Ad-vcam-1-gfp重组腺病毒转染人脐血源基质细胞的实验研究

本研究探讨血管细胞黏附分子（vcam-1）修饰的人脐血源基质细胞（human umbilical cord blood derived strom cells，CBDSC）在造血调控中的作用。采用DNA重组技术，将目的基因vcam-1克隆至含有报告基因gfp的穿梭质粒；在BJ5183细胞中与pAdeasy—1质粒进行同源重组，产生重组腺病毒载体转染人脐血源基质细胞并进行鉴定。结果表明：vcam-1基因与pAdTrack—CMV载体成功连接，经NotⅠ／XhoⅠ双酶切后电泳可见2个大小约为9kb和2kb左右条带，经PCR法扩增后电泳可见1个600bp左右条带，证明pAdTrack—CMV—vcam-1重组质粒构建成功。pAdTrack—CMV—vcam-1质粒与pAdeasy—1质粒同源重组后，产物经PACⅠ酶切后电泳可观察到2个大小约为31kb、4kb左右条带，与预期结果相符。腺病毒载体转染人脐血源基质细胞后免疫化学、RT—PCR、荧光显微镜等方法均检测到目的基因vcam-1的表达。结论：构建ad—vcam-1-gfP重组腺病毒载体可成功转染人脐血源基质细胞并使其vcam-1表达增高。     

胎儿心脏超声筛查在先天性心脏病检测中的应用

目的探讨胎儿心脏超声筛查在先天性心脏病检测中的应用价值。方法以胎儿四腔心、左室流出道、右室流出道、三血管、主动脉弓、动脉导管弓切面为标准切面,快速筛查观察胎儿心脏结构形态是否正常。出生后一周内全部进行新生儿彩色多普勒超声心动图检查,以尸体解剖结果、新生儿超声心动图检查及随访结果与胎儿心脏超声筛查结果相对照。结果在1200例胎儿中发现10例心脏结构异常,其中产前胎儿心脏超声筛查确诊9例：单心室1例,肺动脉瓣狭窄伴右室发育不良1例,三尖瓣下移1例,心内膜垫缺损2例,室间隔缺损2例,法洛四联症1例,三房心1例。另外1例心尖部室间隔缺损产前检查漏诊。显示产前诊断胎儿先天性心脏病的敏感性为90%,特异性为100%。结论以上述6个切面为标准进行胎儿心脏超声筛查可排除心脏复杂畸形。建议在进行胎儿产前常规超声检查时增加3~5分钟时间,以六个切面为标准快速进行胎儿心脏筛查,以降低胎儿先天性心脏病的漏诊率。     

移动差值控制图评估临床实验室肌钙蛋白不确定度

目的运用控制图评估肌钙蛋白I(cTnI)测量不确定度。方法采用日本东曹AIA-1800全自动荧光磁微粒酶免分析仪测定cTnI控制品,1次/天,共30d;用Anderson-Darling法检验数据的正态分布性和独立性;建立单值-移动差值及指数加权移动平均值控制图及评估不确定度。结果 Anderson-Darling检验cTnI质控数据为正态分布性且具有独立性,结果测量不确定为(0.218±0.016)μg/L,(k=2)。结论移动极差控制图法可用来评估cTnI结果不确定度,本研究为临床实验室评价不确定度提供了新的思路。     

不同型Gsa基因缺失体在大肠杆菌中的克隆与表达

在人类的一些肿瘤中已发现存在Ｇｓａ基因突变。本研究室在白血病细胞系的研究中发现了Ｇｓａ基因的３个缺失突变体以及野生型的Ｇｓａ（分别命名为ＧｓａＬ－１,５００ｂｐ;ＧｓａＬ－２,３００ｂｐ,ＧｓａＬ－３,２００ｂｐ和Ｇｓａ－４,１２００ｂｐ）,并已在一些急性白血病患中检测到,为进一步研究这些缺失体的结构、功能和生物学意义,作将克隆了ＧｓａＬ－１,ＧｓａＬ－２和Ｇｓａ－４基因的质粒分别转化到大肠杆菌ＤＨ５ａ中,提取ＤＮＡ,采用特异引物进行ＰＣＲ扩增,获得相应的目的基因,分别将其克隆支ｐＥＴ２２ｂ（＋）表达载体上,丙转化大肠杆菌进行表达。经培养,取菌体行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析,研究结果：３个基因都有相应分子量的蛋白表达,且均以包涵体形式存在。这表明构建的这３个基因确具完整的基因结构,及应的蛋白表达,本研究为进一     

透析患者血清HBsAg假阳性伴HIV可疑一例分析

HBsAg和HIV抗体的检测分别在HBV感染和HIV感染的诊疗中具有重要意义.现阶段HBsAg和HIV抗体主要通过血清免疫学方法检测,其中ELISA法检测HBsAg或HIV抗体的假阳性病例时有报道,而全自动化学发光免疫分析仪的假阳性病例较为少见.该文即报道了一例用全自动化学发光免疫分析仪检测透析患者血清HBsAg假阳性伴HIV抗体可疑的病例,并对可能的原因进行了深入探讨.     

