钙离子参与周期性高张应变和血小板源性微囊协同诱导的血管平滑肌细胞迁移

目的 探究周期性高张应变和血小板源性微囊(platelet-derived microvesicles,PMVs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移功能的影响,以及Ca2+在其中的作用.方法 应用FX-5000T应变加载系统对体外培养VSMCs施加5％、15％幅...     

高血压对大鼠血管内皮细胞PPAR-gamma表达水平的影响

目的：探讨高血压对大鼠血管内皮细胞（ECs ）PPAR-gamma蛋白质和mRNA表达水平的影响。 方法：应用免疫组织化学法结合图像信号分析技术,以WKY大鼠为正常对照,检测4周,16周自发性高血压大鼠(SHR) ECs核内PPAR-gamma蛋白质表达水平,原代培养ECs并传代(≤3代),应用蛋白质免疫印迹和RT-PCR技术,检测ECs PPAR-gamma蛋白质和mRNA表达水平。 结果：4周 SHR血压较同龄WKY大鼠轻度升高（P＜0.05）,其ECs PPAR-gamma的蛋白质和mRNA水平略高于同龄WKY大鼠,但差异均无统计学意义（P＞0.05）。16周 SHR血压与16周 WKY大鼠相比明显增高（P＜0.01）,16周 SHR ECs PPAR-gamma的蛋白质和mRNA水平约为16周 WKY的1.5倍（P＜0.01）,且16周 SHR PPAR-gamma蛋白质和mRNA水平约为4周 SHR的2.5倍（P＜0.01）,而对照组16周 WKY大鼠PPAR-gamma水平较4周 WKY仅升高不到1倍（P＜0.01）。 结论：随SHR血压的升高和高血压病程的延长,ECs PPAR-gamma蛋白质和mRNA的表达水平均显著增高。     

生理性周期性张应变通过激活AMPK磷酸化抑制血管平滑肌细胞迁移

目的 探讨细胞能量代谢的关键调节因子 AMP激活的蛋白激酶AMPK在血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）响应生理性周期性张应变力学刺激后对VSMCs迁移的影响。方法 采用 Flexcell-5000T体外细胞张应变加载系统,对大鼠原代培养的 VSMCs 施加10%幅度、1.25 Hz 频率的周期性张应变,模拟VSMCs在体内的生理性力学环境;以未加载周期性张应变的静态细胞为对照组,Western blotting 检测 VSMCs的 p-AMPK蛋白表达;划痕实验检测 VSMCs 迁移功能。结果 与静态组的细胞相比,生理性周期性张应变加载24 h后显著减少划痕愈合面积,提示生理性周期性张应变抑制VSMCs迁移;生理性周期性张应变加载3 h后,VSMCs的p-AMPK蛋白表达显著升高,而加载24 h后p-AMPK蛋白表达显著降低。在生理性周期性张应变加载条件下,孵育AMPK抑制剂可以在张应变加载3 h后显著降低 p-AMPK蛋白表达,而在张应变加载24 h后显著促进VSMCs迁移;在静态条件下孵育AMPK激活剂 AICAR 3 h后显著诱导p-AMPK蛋白表达,孵育24 h后显著抑制VSMCs迁移;提示p-AMPK蛋白表达参与调控VSMCs迁移。结论 生理性周期性张应变能通过激活p-AMPK蛋白表达,进而抑制VSMCs迁移,提示生理性周期性张应变调控VSMCs迁移对维持血管稳态具有重要意义。     

ERK信号通路参与调控周期性张应变诱导的人牙周膜细胞增殖

目的 探讨周期性张应变对人牙周膜细胞 （human periodontal ligament cell , hPDLCs ) 增殖的影响及其相关机制。方法 应用FX-4000T 细胞应变加载系统,对体外培养的人牙周膜细胞施加周期性张应变,幅度分别为10 % 和20 %,加载时间为6 h和24 h,频率均为0.1 Hz,以未加载的静态细胞作为对照组。Western blot 法检测细胞增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞内信号转导分子p-ERK1/2表达的变化。用ERK1/2的特异性抑制剂PD 98059预处理细胞后,在0.1 Hz,10 % 幅度条件下,加载6 h,检测p-ERK1/2的表达水平变化对细胞PCNA表达的影响。 结果 与静态组相比,周期性张应变诱导人牙周膜细胞的PCNA和p-ERK1/2表达增加,10 % 幅度和20 % 幅度相比无显著性差异。同一幅度张应变,加载6 h和24 h对细胞PCNA和p-ERK1/2表达的影响无显著性差异。ERK1/2的抑制剂PD98059不仅可以明显抑制张应变诱导的p-ERK1/2 活化,而且张应变诱导的细胞PCNA表达也被明显抑制。结论 周期性张应变可激活ERK信号通路,促进体外培养人牙周膜细胞的增殖。     

