CTLA4.FasL双功能融合基因真核表达载体的构建与表达

目的:构建携带CTLA4.FasL双功能融合基因的真核表达质粒,并在HEK293细胞中表达。方法:PCR扩增得到CTLA4和FasL胞外区编码序列,后用重叠PCR的方法将该两段序列融合,且在两者间插入接头序列(编码一柔性短肽GGSGG),所得的基因片段命名为CTLA4.FasL。XhoⅠ/KpnⅠ双酶切后,定向克隆至质粒pcDNA3.1(-),构建成真核表达载体pcDNA3.1(-)-CTLA4.FasL。转染入HEK293细胞,RT-PCR和Western blot验证融合基因的表达。结果:重叠PCR扩增获得CTLA4.FasL融合基因。真核表达载体pcD-NA3.1(-)-CTLA4.FasL成功构建,并在HEK293细胞表达。结论:成功构建了携带双功能融合基因的真核表达载体,为利用CTLA4.FasL基因修饰肝干细胞用于同种细胞移植治疗奠定了基础。     

胎肝干细胞移植在肝病治疗中的应用★

背景:胎肝干细胞移植是当前急性、慢性肝衰竭和遗传代谢性肝病治疗领域的研究热点,有望替代肝脏移植疗法.目的:综述胎肝干细胞的分离纯化及胎肝干细胞移植介导的肝脏再生和临床应用研究的最新进展.方法:应用计算机检索2000-01/2011-12 PubMed数据库相关文章,检索词为“fetal hepatic stem cel , transplantation”,并限定文章语言种类为English.同时计算机检索2000-01/2011-12中国生物医学文献数据库相关文章,检索词为“胎肝干细胞,移植”,并限定文章语言种类为中文.共检索到文献168篇,阅读文题和进行筛选,选择具有原创性、论点可靠、论据充分的与胎肝干细胞移植密切相关的文章,排除重复研究及综述类文献,最终纳入文献31篇.结果与结论:目前尚未发现胎肝干细胞的特异性标记物,这为其分离和纯化带来了极大的困难.现多用荧光激活细胞分选或免疫磁珠细胞分选来富集胎肝干细胞.胎肝干细胞具有双向分化潜能,能有效地、长期的修复重建受损肝脏.另外,低免疫原性、能耐受冻存损伤等独特的优势为其临床应用奠定了理论基础.胎肝干细胞移植用于临床治疗肝硬化的疗效已得到了初步的确认.胎肝干细胞作为一种新兴的种子细胞来源,在治疗急性、慢性肝功能衰竭及遗传代谢性肝病中具有广阔的应用前景.     

睡眠呼吸障碍儿童注意缺陷、多动-冲动的特征分析

背景睡眠呼吸障碍（SDB）儿童注意缺陷、多动-冲动的发生率较高,对其学习能力、远期智力发展危害严重,但是目前缺乏关于SDB儿童注意缺陷、多动-冲动发生情况的全面分析。目的分析SDB儿童注意缺陷、多动-冲动的特征,为制订SDB儿童的临床决策提供依据。方法选取2020年5月至2021年6月在首都医科大学附属北京儿童医院睡眠中心就诊、4~10岁、有打鼾或张口呼吸的儿童为研究对象,均完成整夜多导睡眠监测及注意缺陷、多动-冲动诊断量表父母版。根据阻塞性睡眠呼吸暂停低通气指数（OAHI）分为原发鼾症组（OAHI≤1次/h）,轻度阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）组（1次/h5次/h）。比较不同严重程度儿童多导睡眠监测参数〔总睡眠时间、睡眠效率、非快速眼动睡眠1期占总睡眠时间的比例（N1%）、非快速眼动睡眠2期占总睡眠时间的比例（N2%）、非快速眼动睡眠3期占总睡眠时间的比例（N3%）及快眼动睡眠占总睡眠时间的比例（R%）、OAHI、觉醒指数（ArI）、氧减指数（ODI）、平均血氧饱和度（SpO2）以及最低SpO2〕,注意缺陷、多动-冲动以及注意缺陷、多动-冲动诊断量表阳性发生率;比较不同性别、不同年龄SDB儿童注意缺陷、多动-冲动及注意缺陷、多动-冲动诊断量表阳性发生率。结果原发鼾症组76例,轻度OSA组86例,中重度OSA组77例。中重度OSA组N1%、OAHI、ArI、ODI均高于原发鼾症组及轻度OSA组,平均SpO2和最低SpO2均低于原发鼾症组、轻度OSA组（P<0.05）;中重度OSA组R%低于原发鼾症组（P<0.05）;轻度OSA组OAHI、ArI、ODI均高于原发鼾症组,最低SpO2低于原发鼾症组（P<0.05）。中重度OSA组注意缺陷及注意缺陷、多动-冲动诊断量表阳性发生率高于原发鼾症组（P'<0.016 7）。男性儿童注意缺陷、多动-冲动发生率及注意缺陷、多动-冲动诊断量表阳性发生率均高于女性儿童（P<0.05）。学龄期儿童注意缺陷及注意缺陷、多动-冲动诊断量表阳性发生率均高于学龄前儿童（P<0.05）。结论SDB儿童注意缺陷、多动-冲动发生率高于普通人群,其中男孩注意缺陷、多动-冲动发生率均高于女孩,学龄期儿童注意缺陷发生率高于学龄前儿童。     

