α-synuclein-pEGFP真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

为了构建 α-synuclein-p EGFP真核表达载体 ,检测其在 SH-SY5 Y细胞内的表达 ,本研究应用下述方法 :PCR扩增 α-synuclein基因并消除终止密码子 ;PCR产物连入 p GEM T-easy载体 ,经测序确认无误后 ,亚克隆入 p EGFP-N1,构建α-synucle-in-p EGF P真核表达载体 ;Lipofect AMINE法转染 SH-SY5 Y细胞 ;荧光显微镜检测报告基因表达产物 EGFP,原位杂交和免疫荧光细胞化学法检测α-synuclein m RNA及其蛋白表达。结果显示 ,该载体转染 SH-SY5 Y细胞后 ,可在细胞内观察到报告基因和目的基因的表达产物。结论 :α-synuclein-p EGFP真核表达载体构建成功 ,并可在细胞内表达。本工作为今后动态观察研究α-synu-clein致 Parkinson病多巴胺能神经细胞损伤机制奠定基础     

Desert Hedgehog诱导大鼠胚胎中脑神经前体细胞定向分化为多巴胺能神经元

目的 研究Desert Hedgehog(DHH)对胚胎中脑神经前体细胞(NPCs)向多巴胺能神经元分化的诱导作用。方法 大鼠DHH病毒上清感染COS7、NIH/3T3和9L细胞, 用免疫荧光、实时定量PCR和Western blot方法检测DHH表达。分离培养大鼠胚胎中脑神经前体细胞，免疫荧光鉴定神经前体细胞的增殖分化特性。条件细胞表达DHH成功后分别与上述NPCs共培养10d，免疫荧光检测酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果 DHH在COS7、NIH/3T3和9L细胞中成功表达；同时，分离培养的大鼠胚胎中脑神经前体细胞具有良好的增殖分化特性，但两者共培养10d后偶见TH阳性的细胞。结论 DHH编码的蛋白不能或不能单独诱导与其共培养的NPCs定向分化为多巴胺能神经元。     

乳牙根尖周病损组织细菌组成与临床症状的关系

目的:检测乳牙根尖周病损组织中菌群构成,分析检出细菌种类与临床症状的关系。方法:收集31例乳牙根尖周炎患儿的根尖周病损组织,采用16S rDNA 克隆测序法检测样本中菌群构成,统计分析菌种检出率与有无自发疼、咀嚼疼及窦道的关系。结果:31个乳牙根尖周病损组织样本共获得2057个可分析序列,鉴定出268个菌种或基因型,从属于9个菌门。检出率最高的具核梭杆菌(74.19%)、隐蔽小杆菌(67.74%)和纤细弯曲杆菌(64.52%)与各临床症状间无明显关联,普氏坦纳菌在有自发痛样本中检出率显著增高,口普氏菌和副溶血嗜血杆菌在有咀嚼痛样本中的检出率显著增高,变黑普氏菌和短优杆菌存在的样本发生窦道的几率显著增高,两种未培养韦荣氏菌的检出率在有咀嚼痛的样本中显著减少。结论:乳牙慢性根尖周病损是包含多种细菌的混合感染,普氏菌、优杆菌及韦荣氏菌与临床症状有一定的关系。     

四物汤对血管性痴呆大鼠的认知功能及脑组织中AchE、SOD、GSH-Px活性的影响

目的:研究四物汤对血管性痴呆大鼠的认知功能及脑组织中乙酰胆碱酯酶(AchE)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的影响。方法:反复夹闭大鼠双侧颈总动脉结合腹腔注射硝普钠降低血压的方法制备拟血管性痴呆大鼠模型,观察四物汤对大鼠的学习记忆能力及脑组织中AchE、SOD和GSH-Px活性的影响。结果:四物汤能提高血管性痴呆鼠的学习记忆能力;同时可提高SOD和GHS-Px活性,降低AchE的活性。结论:改善胆碱能神经功能、减轻自由基损伤可能是四物汤改善血管性痴呆的机制之一。     

四物汤对血管性痴呆大鼠脑组织中BDNF和EGF的影响

目的:研究四物汤对血管性痴呆大鼠脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)和表皮生长因子(EGF)表达的影响.方法:通过反复夹闭大鼠双侧颈总动脉结合腹腔注射硝普钠降低血压制备拟血管性痴呆大鼠模型.以不同剂量四物汤进行治疗后,测定治疗和不治疗组痴呆大鼠的学习记忆能力和脑组织中BDNF、EGF的含量.结果:四物汤能提高血管性痴呆鼠的学习记忆能力,并能促进脑组织中BDNF和EGF的高表达.结论:四物汤能使血管性痴呆大鼠脑组织中EGF和BDNF的表达升高,可能是其治疗作用的分子机制之一.     