microRNA-133b在低切应力诱导血管内皮细胞影响血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的研究血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)直接感受低切应力刺激后分泌类胰岛素生长因子-1(insulinlike growth factor-1,IGF-1)影响血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖这一过程中microRNAs(miRs)的作用。方法用平行平板流动腔系统对ECs施加1.5 Pa正常切应力(normal shear stress,NSS)和0.5 Pa低切应力(low shear stress,Low SS),Real-time PCR检测VSMCs的miRs变化。用miRs预测网站预测miR-133b靶基因并验证。Western blotting检测核糖核酸结合蛋白1(polypyrimidine tract binding protein 1,Ptbp1)和N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated 1,Ndrg1)的蛋白水平变化。Ed U流式检测miR-133b对VSMCs增殖的影响。结果 IGF-1静态刺激后,VSMCs的miR-133b和miR-378a表达上升。Low SS条件下,VSMCs的miR-133b表达显著上升,miR-378a表达无明显变化。下调VSMCs的miR-133b表达,Ptbp1、Ndrg1的mRNA水平均显著升高,上调VSMCs的miR-133b的表达,Ptbp1、Ndrg1的mRNA和蛋白水平显著降低,并且显著促进VSMCs增殖。结论在Low SS条件下ECs分泌IGF-1可能通过调控联合培养VSMCs的miR-133b和靶基因Ptbp1和Ndrg1促进VSMCs增殖。研究结果为心血管疾病治疗提供了一个新的潜在靶标。     

莫索尼定对原发性高血压患者心率变异性和胰岛素敏感性的影响

目的 :探讨莫索尼定对原发性高血压 （EH）患者的心率变异性 （HRV）和胰岛素敏感性 （IS）的影响。方法 :2 2例轻、中度 EH患者每日口服莫索尼定 0 .2～ 0 .4mg,用药 4周 ,治疗前后分别行 2 4h动态心电图监测 ,用时域分析法测定其 HRV,同时测定空腹血糖 （FPG）、空腹血胰岛素水平 （FINS）和胰岛素敏感性指数 （ISI）。结果 :EH患者治疗后的 SBP、DBP均明显降低 （P<0 .0 1） ,HRV中 SDNNI明显降低 （P<0 .0 1） ,SDNN,SDANNI则明显增大 （P<0 .0 1） ,r MSSD,p NN5 0 虽升高但变化不显著 （P>0 .0 5）。并发糖耐量减低的 EH患者的 FPG虽降低但变化不显著（P>0 .0 5） ,FINS显著降低 （P<0 .0 1） ,ISI显著提高 （P<0 .0 1） ;糖耐量正常的 EH患者的 FPG,FINS和 ISI均无显著变化 （P>0 .0 5）。结论 :莫索尼定在有效降低血压的同时 ,能改善 EH患者的 HRV,并提高糖耐量降低的 EH患者的胰岛素敏感性 ,而对糖耐量正常的 EH患者的胰岛素敏感性无影响     

