GDNFR-α在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中分布的免疫组织化学研究

目的观察胶质细胞源性神经营养因子受体-α(GDNFR-α)在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中的分布,探讨GDNF对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用. 方法原代培养脊髓和背根节神经元,5d后行抗GDNFR-α多克隆抗体免疫组织化学SP法染色. 结果 GDNF免疫反应存在于体外培养的脊髓神经元、背根节神经元以及胶质细胞中. 结论 GDNF可能对脊髓神经元、背根节神经元和胶质细胞的生理功能具有一定的调节作用.     

鼠下颌骨成骨细胞对米诺环素摄取的实验观察

目的 通过观察体外培养的成年大鼠下颌骨成骨细胞(mature rat mandibular osteoblasts,MRMOB)是否摄取米诺环素及其摄取量,为人工种植牙全身给药提供实验依据.方法 将100 mg/L的米诺环素与成骨细胞分别培养15、30、45、60 min,测定米诺环素在成骨细胞内的含量.结果 在含米诺环素的培养基中培养15、30、45、60 min后成骨细胞内米诺环素的含量分别为(17.29±1.49)、(16.87±1.57)、(16.96±1.67)和(17.94±1.63)mg/g,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外培养的成年大鼠下颌骨成骨细胞能摄取米诺环素,且培养15 min以后成骨细胞内米诺环素的含量无时间依赖性.     

人牙周膜成纤维细胞对头孢噻肟钠的跨膜转运

目的:研究人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts, HPDLF)对头孢噻肟钠的跨膜转运,为根管牙周局部及全身给药假说提供实验依据.方法:头孢噻肟钠溶液孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞,超声破碎细胞后,HPLC测定不同时间点的胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量.结果:100 μg/ml的头孢噻肟钠孵育1、5、10 min时HPDLF胞内含量分别是(0.104±0.030) ng/μg、(0.151±0.007) ng/μg、(0.161±0.046) ng/μg;孵育5 min时, MC3T3-E1胞内含量(0.096±0.027) ng/μg.结论:HPLC可用于细胞内头孢噻肟钠的测定.头孢噻肟钠在HPDLF内存在跨膜转运,这种转运存在着细胞差异.     

软食喂养对发育中大鼠咬肌脑源性神经营养因子及其受体mRNA表达影响的研究

目的检测不同硬度食物喂养下,大鼠在离乳后不同发育阶段咬肌脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophicfactor,BDNF)及其受体酪氨酸蛋白激酶B(Tyrosine Kinase B,TrkB)mRNA的表达变化。方法出生后18 d刚离乳的大鼠40只,分为硬食组、软食组,分别喂养营养成分相同的固体、粉状鼠粮,于大鼠3、4、6、9周龄时取表层咬肌,利用半定量RT-PCR方法检测BDNF及其受体TrkB mRNA的表达变化情况。结果3-9周龄2组大鼠咬肌均有BDNF/TrkB mRNA表达,3周龄时,2组表达均较低,没有显著差异;4周龄时,2组大鼠咬肌BDNF/TrkB mRNA均较3周时有显著的增加,但软食组增加幅度低于硬食组;6-9周龄时BDNF/TrkB mRNA表达降低,2组间没有显著差异。结论BDNF/TrkB mRNA在咀嚼形成关键期(P3-4周)表达显著增强,软食喂养能够降低此阶段大鼠咬肌BDNF/TrkB mRNA表达,BDNF/TrkB可能与咀嚼形成有密切关系。     

人与犬牙周膜干细胞的生长特性比较

目的：培养、分离人与犬牙周膜干细胞（PLSCs）,比较其生长特性,为相关体内研究提供理论和实验依据。方法：采用免疫磁珠分选系统分别从原代培养的人与犬牙周膜细胞中分离PLSCs,通过倒置相差显微镜、细胞计数、集落形成检测、流式细胞仪等方法比较人与犬PLSCs的细胞形态、生长曲线、集落形成率（CFR）及STRO-1^＋表达情况。结果：人与犬PLSCs形态相似,均为梭形,生长曲线也都呈“S”形。但CFR人PLSCs显著高于犬PLSCs（P〈0．05）,而且人牙周膜中STRO-1^＋细胞的表达率高于犬牙周膜中STRO-1^＋细胞（P〈0．05）。结论：STRO-1^＋免疫磁珠分选系统可用于分离人和犬PLSCs,所分离的两种PLSCs的形态和体外生长模式相似,但细胞亚群增殖能力和表型有差异。     