应用直接酪胺信号放大方法显示Y染色体荧光原位杂交信号

目的用直接酪胺信号放大(tyramine signal amplification,TSA)方法显示Y染色体荧光原位杂交信号,以提高检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度。方法以小鼠Y染色体重复序列pY353/B cDNA为模板标记RNA探针,以雌性小鼠为对照,用原位杂交方法杂交Y染色体特异性基因区域,分别用直接TSA方法和"三步抗体法"显示荧光原位杂交信号。通过计数Y染色体阳性细胞核占所有细胞核的百分率来计算TSA法和"三步抗体法"检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度,比较分析两种方法灵敏度的差异。结果"三步抗体法"在脑切片检测Y染色体阳性信号的灵敏度和特异度分别为85.67%和100%;直接TSA法在脑切片检测Y染色体阳性信号的灵敏度和特异度分别为92.82%和100%。结论TSA方法检测脑组织切片Y染色体荧光原位杂交信号的灵敏度比"三步抗体"法有显著的提高,可以用于脑内追踪和分析骨髓干细胞的迁移规律。     

脑卒中合并糖尿病患者营养风险筛查研究现状

脑卒中和糖尿病都是营养相关性疾病,脑卒中后的营养教育和管理是治疗中的重要组成部分。脑卒中合并糖尿病患者的营养管理,首先应建立营养风险评估体系。现综述脑卒中合并糖尿病患者营养风险评估的研究现状,旨在为脑卒中合并糖尿病患者的营养管理提供依据。     

ERCC1基因C118T单核苷酸多态性与儿童晚期头颈部横纹肌肉瘤短期预后的相关性

目的 探讨ERCC1基因C118T单核苷酸多态性与儿童晚期头颈部横纹肌肉瘤短期预后的相关性.方法 对41例接受以铂类为主要药物化疗的晚期头颈部横纹肌肉瘤的患儿进行ERCC1基因检测,分析其C118T单核苷酸多态性及基因拷贝数与患儿短期预后的相关性.结果 ERCC1基因C118T突变类型为C/C占29.3％(12/41),C/T 36.6％(15/41),T/T 34.1％(14/41).C/C基因拷贝数为1.151 8±0.265 0,C/T 0.694 8±0.184 0,T/T 0.679 2±0.178 0,C/C组与C/T+T/T组基因拷贝数的差异有统计学意义(P=0.000),且两组间短期预后差异亦有统计学意义(P=0.034).结论 晚期头颈部横纹肌肉瘤患儿ERCC1基因C118T单核苷酸多态性以C/T+T/T型为主,与C/C型相比,C/T+T/T型ERCC1基因表达水平更低,患儿对铂类化疗药物更加敏感,疗效更好,缓解率高,近期生存情况更佳.     

ApoE基因敲除小鼠主动脉组织中CD55、CD59表达的变化及意义

目的 探讨ApoE基因敲除小鼠主动脉组织中CD55、CD59的表达变化及意义.方法 实验动物分为2组:对照组(C57BL/6小鼠10只)和动脉粥样硬化(AS)组(ApoE基因敲除小10只).普通饲料喂养8周.监测体质量、血脂,观察斑块病变情况;采用免疫荧光和Real-time PCR技术,从蛋白水平和mRNA水平来观察...     

大鼠Hes1基因真核表达载体的构建及瞬时表达在神经前体细胞分化中的作用

目的 探讨Hes1基因高表达对神经前体细胞分化的影响. 方法从大鼠脑组织中提取总BNA,用RT-PCR方法获得Hes1基因的全长cDNA,插入pGEM-T-Easy克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pCDNA3.1,用脂质体将重组质粒转染原代培养的神经前体细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR方法鉴定Hes1基因在神经前体细胞基因组中的存在,实时荧光定量PCR检测Hes1基因在转染细胞中的过表达情况. 结果 经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定,证实目的 基因已插入重组质粒,RT-PCR证明,经G418筛选得到的转基因神经前体细胞克隆的基因组DNA中存在Hes1基因;实时荧光定量PCR进一步证明,转基因神经前体细胞Hes1基因的mRNA高表达. 结论 构建了大鼠Hes1基因的真核表达载体,获得了高表达Hes1基因的神经前体细胞克隆.Hes1基因高表达可抑制神经前体细胞Ngn1的表达,并促进神经前体细胞向神经胶质细胞的分化.