人牙源性间充质干细胞成骨分化潜能的比较

目的 比较人根尖乳头干细胞(SCAPs)、牙髓间充质干细胞(DPSCs)和牙槽骨间充质干细胞(ABMMSCs)的体外成骨分化能力。方法 取智齿和牙槽骨组织,分别提取根尖乳头干细胞、牙髓和牙槽骨间充质干细胞,待细胞贴壁后传代。在显微镜下观察原代和P3代的细胞形态;流式细胞仪检测细胞免疫表型;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Cell Counting Kit-8试剂盒分析细胞的衰老状态和增殖能力;成骨诱导后进行碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色以及qRT-PCR检测成骨相关基因比较成骨能力。结果 3种细胞形态无明显差异,呈现成纤维细胞形态,长梭形,传代后细胞形态光滑一致;3种细胞无衰老差异,均保持稳定增殖能力,SCAPs的增殖能力明显高于其他2种细胞,ABMMSCs的增殖能力较弱;7 d和14 d成骨诱导后ALP染色和茜素红染色表明ABMMSCs的成骨能力明显强于SCAPs和DPSCs; qRT-PCR检测显示ABMMSCs的成骨相关基因升高最为显著。结论 SCAPs、DPSCs和ABMMSCs具有稳定的生物学性能,均可进行成骨分化,ABMMSCs体外成骨能力强于DPSCs和SCAPs...     

牙种植体周围炎相关因素和治疗新进展

[提要] 种植体周围炎指发生在已形成骨结合的种植体周围并引起支持牙槽骨丧失的一种炎症,已经成为引起种植义齿失败的主要原因之一。因此,种植体周围炎的相关危险因素和治疗方法受到学者们的高度关注。本文就种植体周围炎的相关危险因素及治疗方案的最新研究进展作一综述。     

转人B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测

目的探讨转入B7-H3基因鳞癌细胞株的建立及其检测。方法采用脂质体介导法将已建好的真核表达质粒pEGFP-C1-B7-H3导入人鳞癌细胞Tca8113中（Tca8113/B7-H3）,RT-PCR检测B7-H3在该细胞中的表达,Western blot检测其蛋白的表达。经G418筛选后,用有限稀释法建立稳定高表达的带有B7-H3基因的Tca8113鳞癌细胞株。结果RT-PCR方法检测到目的基因B7-H3的一个215bp大小的cDNA扩增产物;DAB显色,裂解的Tca8113/B7-H3基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约65～86ku大小的特异性条带。转染B7-H3的Tca8113细胞,经过细胞传代培养后仍然能够检测到高表达的B7-H3基因,经过有限稀释法建立了Tca8113/B7-H3细胞株。结论成功建立了Tca8113/B7-H3细胞株,为以后的体内外试验提供了很好的平台,为近一步研究其抗肿瘤作用奠定了基础。     

点突变型HIF-1α诱导犬骨髓基质干细胞骨向分化的研究

目的:检测点突变型HIF-1α对犬骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells.BMSCs)骨向分化的作用.方法:采用LR重组系统构建慢病毒载体Lenti-WT(wild HIF-lα)、Lenti-MT(mutant HIF-1α)及对照组LentiLacZ.分别用Lenti-LacZ、Lenti-WT及Lenti-MT转染犬BMSCs,以LacZ组为对照,成功转染后,分别在0、1、4、7、14及21d提取总RNA和蛋白质,通过RT-PCR和Western印迹检测目的基因在体外常氧条件下对BMSCs成骨因子表达的调控.将带有目的基因的BMSCs按2×105/孔接种至6孔板,分别于14d和21d,运用茜素红染色(alizarin red-S staining,ARS)检测其钙结节的表达采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析.结果:当MOI=9时,BMSCs的转染效率达90％以上.目的基因转染后第4天,BMSCs的成骨因子在mRNA和蛋白水平表达显著提高,14～21 d时达到高峰,并维持在高表达状态(P＜0.05).ARS结果表明,目的基因在常氧条件下可诱导BMSCs向成骨方向分化.结论:体外常氧条件下,突变型HIF-1α能够稳定表达且保持高度活性,Lenti-MT可显著提高犬BMSCs的成骨活性.     

细胞微环境对生物活性大分子疗效的影响

随着药物载体技术的快速发展,将生物活性大分子输送至特定靶细胞治疗各种疾病日益受到关注.虽然生物活性大分子在一些疾病治疗中取得了一定疗效,但靶细胞微环境对其最终疗效影响较大.许多疾病和损伤扰乱了正常细胞外基质（ECM）的体系结构、细胞对ECM的黏附及之后的细胞活动.因此,ECM构建的细胞微环境对维持机体平衡、组织再生及修复起着关键性作用.鉴于此,就ECM构建的细胞微环境对生物活性大分子疗效的影响作一综述,为载药系统的设计及药物合成等提供一定的理论基础.     

miR-210促进小鼠BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌

目的 通过体内与体外的手段验证miR-210能够有效的促进骨髓间充质干细胞(BMMSCs)血管内皮生长因子(VEGF)的表达和分泌.方法 构建慢病毒载体,分别转染BMMSCs和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),Lenti-miR-210/BMMSCs和Lenti-LacZ/BMMSCs培养第7天RT-PCR法检测VEGF表达,第14天Western blot法检测VEGF表达,PKH26荧光染色Lenti-miR-210/HUVEC和Lenti-LacZ/HUVEC,Matrigel成管实验24 h,荧光显微镜观察成管效果;agomir-210和agomir-NC分别与BMMSCs复合HyStem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7d后取标本CD31免疫荧光染色.结果 miR-210慢病毒载体转染BMMSCs,第7天RT-PCR和第14天Western blot法检测VEGF表达,明显高于Lenti-LacZ/BMMSCs(P ＜0.05);Matrigel成管实验24 h结果显示:LentimiR-210/HUVEC组与Lenti-LacZ/HUVEC组相比,端端接触明显且管状结构完整;agomir-210和agomir-NC与BMMSCs复合HyStem-HP凝胶缓释系统裸鼠皮下注射7d后标本CD31免疫荧光染色结果:agomir-210组CD31阳性细胞含量明显高于agomir-NC组.结论 通过体内与体外的检测,miR-210过表达能够有效促进BMMSCs血管内皮生长因子的表达和分泌.     

