染料木黄酮抑制由单纯疱疹病毒1型感染导致的人胶质瘤细胞增殖和凋亡异常

目的染料木黄酮(Genistein,GST)已被证实具有抗广谱病毒的作用,但有关其抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpessimplex virus-1,HSV-1)感染人星形胶质细胞的研究鲜有报道。研究GST对由HSV感染所致人胶质瘤细胞(U251)增殖和凋亡异常的抑制作用。方法设立GST组、GST+HSV-1组、HSV-1组和对照组,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5的HSV-1感染U251细胞,通过噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和RT-PCR检测GST对HSV-1感染致U251细胞增殖和凋亡异常的抑制作用。结果①MTT法显示不同处理组之间的差别具有高度统计学意义(P<0.05),并有非常明显的时间效应(P<0.05)。其中30μg/ml GST组和HSV-1组MTT值低于对照组(P<0.05);15μg/ml GST+HSV-1组MTT均值高于HSV-1组均值(P<0.05),3.75和30μg/ml GST+HSV-1组MTT值均低于HSV-1组(P<0.05)。②形态学观察HSV-1组细胞感染12 h后出现融合,36 h后出现细胞病变效应,15μg/ml GST+HSV-1组细胞感染24 h后开始出现少量融合,36 h后融合增多,但大部分细胞为正常形态;流式细胞术显示,15μg/ml GST+HSV-1组凋亡率低于HSV-1组(P<0.05)。③RT-PCR检测显示HSV-1组感染6 h后开始检测到gD基因的表达;15μg/ml GST+HSV-1组在感染12 h内gD基因表达受到抑制,24 h后gD基因才开始表达。结论 15μg/ml浓度的GST能抑制HSV-1感染所致细胞增殖和凋亡的异常,同时抑制病毒gD基因的表达。     

染料木黄酮通过下调磷酸化蛋白激酶B减轻小鼠动脉粥样硬化

目的:检测染料木黄酮对小鼠颈总动脉组织磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平的影响,并探究染料木黄酮对于小鼠颈总动脉粥样硬化的预防及治疗作用。方法:实验选用50只6周龄的SPF级纯种雄性C57BL6小鼠,随机分为5组,分别为空白对照组、模型组、阿托伐他汀钙组、低浓度染料木黄酮组和高浓度染料木黄酮组。颈总动脉套管后喂养14周处死小鼠,血清检测血脂4项,H-E染色观察形态学变化,油红O染色观察脂滴含量,蛋白质印迹和免疫荧光检测p-Akt蛋白含量。结果:空白对照组,高、低浓度染料木黄酮组和阿托伐他汀钙组的血脂水平明显低于模型组。组织病理学观察表明,除模型组外,其余各组颈动脉结构均无斑块形成,且脂滴含量较少。蛋白质印迹和免疫荧光检测分析显示,模型组p-Akt表达水平显著高于染料木黄酮组、阿托伐他汀钙组和空白对照组。结论:染料木黄酮可通过下调p-Akt进而减轻小鼠颈总动脉粥样硬化的形成。     

地塞米松对坐骨神经损伤后脊髓神经元形态的影响

目的 观察地塞米松对大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元形态学的影响.方法 27只成年Wis-tar 雄性大鼠随机分为4组.神经损伤组:大鼠右侧股外侧切口,钳夹右侧坐骨神经造成神经损伤;地塞米松组:于神经损伤后局部肌肉间隙内注射地塞米松0.5 mg/(kg·d);生理盐水组:在神经损伤后注射等量生理盐水;正常对照组:不做任何处理.手术后不同时间段分别取各组动物L4～L6节段脊髓,制做石蜡切片,观察脊髓运动神经元形态及数量的变化.结果 神经损伤组可见同侧脊髓前角运动神经元胞体变小,尼氏体数目减少,模糊不清.地塞米松组神经损伤后的脊髓前角运动神经元和尼氏体的形态明显改善,数量增加.结论 大鼠坐骨神经损伤后局部应用地塞米松可改善脊髓前角运动神经元的形态结构,恢复蛋白质合成功能.     

HCMV感染对人原代星形胶质细胞IL-6和IL-8表达的影响

目的观察人巨细胞病毒(HCMV)感染时人原代星形胶质细胞分泌的IL-6和IL-8的表达变化。方法分离纯化人原代星形胶质细胞并用免疫荧光法鉴定纯度。用HCMV感染原代星形胶质细胞制作HCMV感染模型,采用RT-PCR及免疫荧光法检测感染后星形胶质细胞中的即刻早期(IE)mRNA和蛋白的表达(进行模型鉴定)。RT-PCR及Western blot法检测正常培养和感染HCMV的人原代星形胶质细胞中IL-6和IL-8 mRNA和蛋白的表达。结果 HCMV能够感染人原代星形胶质细胞。正常培养的人原代星形胶质细胞能够表达IL-6 mRNA和蛋白,但不表达IL-8;HCMV感染初期的人原代星形胶质细胞中IL-6 mRNA和蛋白均表达增加,IL-8表达被激活(P均<0.05),而感染后期两种因子的表达明显下调。结论 HCMV感染能够诱导人原代星形胶质细胞IL-6和IL-8的表达异常。     

