细胞悬液(相当于2.5×104个细胞)分两点定位注射到动物模型右侧(损毁侧)纹状体内.非微囊化细胞移植组7只植入25μL裸PC12细胞悬液(相当于5×104个细胞).空微胶囊移植组6只植入25μL的空微胶囊悬液.各组大鼠在移植后第7天注射阿朴吗啡(0.05 mg/kg),然后记录每只大鼠的旋转行为,1次/周,共12周.术后12周处死大鼠,取脑组织进行病理学观察,回收微胶囊观察生物相容性和免疫隔离作用.主要观察指标①微胶囊在大鼠纹状体内的生物相容性.②微胶囊的免疫隔离作用.③各组大鼠移植前后平均旋转圈数.结果进入结果分析25只,其余均为模型制备不成功而脱落.①微胶囊的生物相容性回收的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊,形态完整,表面光滑,无炎细胞浸润.②微胶囊的免疫隔离作用微胶囊内的PC12细胞继续增殖,部分形成了细胞团.③各组大鼠移植前后平均旋转圈数移植前各组大鼠的单侧旋转记录无明显不同(P＞0.05).微囊化细胞移植组移植2周后平均旋转圈数明显低于移植前,甚至停止旋转,症状的改善保持至移植后12周.非微囊化细胞移植组的平均旋转圈数也明显低于移植前,但8,12周又有上升趋势,与移植前无明显变化(P＞0.05).空微胶囊移植组移植前后的旋转圈数基本一致.结论①海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊有良好的生物相容性和机械强度,在移植部位不引发炎症反应,并保持形态的完整性.②海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊有免疫保护作用,包封的PC12细胞移植到帕金森病大鼠的脑内可以长期存活,继续保持正常的生理功能,通过合成和释放多巴胺,改善帕金森病大鼠的症状.     

微囊化雪旺细胞/神经组织移植促进周围神经再生的实验研究

目的:探讨免疫隔离技术应用在神经细胞/组织移植促进周围神经再生的可行性.方法:采用静电液滴法制备海藻酸钠/聚赖氨酸/海藻酸钠(alginate-polysien-alginate,APA)微胶囊,包埋分离自SD大鼠周围神经的雪旺细胞(SChwann cells,SCs)/神经组织;采用台盼蓝拒染法和ELISA法检测其培养后活性和分泌神经生长因子情况.制备坐骨神经横断损伤的SD大鼠模型,将微囊化SCs/神经组织移植到实验组坐骨神经吻合口处.结果:微囊化SCs/神经组织培养一定时间后,仍保持活力和分泌神经生长因子的功能;4周后实验组吻合口远端可见到再生的阳性纤维,明显大于对照组,瘢痕明显少于对照组;实验组再生的神经纤维和新生的微小血管远较对照组密集.结论:微囊化SCs/神经组织移植后在局部持续分泌神经生长因子,有促进周围神经修复的作用.     

微囊化转染神经生长因子基因细胞移植在周围神经再生中的作用

目的探讨应用免疫隔离技术进行转染神经生长因子（NGF）基因的3T3细胞移植促进周围神经损伤后再生的可行性.方法采用海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠（APA）微胶囊包埋NGF-3T3细胞并进行培养;制备坐骨神经横断损伤SD大鼠模型,96只SD大鼠随机分A组（微囊化NGF-3T3细胞组）、B组（空胶囊组）、C组（转染NGF的3T3细胞组）和D组（阴性对照组）.分别采用神经干动作电位（NAP）、神经传导速度（NCV）和坐骨神经功能指数（SFI）检测坐骨神经功能恢复情况.结果微囊化NGF-3T3细胞培养后保持活性和增殖能力,将具有分化潜能的大鼠嗜铬细胞瘤细胞与其共培养,7 d时细胞胞体分化成多边形或锥形,形成突起;培养10 d左右NGF分泌量最高,达269 pg/ml;培育50 d仍然保持在208 pg/ml.移植术后4、8及12周时,A组大鼠的NAP及NCV均大于B、C、D组（P＜0.05）,而B、C、D三组之间无显著性差异（P＞0.05）;A组大鼠的SFI恢复情况优于B、C、D组（P＜0.05）,而B、C、D三组之间无显著性差异（P＞0.05）.结论微囊化NGF-3T3细胞在体外培养一定时间后,仍保持增殖能力和生物活性,移植到大鼠周围神经损伤局部后可长时间存活,并通过持续分泌NGF起到促进周围神经修复的作用.     