单中心学习曲线期机器人辅助胰腺手术50例临床分析

背景与目的：自从2000年达芬奇机器人手术系统被批准应用于临床后,机器人辅助手术已在众多学科中广泛开展。由于胰腺和壶腹周围解剖结构的复杂性,相对于其他专业领域,机器人手术系统在胰腺外科中的应用起步要晚。尽管少数高流量的胰腺外科中心已积累上千例机器人辅助胰腺手术（RPS）的经验,但大多数单位仍处于学习曲线阶段。本研究对笔者所在中心学习曲线期RPS病例的临床疗效与经验进行总结,以期为临床提供参考信息。方法：回顾性分析南昌大学第一附属医院2020年1月—2022年9月间50例施行RPS患者的临床资料,其中胰十二指肠切除术（RPD） 23例,肿瘤剜除术（REN） 9例,胰体尾联合脾切除术（RDPS） 8例,中段胰腺切除术（RCP） 6例,保留十二指肠的胰头切除术（RDPPHR） 2例,保留脾脏的胰体尾切除术（RSPDP） 2例。所有手术由同一团队完成。结果：平均手术时间为（275±115） min,其中胰十二指肠切除术为（330±78） min,胰体尾联合脾切除术为（236±59） min。平均术中出血量（315±259） mL。总体并发症和临床相关胰瘘发生率分别为30.0%和10.0%。Cl...     

外科吻合用壳核结构磁性纳米钕铁硼的制备及其细胞毒性

摘要 背景：磁力压榨式吻合器以其优越的性能受到越来越多的关注，但是其留置体内会对机体造成不良影响，可降解磁力吻合器有望解决此问题。 目的：制备适于外科吻合用的硅胶表面修饰的壳核结构纳米钕铁硼(SiO2/Nd-Fe-B)磁性材料，并评价其细胞毒性。 方法：高能球磨法制备纳米钕铁硼(Nd-Fe-B)材料，溶胶-凝胶法对其进行表面修饰。MTT法检测纳米SiO2/Nd-Fe-B材料的细胞毒性，纳米SiO2/Nd-Fe-B材料与L929细胞共培养，观察其在细胞内分布以及细胞器的改变，传代培养检测粒子代谢情况。 结果与结论：成功制备出纳米SiO2/Nd-Fe-B材料，MTT法检测材料浸提液细胞毒性分级为1级，其吸光度值与空白对照组相比差异无显着性意义(P > 0.05)。纳米SiO2/Nd-Fe-B材料可以通过胞吞方式进入细胞内，其在胞内分布于细胞浆中，TEM观察细胞线粒体轻微水肿，内质网扩张。传代培养发现3代内胞内纳米材料迅速减少。提示高能球磨法结合溶胶-凝胶法可以制备纳米SiO2/Nd-Fe-B材料，此材料细胞毒性小，符合植入人体生物材料的细胞毒性要求。纳米SiO2/Nd-Fe-B材料通过胞吞方式进入细胞内，对细胞器影响轻微，代谢迅速。 关键词：磁性吻合；纳米钕铁硼；高能球磨法；表面修饰；纳米毒性；胞吞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.42.010     

