α-突触核蛋白磷酸化参与小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的　研究α-突触核蛋白(α-SYN) 129位点磷酸化修饰是否具有神经元保护作用。方法　应用反转录病毒感染小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D,通过实时定量PCR检测各组细胞内α-SYN过表达情况,并通过免疫细胞化学方法检测野生型α-SYN (WT/α-SYN)及129位点磷酸化α-SYN (S129D/α-SYN)过表达后α-SYN在细胞内聚集情况,应用CCK-8检测细胞活力,观察WT/α-SYN及S129D/α-SYN对MN9D的细胞毒性,从而明确S129D/α-SYN对多巴胺能神经元的影响。 结果　实时定量PCR结果显示,WT/α-SYN及S129D/α-SYN在MN9D细胞内均过表达（P<0.01）。WT/α-SYN过表达组细胞活力明显下降（P<0.01）,共聚焦显微镜观察未见明显的α-SYN聚集;S129D/α-SYN过表达组细胞内可观察到明显的α-SYN聚集体,同WT/α-SYN组相比细胞活力有明显提高（P<0.01）。结论　129位点丝氨酸的磷酸化修饰在一定程度上减轻了WT/α-SYN过表达所引起的细胞毒性。     

Nurr1在MN9D细胞中的过表达及其对酪氨酸羟化酶的影响

目的:观察MN9D细胞中Nurr1的表达和分布及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响.方法:应用高压液相色谱、免疫细胞化学、转基因、Western blot和Northern blot等方法检测了MN9D细胞中多巴胺及其代谢物的水平和Nurr1蛋白在细胞中的分布,建立了过表达Nurr1的细胞株并观察了Nurr1过表达对TH基因的影响.结果:MN9D细胞裂解液中含有大量多巴胺及其代谢物;Nurr1蛋白主要分布在MN9D细胞的胞质中,尤以核周最多;MN9D细胞中有Nurr1的mRNA存在和蛋白质的表达;过表达Nurr1的MN9D细胞A1株酪氨酸羟化酶表达增高.结论:Nurr1与多巴胺能神经元发育有关,有可能用于帕金森病的基因治疗.     

制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化

目的：获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针，检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法：实验于2002-10／2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2，6，12周帕金森病大鼠模型60只，每组各20只，用来做原位杂交的组织处理；将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、Xba I限制性酶切反应得到线形质粒，再分别以17和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针，通过斑点杂交检测探针的浓度；将反义和正义探针分别作等梯度稀释，分别与组织切片杂交，强度洗脱后，观察使对照正义链探针没有杂交信号，而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度，从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用；用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2，6，12周的组织切片，杂交后冲洗，免疫检测及呈色，观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达。结果：①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针，其特点为单链探针，杂交过程不需变性，可合成最可靠的反义链探针，杂交结果稳定，体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致，其浓度分别为150．120mg／L。②将反义和正义探针分别等梯度稀释，分别与组织切片杂交，强度洗脱后，结果证明25mg／L浓度最适宜，对照正义链探针没有杂交信号，而反义探针杂交后也无本底。③原位杂交证实，反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交。用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积，左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化，帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化；6周时，损伤侧较健侧表达明显上调，12周时，损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别。结论：实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针，并得出无本底的最适宜浓度；制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况，并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化。     

新生儿窒息新法复苏的体会

新生儿窒息是新生儿死亡的主要原因之一,也是2000年降低1/3五岁以下小儿死亡率的主要研究课题。本文总结1995年9月～1998年9月我院产、儿科医务人员实行岗前复苏培训,应用新法复苏的体会,并与既往病历对比研究,籍以明确岗前复苏培训在新生儿窒息复苏中的意义和作用。     

小儿心脏早搏97例临床分析

早搏为小儿心律失常的首位,虽多数不治而愈,但少数病例使用抗心律失常药物疗效不佳,有些早搏与心功能关系至关重要与患儿预后密切相关。我院近10年来共收治心律失常病儿137例,其中早搏97例,现作一分析并报告如下。 1 临床资料 1.1 一般资料:97例中男65例,女32例,3月～3岁6例,～7岁24例,～14岁67例。以心律失常就诊的32例,以上呼吸道感染就诊37例,支气管     

天津市伤害监测分析与控制措施的探讨

目的分析天津市伤害流行的特点和分布,为开展伤害干预奠定基础。方法由全市各级各类临床医院每日填写急、门诊和住院伤害病例报告卡,辖区防病站每月收集、录入上报,天津市疾病预防控制中心进行全市监测数据的整理分析及信息发布。结果启动伤害监测的前6个月,共报告伤害病例33 924人,男性为22 996例,占67.79%;女性10 928例,占32.21%;天津市伤害原因的前5位是跌倒、机动车交通事故、暴力(斗殴)、撞伤(击伤)和坠落。结论伤害在不同年龄、不同性别均有发生,但各种伤害具有不同的高危人群,应在伤害监测的基础上,针对性的开展预防控制。     

天津市居民膳食结构及与血脂异常的关系

目的了解天津居民膳食结构及膳食营养水平,分析主要膳食因素与血脂异常患病的风险。方法采用2002年全国营养与健康状况调查统一方法,抽取天津城区常住人口1080户,对其中部分人群进行膳食调查及血生化检测。结果天津居民膳食结构中存在着钙、镁、锌、钾、硫胺素、核黄素、纤维素和视黄醇等摄入不足;钠、脂肪、维生素E等超过参考摄入量;与膳食平衡宝塔比较,天津居民蔬菜、水果、奶类及豆制品等食物摄入偏低,而油脂和食盐摄入过量;脂肪、蔬菜水果、膳食纤维摄入与血脂异常的患病风险密切相关,膳食脂肪的供能比≥30/是血脂异常的危险因素,OR为2.22;蔬菜水果摄入量≥500g/d是血脂异常的保护因子,OR为0.47;每人每天膳食纤维摄入量≥20g是血脂异常的保护因素,OR为0.24。结论天津市居民膳食结构与营养水平影响着天津居民的健康状况,与血脂异常的患病密切相关。     

天津城区居民血压状况调查

目前，我国人群中高血压、冠心病患病率持续上升，并且高血压又是脑卒中和糖尿病等疾病的重要危险因素。为了解天津市人群中高血压的患病状况，为防治高血压及其并发症提供参考依据，笔者于2002年对天津城区15岁及以上居民血压进行了调查。