合成锂皂土-海藻酸钠复合屏障膜的制备及研究

目的 通过制备合成锂皂土(LAP)—海藻酸钠(SA)复合膜,测试其力学性能及生物相容性,研究其应用于组织工程屏障膜的可能性.方法 将LAP溶液与SA溶液按比例混合,搅拌均匀,通过热喷涂组装方法成膜,制备LAP与SA的质量分数比分别为1∶10、3∶10、5∶10、7∶10、9∶10的复合膜和纯SA膜.采用力学万能实验机测试各组膜样品(n=6)抗拉强度.取纯SA膜组和抗拉强度最大的复合膜组样品,用扫描电镜和透射电镜观察微观结构,X射线衍射仪和傅立叶变换红外光谱仪分析各成分.同时取抗拉强度最大的复合膜组,重新制备膜样品浸泡于0.5 mol/L氯化钙溶液中5 s,待其自然干燥后测试抗拉强度.空白对照组、纯SA膜组和抗拉强度最大的复合膜组(n=5)与NIH/3T3共培养24、48 h后用CCK-8检测各组细胞存活率.结果 加入LAP后复合膜的截面呈有序的层状结构,X射线衍射及傅立叶变换红外光谱分析显示复合膜中存在LAP.复合膜抗拉强度随LAP比例增加而先增加后降低,LAP与SA的质量分数比为5∶10时抗拉强度最大,达(166.9±11.5)MPa,此组复合膜用Ca2螯合后抗拉强度为(178.0+14.8)MPa.培养细胞24、48 h时,纯SA膜组、复合膜组NIH/3T3数量与空白对照组差异均无统计学意义.结论 LAP与SA的质量分数比为5∶10时复合膜抗拉强度最大,且细胞相容性良好.     

抗菌高强复合膜的制备及其表征

目的 通过测试负载纳米银的海藻酸钠(SA)细菌纤维素(BC)复合膜的拉伸强度,对金黄色葡萄球菌的抑菌性及其对鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响,探讨其作为新型引导骨组织再生膜的可行性.方法 将SA溶液与BC溶液按比例均匀混合(SA与BC的质量分数比分别为10∶3、10∶5、10∶7、10∶9及纯SA膜),自蒸发成膜,在膜表面通过多巴胺原位还原生成银纳米颗粒(AgNPs).采用力学万能实验机测试各组膜试件抗拉强度.取抗拉强度最大的复合膜试件,用扫描电镜观察微观结构,X射线衍射仪分析成分.用细胞计数试剂盒检测复合膜的生物相容性.抑菌圈法测试其抗菌性能.结果 AgNPs在Ag-SA/BC复合膜中均匀分布,X射线衍射分析显示复合膜中存在AgNPs、SA、BC.当SA与BC质量分数比为10∶7时复合膜抗拉强度最大,达(223.8±9.9)MPa.细胞实验结果显示Ag-SA/BC复合膜具有优异的生物相容性.金黄色葡萄球菌孵育24h后显示清晰的抑菌圈.结论 Ag-SMBC质量分数比10∶7时复合膜抗拉强度最大,对金黄色葡萄球菌有优异的抗菌性且细胞相容性良好.     

Imageware逆向工程软件在固定桥建模中的应用

目的借助Imageware逆向工程软件建立仿真的天然牙支持式固定桥三维实体模型,为后续模型加载的生物力学研究打下基础。方法CT扫描一位志愿者下颌骨,通过Mimics软件分离出牙齿和颌骨,生成点云数据,导入Imageware逆向工程软件中生成三维曲面模型,在ANSYS10．0有限元软件中建立三维有限元模型。结果本实验重建了志愿者下颌部分颌骨（皮质骨和松质骨）、牙齿及其周围牙周膜的三维实体模型,并在此模型基础上根据基牙预备及烤瓷冠桥的要求,构建了下颌后牙区三单位的烤瓷固定桥三维实体模型。结论Mimics软件结合逆向工程软件的使用,可以建立比较逼真的三维实体模型,而且操作简便,可以在烤瓷冠桥的构建中缩短建模时间。     

下颌后牙区即刻种植综合序列治疗新方案

目的 前牙区即刻种植技术日趋成熟与普及,前牙区关注美学修复,而后牙区更注重咀嚼功能的恢复。由于下颌后牙多为双根牙,牙拔除后即刻种植面临牙槽间隔备洞时容易发生近远中偏差,影响种植体的精准植入。为解决这一临床问题,本研究进行了新治疗方案的探索与实践。方法 本团队总结出一套“下颌后牙区即刻种植综合序列治疗新方案”的新方法,微创拔除无保留价值的下颌后牙,最大可能保存牙槽间隔的骨量及牙槽窝的骨壁,精准地将种植体植入牙槽窝间隔处,并研发了后牙区即刻种植专用系列手术器械,申请了18项专利,完成了成果转化及医疗产品生产和临床应用。结果 临床验证了该方案可以精准植入种植体,且增加了后牙种植体的初始稳定性。结论 该方案有利于种植体植入理想位置,有效提高下颌后牙即刻种植的成功率,值得推广。