外科吻合用壳核结构磁性纳米钕铁硼的制备及其细胞毒性

背景:磁力压榨式吻合器以其优越的性能受到越来越多的关注,但是其留置体内会对机体造成不良影响,可降解磁力吻合器有望解决此问题.目的:制备适于外科吻合用的硅胶表面修饰的壳核结构纳米钕铁硼(SiO2/Nd-Fe-B)磁性材料,并评价其细胞毒性.方法:高能球磨法制备纳米钕铁硼(Nd-Fe-B)材料,溶胶-凝胶法对其进行表面修饰.MTT法检测纳米SiO2/Nd-Fe-B材料的细胞毒性,纳米SiO2/Nd-Fe-B材料与L929细胞共培养,观察其在细胞内分布以及细胞器的改变,传代培养检测粒子代谢情况.结果与结论:成功制备出纳米SiO2/Nd-Fe-B材料,MTT法检测材料浸提液细胞毒性分级为1级,其吸光度值与空白对照组相比差异无显着性意义(P>0.05).纳米SiO2/Nd-Fe-B材料可以通过胞吞方式进入细胞内,其在胞内分布于细胞浆中,TEM观察细胞线粒体轻微水肿,内质网扩张.传代培养发现3代内胞内纳米材料迅速减少.提示高能球磨法结合溶胶-凝胶法可以制备纳米SiO2/Nd-Fe-B材料,此材料细胞毒性小,符合植入人体生物材料的细胞毒性要求.纳米SiO2/Nd-Fe-B材料通过胞吞方式进入细胞内,对细胞器影响轻微,代谢迅速.     

胎肝干细胞移植在肝病治疗中的应用

背景：胎肝干细胞移植是当前急性、慢性肝衰竭和遗传代谢性肝病治疗领域的研究热点,有望替代肝脏移植疗法。 目的：综述胎肝干细胞的分离纯化及胎肝干细胞移植介导的肝脏再生和临床应用研究的最新进展。 方法：应用计算机检索2000-01/2011-12 PubMed数据库相关文章,检索词为“fetal hepatic stem cell,transplantation”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索2000-01/2011-12中国生物医学文献数据库相关文章,检索词为“胎肝干细胞,移植”,并限定文章语言种类为中文。共检索到文献168篇,阅读文题和摘要进行筛选,选择具有原创性、论点可靠、论据充分的与胎肝干细胞移植密切相关的文章,排除重复研究及综述类文献,最终纳入文献31篇。 结果与结论：目前尚未发现胎肝干细胞的特异性标记物,这为其分离和纯化带来了极大的困难。现多用荧光激活细胞分选或免疫磁珠细胞分选来富集胎肝干细胞。胎肝干细胞具有双向分化潜能,能有效地、长期的修复重建受损肝脏。另外,低免疫原性、能耐受冻存损伤等独特的优势为其临床应用奠定了理论基础。胎肝干细胞移植用于临床治疗肝硬化的疗效已得到了初步的确认。胎肝干细胞作为一种新兴的种子细胞来源,在治疗急性、慢性肝功能衰竭及遗传代谢性肝病中具有广阔的应用前景。     

从噬菌体肽库中筛选并鉴定CD13特异性结合肽

目的 筛选并鉴定可和单核细胞表面CD13分子特异性结合的特异性短肽.方法 以CD13为靶分子,用噬菌体展示十二肽库进行筛选,通过亲和富集法筛选表达有特异性结合肽的噬菌体,ELISA鉴定所挑选噬菌体和CD13的亲和力,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列.对筛选到的并经比对分析认为有生物学特性的多肽进行人工合成,通过免疫荧光技术检测多肽和THP-1细胞的结合情况、位置及WM15对多肽和细胞结合的阻断作用.结果 经过四轮筛选,与CD13特异性结合的噬菌体得到有效富集并最终接近饱和状态.第4轮筛选后回收率与第1轮相比,富集了30倍.挑取的20个噬菌体单克隆中,经ELISA鉴定有10个和CD13的亲和力较高,有阳性意义.经比对得到2个有生物学功能的多肽序列P9、P7,它们分别和人巨细胞病毒(HCMV)UL38、UL105基因编码的相应氨基酸序列有83%、100%相似性.免疫荧光检测可见多肽P9、P7和THP-1细胞的结合位于细胞膜表面.WM15可以不同程度的阻断多肽和细胞的结合.结论 成功筛选出了2条可和CD13特异性结合的短肽P9、P7,而且P9、P7可以和THP-1细胞膜表面的CD13分子特异性结合.     

脾切除对病毒性肝炎肝硬化合并门静脉高压症患者肝癌发生影响的多中心队列研究

目的:探讨脾切除术对肝硬化合并门静脉高压症患者发生肝细胞癌（HCC）的影响。方法:回顾性收集2008年1月至2012年12月中国7所三级医院收治的因肝硬化和门静脉高压症继发脾功能亢进行脾切除术的407例患者的病例资料,纳入脾切除组;将同期因肝硬化和门静脉高压症接受药物治疗的464例患者的病例资料纳入非脾切除组。脾切除术...