睾酮对雌性小鼠肾脏酶细胞化学的影响

目的观察大剂量睾酮对雌性小鼠肾脏酶细胞化学的影响。②方法应用电镜细胞化学方法，观察了大剂量睾酮对雌性小鼠肾小管上皮细胞线粒体标志酶（细胞色素Ｃ氧化酶）和质膜标志酶（Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶）活性的影响。③结果对照组小鼠近端和远端小管上皮细胞内细胞色素Ｃ氧化酶活性呈高电子密度，睾酮组小鼠近端及远端小管上皮细胞内线粒体的细胞色素Ｃ氧化酶活性明显减弱，电子密度降低，其远端和近端小管上皮细胞的质膜内褶处Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性明显减弱。④结论大剂量睾酮可引起肾小管上皮细胞超微结构的改变，以及与能量代谢等功能有关的酶活性减弱     

白血病bcr/abl mRNA的荧光定量RT-PCR检测

①目的探讨bcr/abl基因表达水平与白血病诊断、预后的关系及在微小残留病检测中的意义.②方法荧光定量RT-PCR法(FQ-RT-PCR)测定34例不同类型及处于不同疾病阶段的白血病病人bcr/abl基因的表达.③结果对照组bcr/abl基因表达均为阴性.慢性粒细胞白血病(CML)病人bcr/abl基因表达阳性率为89.5%(17/19),经治疗达临床缓解者8例,bcr/abl基因表达均值为(2.43±0.67)×105基因拷贝/L;初诊CML未经治疗及治疗无效并发生急变或死亡者bcr/abl基因表达均值为(2.60±0.90)×107基因拷贝/L,两者有极显著性差异(t＝3.43,P＜0.01).随访4例CML,2例治疗缓解,bcr/abl转录减少,无阴转;持续增高2例中,1例急变,1例死亡.急性淋巴细胞白血病(ALL)病人bcr/abl表达阳性率为11.8%(2/15),均复发,1例死亡,bcr/abl基因转录复发前表达明显增高.④结论 FQ-RT-PCR实验方法灵敏、快速、特异性好、结果准确;bcr/abl基因表达水平的定量观察及动态监测,有助于白血病的临床诊断与分型,以及推测微小残留白血病的存在状况和预后.     

小鼠脑垂体前叶细胞线形溶酶体的高压电镜观察

（１）目的：探讨脑垂体前叶细胞线形溶酶体的功能及圆形溶酶体之间的关系。（２）方法：应用高压电镜细胞化学方法，观察小鼠脑垂体叶５种内分泌细胞中酸性磷酸阳性的线形溶酶体。（３）结果：线形溶酶体存在于脑垂体前叶５种内分泌细胞中，线形结构可一侧膨大或圆形溶酶体相连并发出分支互相连接，形成一个立体的网状结构。（４）结论：线形溶酶体并不是一种特殊类型的溶酶体，线性结构及其相连的圆形溶酶体可以认为是一个整体。     

被动吸烟致神经管畸形的实验研究

我国男子吸烟者多，孕妇被动吸烟者居多。由此引起的对胎儿危害也越来越引起人们的关注。但被动吸烟导致畸胎的研究多数局限于临床的流行病学调查，其对神经管发育的影响文献报道很少。为此，我们设计了金黄地鼠被动吸烟的实验模型，用来研究被动吸烟对金黄地鼠胚胎神经管发育过程中细胞凋亡，     

海风藤酮对小鼠抗着床作用的免疫组织化学观察

目的观察海风藤酮对小鼠胚泡着床的影响。②方法未经产雌性昆明小白鼠于妊娠第２天,一侧子宫角内分别注射不同剂量海风藤酮（５,１０,２０,４０,６０μＬ）作为实验组,另一侧子宫角注射相应剂量的生理盐水为对照。于妊娠第８天及第１０天,取子宫组织做常规石蜡切片,ＨＥ及免疫组织化学染色,光镜观察。③结果注入海风藤酮（≥２０μＬ）组子宫蜕膜变薄,层粘连蛋白（Ｌｎ）免疫阳性物减少,纤粘连蛋白（Ｆｎ）免疫阳性物增多,并伴有不同程度胚胎发育迟缓及退化等改变。大剂量海风藤酮（≥４０μＬ）组部分动物子宫内膜无蜕膜反应,而且胚胎已消失。④结论海风藤酮通过拮抗血小板激活因子影响蜕膜反应,并使Ｌｎ及Ｆｎ的量和分布发生异常改变。这可能是该药抗着床作用的重要途径之一。     

乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的 研究乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响.方法 将雄性昆明种小鼠随机分为4组,每组6只,分别给予10%,20%,30%的乙醇和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续30 d,通过心肌细胞的核固红-结晶紫和免疫组织化学染色,分析细胞凋亡及凋亡相关Bcl-2）和Bcl相关蛋白（基因--B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（B-cenlymphoma/leukemia-2,Bcl-associated xprotein,Bax）的表达.结果实验组部分心肌细胞核染色质凝集,染为蓝紫色;定量分析显示,实验组异常的心肌细胞核明显多于对照组（P＜0.01）.实验组心肌细胞中Bcl-2的表达弱于对照组（P＜0.01）,且分布不均;而实验组心肌细胞中Bax的表达明显增强（P＜0.01）,可见棕色粗大颗粒.结论 心肌细胞凋亡在乙醇对心肌影响的发生机制上发挥一定的作用;随着乙醇浓度的增加,心肌细胞的凋亡征象愈加明显;乙醇引起的心肌细胞凋亡与凋亡相关基因Bcl-2和Bax的异常表达有关.