人牙周膜成纤维细胞对甲硝唑摄取机制的研究

目的：研究人牙周膜成纤维细胞对甲硝唑的摄取,探讨摄取的机制及为通过牙根管给药途径提供实验依据。方法：采用高效液相色谱法研究人牙周膜成纤维细胞与甲硝唑孵育后不同时间细胞内药物的浓度,细胞内药物浓度与细胞外药物浓度的关系,以及温度、pH和转运抑制剂丙磺舒和腺嘌呤对细胞摄取甲硝唑的影响。结果：（1）孵育3min后人牙周膜成纤维细胞胞内甲硝唑浓度即可达到细胞外水平,之后胞内甲硝唑浓度出现逐渐降低,并在15min后达到平稳;（2）细胞内甲硝唑浓度随着细胞外甲硝唑浓度的增加而呈线性增加;（3）温度、pH和转运抑制剂对人牙周膜成纤维细胞摄取甲硝唑无明显影响。结论：人牙周膜成纤维细胞可快速摄取甲硝唑;甲硝唑通过简单扩散方式进入细胞内。     

咀嚼力降低对发育期大鼠髁突发育的组织学影响

目的：探讨咀嚼力降低对断乳后大鼠下颌骨髁突尺寸和髁突软骨厚度的影响。方法：16只刚断乳的雄性大鼠随机分为两组。一组喂以标准的硬食,另一组以粉末状软食喂养。4w后,取每只大鼠的一侧髁突进行长度和宽度的测量,另一侧髁突进行组织学观察。结果：软食组大鼠的髁突长度、宽度和软骨层厚度均明显小于硬食组。结论：咀嚼力降低会导致下颌骨髁突生长减慢和髁突软骨厚度的变化。     

大鼠下颌骨来源的成骨细胞对甲硝唑和替硝唑的转运

目的：应用SD大鼠下颔骨来源的原代成骨细胞，观察成骨细胞对甲硝唑和替硝唑的转运，探讨人工种植牙给药的影响及可行性。方法：将原代培养的新生鼠成骨细胞（newborn rat’s osteoblast，N）和成年鼠成骨细胞（adult rat’s osteoblast，A）与溶于PBS的药物共同孵育，分别于1，3，5，10min后，弃去细胞外液，收集各时间点细胞悬液，用高效液相色谱法测定细胞内药物量，用考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。结果：（1）高效液相色谱法可以准确测定2种药物的量。（2）2种成骨细胞均可将甲硝唑和替硝唑转运至细胞内。结论：成骨细胞具有转运硝基眯唑类药物的能力，证实了人工种植牙给药的可行性。     

诊断超声对胎鼠内耳FOS蛋白表达的研究

目的：探讨诊断超声对鼠内耳细胞是否构成刺激。方法：对受孕14d的大鼠随机分为4组：对照组、辐照、10min组、20min组、30min组。用诊断超声辐照孕鼠腹部子宫体表投影区,辐照后4小时取材。用免疫组化方法检测上述各组胎鼠内耳区细胞内FOS蛋白的表达情况。结果：超声辐照20min组和３０min组的胎鼠内耳区内呈着色深浓的FOS蛋白强标记阳性细胞;10min组和对照组的内耳区均未观察到FOS蛋白标记的阳性细胞。结论：诊断超声持续辐照孕鼠腹部子宫体表投影区达一定的时间,可导致胎鼠内耳区细胞中FOS蛋白表达明显增加,表明对胎鼠内耳区细胞有刺激作用。     

二氢卟吩e6光动力学疗法对人舌鳞癌细胞株Tca8113的杀伤作用

目的：探讨二氢卟吩e6 （Ce6）光动力学疗法（Ce6-PDT）对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法：向体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞中加入Ce6,浓度分别为5、10、20、50和100μg/ml,孵育1.5h,予波长630nm半导体激光照射,照射的功率密度为100mW/cm2,能量密度分别为0.5、1、2、5、10和15J/cm2,继续孵育6h,用MTS比色法测定细胞存活率.结果：（1）不受光照的条件下,较低浓度Ce6（＜10μg/ml）与细胞共同培养而对细胞的毒性较小,Ce6浓度为20μg/ml时对细胞的杀伤率约为10％.（2）光照条件下,Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量正相关,呈浓度/剂量依赖性（P＜0.01）.结论：Ce62PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性.