大剂量甲氨喋呤副作用及其对策

我们对17例ALL 58次HD-MTX治疗,出现的副作用及处理进行了总结分析,认为:(1)副作用以呕吐、发热及药物性肝炎多见;(2)发热可能与MTX直接脑毒性有关;(3)药物性肝损害表现为GPT增高,可于短期内恢复;(4)局部应用0.1g/L四氢叶酸钙可减轻口腔及肛周溃疡的发生。     

小鼠骨骼肌源间充质干细胞的分离与培养

为观察成体小鼠肌肉组织中是否含有间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)，将分离胶原酶消化的肌肉单个核细胞，在含10％胎牛血清的α—MEM／F12培养液中培养，观察培养细胞的形态、细胞化学及增殖特性特征，用流式细胞术分析细胞表型，并观察细胞体外向成骨细胞分化能力。结果显示，从小鼠肌肉组织中分离和培养获得的细胞具有良好的增殖特性，CD34及CD45阴性，CD29及Sca—1阳性率在90％以上。细胞化学染色显示，细胞非特异性酯酶和酸性磷酸酶为阳性，碱性磷酸酶阴性，糖原为弱阳性。细胞经维生素C，β-磷酸甘油及地塞米松诱导后，碱性磷酸酶活性明显增强，阳性率达到94％以上。结论：成体小鼠肌肉组织中含有间充质干细胞，是肌肉干细胞群体中的重要组成部分。     

肝细胞生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞

目的人骨髓间充质干细胞（hMSC）经过腺病毒介导转染肝细胞生长因子（Ad-HGF）后进行鉴定。方法密度梯度离心法分离培养原代hMSC,取第三代hMSC转染Ad-HGF。比较转染前后的细胞形态变化,流式细胞仪鉴定hMSC/Ad-HGF的表面标志物,ELISA测定培养液上清的HGF浓度。结果 HGF基因修饰前后,均为成纤维样细胞形态;流式测定hMSC/Ad-HGF与hMSC细胞表型一致;ELISA测得hMSC/Ad-HGF的培养液上清HGF浓度显著高于hMSC（P〈0.001）。结论经HGF基因修饰的hMSC,维持了原有的细胞形态及特异性细胞表型,且高表达HGF。     

人骨髓间充质干细胞释放膜微囊条件探索

间充质干细胞（MSC）释放膜微囊（MV）是其促血管再生的重要机制。本研究旨在探索人骨髓MSC释放MV的适宜条件。收集5份健康人骨髓标本,分离培养并鉴定MSC。将第5代MSC分别悬浮于含10％胎牛血清或无血清的培养液中,按2×10^6／皿接种于直径为150mm的培养皿中,在低氧（1％氧浓度）或常氧条件下培养72h,每组20皿。将培养上清高速离心收获MV。计数培养后贴壁细胞,并测定MV蛋白质含量。电子显微镜观察MV的形态以鉴定MV。流式细胞术分析MV的表面标志。在脐静脉内皮细胞培养体系中,加入不同来源的MV（10μg/m1）,培养72h后利用MTr实验观察细胞增殖活性。结果表明：多数Msc释放的MV直径〈100nm,在电子显微镜下呈特征性的中空膜样结构。MV表达CD29、CD44、CD73和CD105,不表达CD31和CD45。在常氧含血清、常氧无血清、低氧含血清和低氧无血清条件下,台盼蓝抵抗的贴壁细胞扩增倍数分别为4．1、1．8、5．8和3．7,计算10^8细胞释放的MV蛋白含量分别为463．48±138．74、1604．07±445．28、2389．64±476．75和3141．18±353．01μg。MTT实验表明,低氧条件下获得的MV具有更好的促内皮细胞增殖作用。结论：低氧可促进MSC释放MV,低氧和无血清培养MSC可能是制备MSC—MV的适宜条件。     

人骨髓间充质干细胞的培养及向软骨细胞分化

为建立分离纯化、大鼠扩增人骨髓间充质MSC，改进其冰冻保存的方法，并初步探索其体内向软骨细胞分化的最佳方法，以Percoll(1.073g/ml）密度梯度离心法分离人骨髓中单个核细胞，用含经筛选的10％的胎牛血清的低糖DMEM体外培养扩增骨髓干细胞（MSC），FCM鉴定细胞纯度，传代2次以后的细胞吸附于明胶海绵内，以TGF－β为主要刺激因子体外诱导1周，植入裸鼠皮下。在不同的时间取出组织块，甲苯胺蓝染色显示细胞外基质。结果发现，体外培养扩增的人间充质MSC表达CD166、CD29、CD44等表面抗原，不表达CD34、CD45、HLA－DR等抗原；MSC可以不经消化，直接在原培养瓶内冻存在－70℃低温冰箱，3个月后复苏的细胞生物学特性没有明显改变；体外诱导的细胞植入裸鼠皮下4周后即出现软骨细胞特有的结构。说明骨髓MSC具有独特的生物学特征，体外培养的MSC具有体内成软骨能力，应用MSC构建软骨组织具有一定的可行性。     