自发性高血压大鼠颈总动脉的平均壁面切应力和周向应力

目的确定自发性高血压大鼠(SHR)颈总动脉的平均壁面切应力(WSS)和周向应力(CS),并与同龄正常血压大鼠(WKY)相对比,观察SHR和WKY大鼠颈总动脉平均WSS和CS的特征。方法选取12周龄SHR作为动物模型,同龄WKY为对照组;通过在体测定颈总动脉的平均血流量与平均血压,离体测量颈总动脉的无载荷状态形态学数据,以及在体轴向伸长比条件下颈总动脉段的压力(p)-容积(V)关系,确定颈总动脉平均WSS和CS;同时比较SHR和WKY颈总动脉的平均血压和血流量、无载荷和载荷状态几何尺寸以及平均WSS和CS的特征。结果与正常血压的WKY组相比,SHR组颈总动脉血压明显增高、流量明显降低;无载荷和载荷状态下SHR组动脉的内外半径均增大,载荷状态下SHR组动脉壁厚减小;SHR颈总动脉平均WSS明显降低,而CS明显增高。结论高血压和低流量引起了SHR颈总动脉重建;低WSS和高CS是SHR颈总动脉血液动力学参数的重要特征;WSS和CS的协同作用可能是反映动脉重建的敏感指标之一。     

周期性张应变对人牙周膜细胞迁移的影响

目的 探讨周期性张应变对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)迁移的影响及其相关机制,为进一步了解机械力对hPDLC功能的影响提供资料.方法 应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的hPDLC施加周期性张应变,牵张幅度分别为10%和20%,加载时间为6 h和24 h,频率均为0.1 Hz,以未加载的静态细胞作为对照组,应用划痕法观察hPDLC的迁移,蛋白质印迹法检测hPDLC的基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的表达变化;用细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的特异性抑制剂PD98059预处理hPDLC后,在0.1 Hz、10%幅度条件下,加载6 h,检测细胞p-ERK1/2和MMP-9表达的变化.用细胞迁移划痕法观察加载10%和20%幅度张应变,观察24 h后PD98059和MMP家族的抑制剂强力霉素(doxycycline,DOX)对hPDLC迁移的影响.结果 细胞迁移划痕实验结果显示,牵张幅度和加载时间均可显著促进细胞迁移.与静态组相比,施加牵张幅度分别为10%和20%的张应变6 h后,hPDLC迁移变化不明显,但加载24 h后,10%和20%幅度的张应变均显著促进了hPDLC迁移(P<0.05),细胞迁移率分别为(45 ±8)%和(66±14)%,且20%比10%幅度牵张对细胞迁移的促进作用更显著(P<0.05).蛋白印迹法结果显示,周期性张应变促进了hPDLC的MMP-9表达.牵张幅度对细胞MMP-9的表达有显著影响(P<0.05),但加载时间对细胞MMP-9的表达无显著影响.ERK1/2的抑制剂PD98059不仅可以明显抑制张应变诱导的p-ERK1/2活化,而且可通过ERK信号通路明显抑制张应变诱导的细胞MMP-9表达.细胞迁移划痕实验还证实,加载幅度分别10%和20%的张应变24 h后,抑制剂PD98059和DOX均能有效抑制周期性张应变诱导的hPDLC迁移.结论 周期性张应变可通过激活hPDLC的ERK信号通路,促进细胞的MMP-9表达,从而诱导体外培养的hPDLC迁移.     

microRNA-214-3p在周期性张应变诱导内皮祖细胞分化和增殖中的作用

目的探讨microRNA-214-3p(miR-214-3p)在周期性张应变诱导内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)分化和增殖中的作用。方法采用FX-5000T细胞周期性张应变加载装置对EPCs施加生理水平的周期性张应变(5%幅度、1.25 Hz频率),加载时间24 h。应用miRNAs芯片筛选周期性张应变调控下差异表达的miRNAs,并挑选miR-214-3p进行深入研究。实时荧光定量PCR方法检测EPCs内平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)相标志分子的表达,BrdU结合酶联免疫吸附ELISA法检测EPCs增殖功能。之后,使用miR-214-3p抑制剂抑制miR-214-3p的表达,检测EPC内VSMC相标志分子表达及EPCs增殖。结果周期性张应变显著抑制miR-214-3p表达,并抑制EPCs向VSMC相分化,同时显著促进EPCs增殖。在静态条件下,使用miR-214-3p抑制剂干扰miR-214-3p的表达,miR-214-3p水平下降同样会抑制EPCs向VSMC相分化,并且诱导EPCs增殖能力显著上升。结论生理水平的周期性张应变能够抑制EPCs内miR-214-3p表达,从而抑制EPCs向VSMC相分化,并且促进EPCs增殖。研究结果为血管损伤的治疗提供新的治疗靶点。