蚤休皂苷对氧化损伤脐静脉内皮细胞内钙离子变化的影响

目的 利用激光共聚焦显微镜研究蚤休皂苷(Pa)对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)损伤的钙离子(Ca2+)的变化及其机制.方法 体外培养ECV304细胞,建立氧化损伤的细胞模型,然后分为5个实验处理组:①正常对照组;②氧化损伤组;③高浓度蚤休皂苷(1 μg/ml)组 ;④中浓度蚤休皂苷(100 pg/ml)组;⑤低浓度蚤休皂苷(10 pg/ml)组;应用激光共聚焦显微镜观察其细胞凋亡的形态学差异.并利用激光共聚焦显微镜观察、图像分析仪分析各实验分组细胞中游离Ca2+的表达、激光共聚焦显微镜描记预处理前后Ca2+的动态表达.结果 损伤组细胞内游离Ca2+浓度明显高于正常组(P<0.01),而各蚤休皂苷预处理组均使Ca2+荧光强度下降,显著低于损伤组(P<0.01),并呈剂量依赖性效应.H2O2损伤剂量的刺激下,ECV304胞浆内的游离Ca2+呈现双相变化:由静息状态持续增加到峰值,ΔF为37.22±3.72,平台期与静息状态荧光值的变化ΔP为7.65±0.69,加入蚤休皂苷预处理10 min后,再加入100 μmol/L的H2O2 ,ΔF和ΔP均明显下降(P<0.01).结论 蚤休皂苷可以保护H2O2造成的ECV304细胞的氧化损伤,与抑制了钙离子介导的凋亡通路有关,达到保护内皮细胞、抗动脉粥样硬化的目的.     

RP-HPLC蒸发光检测法测定蒺藜中蒺藜皂苷D的含量

目的:建立反相高效液相色谱一蒸发光检测法测定蒺藜皂苷D含量的方法.方法:色谱柱Nova-park C18柱,柱温22℃,流动相:甲醇-水(75:25)为流动相,流速1 mL/min,SEDEX 55型蒸发光散射检测器.结果:该方法的线性范围为2.736～5.13μg,r=0.999 4(n=5),平均回收率为96.86%.结论:方法准确,灵敏度高,专属性强,重现性好.可用于该药材及制剂中该成分的含量测定.     

千斤拔化学成分研究

目的 研究千斤拔Flemingia philippinensis根的化学成分.方法 采用硅胶、反向硅胶及葡聚糖凝胶Scphadex LH-20等色谱手段进行化学成分的分离纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定.结果 从千斤拔根的75%乙醇提取物中分离出18个化合物,分别鉴定为lupinifolin(Ⅰ)、flemichin D(Ⅱ)、5,7,3',4'-四羟基异黄酮(Ⅲ)、5,7,2',3',4'-五羟基异黄酮(Ⅳ)、染料木苷(Ⅴ)、槐属苷(Ⅵ)、大黄酚(Ⅶ)、大黄素甲醚(Ⅷ),大黄素(Ⅸ)、岛青霉素(islandicin,Ⅹ)、咖啡酸二十八烷酯(Ⅺ)、单棕榈酸甘油酯(Ⅻ)、滨蒿内酯(Ⅷ)、水杨酸(ⅩⅣ)、对甲氧基苯丙酸(ⅩⅤ)、白桦酸(ⅩⅥ)、羽扇豆醇(ⅩⅦ)、β-谷甾醇(ⅩⅧ).结论 以上化合物中,除Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、ⅩⅦ、ⅩⅧ外均为首次从千斤拔属植物中分离得到,其中化合物Ⅳ为首次从植物中分离得到的天然产物.     

针刺对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及SOD、MDA的影响

目的研究针刺四关、足三里穴对D-半乳糖和亚硝酸钠致阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型大鼠学习记忆能力及超氧化物歧化酶（super oxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）的影响。方法选取SD级雄性大鼠40只,随机分为模型组、对照组、针刺组和空白组各10只。空白组不给予治疗造模,其余各组每天腹腔注射D-半乳糖（120 mg/kg）和亚硝酸钠（90 mg/kg）造模,连续注射6周。造模21 d后针刺组予针刺四关、足三里穴干预治疗,对照组给予盐酸多奈哌齐混悬液（0.45 mg/kg）灌胃治疗。3个疗程后,采用Morris水迷宫测试四组大鼠的学习记忆能力,通过ELISA检测脑组织SOD、MDA的活性。结果治疗后,针刺组和对照组与模型组大鼠比较平均逃避潜伏的时间减少（P〈0.01）;大鼠的穿环次数提高（P〈0.05）;针刺组SOD活性为（86.23±2.54）U/mg和对照组脑组织SOD的活性（85.70±4.02）U/mg显著高于模型组（64.97±4.27）U/mg（P〈0.01）,MDA含量低于模型组（P〈0.01）。结论针刺四关穴、足三里穴可改善大鼠的学习记忆能力,提高SOD活性,减少MDA含量,具有抗氧化,保护神经细胞的作用,从而延缓衰老的发生。     

西安地区骨性III类长短面型患者的三维测量研究

目的:对部分西安地区汉族骨性III类长短面型青年进行颅面部软组织的三维测量,将该年龄组的颅面部各器官之间的三维测量值及比例指数在长短面型之间进行对比研究,为临床诊断和制定治疗计划提供更可靠的依据。方法:采用Farkas的颅面部软组织表面测量方法,对西安地区骨性III类长短面型患者进行54项测量。结果:通过对部分西安地区汉族骨性III类长短面型患者进行颅面部软组织的三维测量发现:①骨性III类长面型相对于短面型下颌角较大(137.9°>117.8°,P<0.01)。②骨性III类长面型相对于短面型下颌宽较窄,前全面高、前下面高均较大(P<0.01)。结论:西安地区骨性III类长短面型青年之间不仅面高比不同,颅面部软组织的其他三维测量值及比例指数也存在着较明显的差异。