壳聚糖-聚乙烯醇复合凝胶基质抑菌性能的研究

目的:制备壳聚糖-聚乙烯醇复合凝胶基质,考察不同相对分子质量,不同浓度的壳聚糖对复合凝胶的抗菌抑菌性能的影响。方法:采用一剂量法对不同相对分子质量不同浓度的壳聚糖凝胶、壳聚糖-聚乙烯醇复合凝胶对大肠杆菌的抑菌效果进行比较。结果:随壳聚糖浓度增大对大肠杆菌抑菌效果逐渐增强,随壳聚糖相对分子质量的减小抑菌效果增强,但相对分子质量小于5 000时无抑菌圈。结论:明确了壳聚糖相对分子质量和浓度对壳聚糖-聚乙烯醇复合凝胶抗菌抑菌作用的影响。确定壳聚糖-聚乙烯醇复合凝胶中壳聚糖适宜的相对分子质量为60 000、浓度为2%。壳聚糖作为一种新的药用材料与聚乙烯醇合用对大肠杆菌具有良好的抑菌作用,为新药开发奠定良好基础。     

Percoll非连续等密度梯度离心法纯化牛肾上腺嗜铬细胞

肾上腺髓质嗜铬细胞是具有合成、储存和分泌儿茶酚胺功能的神经元样细胞,对疼痛和帕金森病的治疗具有显著效果。但是,肾上腺髓质嗜铬细胞在体外无增殖能力,只能依赖于肾上腺髓质的分离来获取。牛的肾上腺髓质细胞(Bovine Chromaffin Cells,BCC)由于产量高,易分离获取而成为首选的细胞来源,同时建立一种能够满足临床移植需要的BCC分离纯化方法也显得十分重要。     

三维培养体系下肿瘤细胞放射抵抗与增敏的研究进展

三维细胞培养是一种新型的体外培养方式,该体系能够模拟体内细胞生长的微环境,使细胞表现出更接近于体内的状态与功能。目前,三维培养体系已广泛应用于组织工程和肿瘤细胞生物学等研究领域。放疗是肿瘤治疗的重要手段,肿瘤细胞的放射抵抗是导致治疗失败和复发转移的主要原因。肿瘤细胞在三维培养体系下能够表现出体内肿瘤组织内部细胞的抵抗特性,因此利用三维培养体系对肿瘤细胞放射抵抗作用与机制进行研究,鉴定调控肿瘤放射抵抗的关键因子,是增加放射敏感性和提高放疗效果的关键。这篇文章将对近年来在三维培养体系下,肿瘤细胞放射抵抗和增敏的研究进展做一综述,为相关研究提供参考。     

微囊化HepG2细胞脂代谢与线粒体功能和蛋白的合成

背景:动、植物及微生物细胞在特殊微环境中培养时的生长与生产特性,与正常生理条件下或传统培养环境相比,具有明显变化,而这种变化是在不改变总体宏观环境与条件的前提下,实现了生物体微环境的相对有利.微囊微环境决定了细胞的生长和代谢行为,与微囊化细胞的功能息息相关.目的:观察微囊化肝细胞脂代谢水平改变对细胞线粒体功能及蛋白合成能力的影响.方法:将微囊化HepG2细胞接种于含1 μmol/L氟伐他汀的MEM培养液中,在37℃,体积分数为5%CO2培养箱中培养.测定氟伐他汀干预前后微囊化HepG2细胞总胆固醇、三酰甘油、白蛋白水平变化以及线粒体功能变化.相差显微镜观察囊内细胞生长状态.结果与结论:①微囊化HepG2细胞总胆固醇和三酰甘油水平随着培养时间延长显著增高(P＜0.05);细胞线粒体功能出现抑制(P＜0.0s).②氟伐他汀能够降低囊内细胞总胆固醇水平(P＜0.05),但对三酰甘油水平影响无显著差异(P＞0.05).③氟伐他汀干预能在一定程度上缓解囊内出现的细胞线粒体功能抑制和白蛋白水平降低现象(P＜0.05).结果提示微囊化细胞脂代谢水平变化尤其是胆固醇合成增加与细胞线粒体功能抑制及蛋白合成能力降低有关.