大剂量甲氨喋呤副作用及其对策

我们对１７例ＡＬＬ５８次ＨＤ－ＭＴＸ治疗，出现的副作用及处理进行了总结分析，认为：（１）副作用以呕吐、发热及药物性肝炎多见；（２）发热可能与ＭＴＸ直接脑毒性有关；（３）药物性肝损害表现为ＧＰＴ增高，可于短期内恢复；（４）局部应用０．１ｇ／Ｌ四氢叶酸钙可减轻口腔及肛周溃疡的发生。     

Effect of icariside Ⅱ on the expression of osteoprotegerin in mouse osteoblasts

以17β-雌二醇为阳性对照组,观察不同浓度淫羊藿次甙Ⅱ对成骨细胞护骨素(OPG)表达的影响,结果发现20.ng/dl淫羊藿次甙Ⅱ上调成骨细胞OPGmRNA的表达,且优于阳性对照组(P<0.05),淫羊藿次甙Ⅱ也显著增加成骨细胞OPG分泌水平,20 ng/dl淫羊藿次甙Ⅱ组的促分泌活性显著优于阳性对照组,提示淫羊藿次甙Ⅱ作为淫羊藿甙在体内的主要代谢产物,在体外较低剂量即可显著促进成骨细胞OPG的表达,具有良好的抗骨质疏松作用.     

间充质干细胞及其临床应用中的几个问题

在血液病的治疗方面,骨髓造血干细胞的作用早已得到公识。目前,在许多国家间充质干细胞已经被批准进入多个临床试验,用于治疗移植物抗宿主病、克罗恩氏病、肝脏纤维化和骨关节损伤等多种疾病。然而,有关体内间充质干细胞的本质、体外培养后间充质干细胞的特性变化、细胞移植后在体内的分布、间充质干细胞治疗的作用机制及其临床应用的安全性等诸多根本性的问题,必须在间充质干细胞被广泛应用之前得以明确。这里尚有多少个不确定的环节？尚有多少个需要认识的关键性问题？文章结合以上问题,对近几年间充质干细胞的研究进展进行了综述和分析。     

血小板生成素转导鼠T淋巴细胞的增殖和分化

为探讨ＴＰＯ（血小板生成素）基因导入对Ｔ细胞增殖和分化影响的规律,将编码人ＴＰＯ的质粒ＤＮＡ６０μｇ用脂质体包裹后,经肌肉途径转导入Ｂａｌｂ／ｃ小鼠体内。用ＣＤ４和ＣＤ８的特异性抗击 标记小鼠各种免疫组织中的Ｔ细胞,借助流式细胞术分析它们的组成和变化。结果发现ＴＰＯ基因导入使骨髓中的成熟和未成熟Ｔ细胞数量在经过短期下降后全部大幅度增多,胸腺未成熟Ｔ细胞增加;而脾脏和血液循环中成熟Ｔ细胞增多,特别是     

c-CBL是连接BCR/ABL与磷脂酰肌醇-3激酶的桥梁

目的 :探讨原癌基因产物c CBL在P2 10BCR/ABL激发的异常信号转导中的作用。方法 :以慢性粒细胞白血病细胞株K56 2细胞为研究对象 ,用反义技术、免疫沉降和蛋白免疫印迹分析 ,研究c CBL、BCR/ABL和磷脂酰肌醇 3激酶 (phosphatidylinositol 3kinase ,PI3K)三者之间的相互关系。结果 :在K56 2细胞内 ,c CBL、BCR/ABL与PI3K可能形成一种三分子复合物 ,c cbl反义RNA转染细胞后BCR/ABL免疫沉降物中PI3K含量减少 59%左右 ,而BCR/ABL自身酪氨酸磷酸化水平无明显改变。结论 :原癌基因产物c CBL对BCR/ABL酪氨酸激酶活性无反向调节作用 ,它是连接BCR/ABL与PI3K之间的重要桥梁分子。