河南省和云南省HIV-1病毒env基因在脑脊液及血液中基因型分析

［摘要］　目的　了解河南省和云南省HIV-1病毒env基因在脑脊液及血液中的亚型变化。方法　收集6例河南省和5例云南省HIV-1阳性病人的血浆及脑脊液标本并提取RNA,逆转录为模版DNA后,采用巢式PCR法扩增env基因,对扩增产物进行核苷酸序列测定,构建系统进化树并进行离散度分析。结果　云南省各基因亚型与CRF07-BC、CRF08-BC和C亚型相近,河南省各基因亚型与B和B’亚型相近;河南人群脑脊液的测序结果显示患者1的部分克隆株与患者5的基因亚型一致,云南人群中12号患者和127号患者的血液及脑脊液的病毒亚型来自不同的分支,而其他患者的血液与脑脊液的病毒亚型一致。河南省HIV-1各亚型分离株脑脊液和血液间基因离散度差异有统计学意义(P<0.05)。结论　云南省HIV-1基因亚型为C亚型,而河南省为B和B’亚型。脑脊液和血液中的病毒亚型存在变异,中枢神经系统中HIIV病毒的离散度低于血液中HIIV病毒的离散度。     

Nurrl基因在大鼠体外培养骨髓基质细胞的表达

目的：为获得高效表达孤儿核受体(orphan nuclear receptor，Nurrl)基因的骨髓基质细胞。方法：采用分子克隆技术，构建携带Nurrl基因的重组腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)载体；与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒phelper一起用磷酸钙法转染包装细胞HEK293制备具有感染活性的AAV-Nurrl病毒粒子；用病毒上清液感染原代培养的大鼠骨髓基质细胞(Marrow stromal cells，MSCs)，并用免疫细胞化学方法检测阳性细胞。结果：经酶切鉴定和DNA测序，得到了序列正确的重组pAAV-Nurr1；感染HTl080细胞进行病毒滴度测定，每mL病毒贮存液可达10^12个阳性细胞；获得了Nurrl阳性的骨髓基质细胞，阳性率在60％以上。结论：重组AAV携带的Nurrl基因能够在MSCs中表达，本文为进一步探讨将该细胞用于帕金森病基因治疗的可能性研究奠定了基础。     

Nurr1在MN9D细胞中的过表达及其对酪氨酸羟化酶的影响

目的 :观察MN9D细胞中Nurr1的表达和分布及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响。 方法 :应用高压液相色谱、免疫细胞化学、转基因、Westernblot和Northernblot等方法检测了MN9D细胞中多巴胺及其代谢物的水平和Nurr1蛋白在细胞中的分布 ,建立了过表达Nurr1的细胞株并观察了Nurr1过表达对TH基因的影响。结果 :MN9D细胞裂解液中含有大量多巴胺及其代谢物 ;Nurr1蛋白主要分布在MN9D细胞的胞质中 ,尤以核周最多 ;MN9D细胞中有Nurr1的mRNA存在和蛋白质的表达 ;过表达Nurr1的MN9D细胞A1株酪氨酸羟化酶表达增高。结论 :Nurr1与多巴胺能神经元发育有关 ,有可能用于帕金森病的基因治疗。     

口服盐液配合TDP理疗治疗小儿秋季腹泻530例

秋季腹泻,季节性强,高峰期明显,9～11月底就诊者占儿科门诊病人的80％以上。我院1987～1989年三年中收治秋季腹泻病儿1700例,其中960例在门诊治疗。我们采用世界卫生组织推荐的口服盐液配合TDP照射治疗530例,收到了满意效果。一、一般资料;530例病儿中男316例。女214例,男女之比为1.47:1。年龄在2月至5岁之间,平均10个月。6个月至1岁为发病高峰,占87％。治疗时间最短3天,最长7天,平均4.8天。均治愈。     

利用RNA干扰技术构建IER5-SiRNA-Hela细胞系

目的观察小干扰RNA（siRNA）转染Hela细胞后,对IER5基因抑制效果,筛选出高效的siRNA转染质粒。方法利用siRNA设计软件,将设计好的RNA片断插入到siRNA表达质粒载体PsilencerTM 3.1-H1 hygro中,测序正确后转染至Hela细胞中。利用Real-time PCR的方法 ,测定siRNA对Hela细胞中IRE5的抑制效果。结果在mRNA水平及Western blot测试,IER5-siRNA-Hela细胞的IER5基因mRNA表达抑制效果明显。从细胞形态上讲,IER5-siRNA-Hela细胞与正常Hela细胞相比,IER5-siRNA-Hela细胞比Hela细胞体积大。结论本实验成功的获得了特异性抑制IER5基因的IER5-siRNA-Hela细胞系。     

雌激素及其受体调节剂对去势APOE基因敲除小鼠胸主动脉中NF-κB和MMP-9的影响

目的：观察雌激素及其受体调节剂对去势APOE基因敲除（APOE-/-）小鼠胸主动脉血管组织中NF-κB和MMP-9的影响。方法：44只APOE-/-小鼠喂养4 周, 确定动脉粥样硬化斑块形成后, 将其随机分成模型组和5组不同给药组：生理盐水0.2 mL/d（模型组）;戊酸雌二醇0.13 mL/d + 地屈孕酮0.13 mL/d（HT组）;ICI 皮下注射0.13 mL/周+戊酸雌二醇0.13 mL/d（ICI+E2组）;ICI 皮下注射0.13 mL/周+戊酸雌二醇0.13 mL/d+地屈孕酮0.13 mL/d（ICI+HT组）;戊酸雌二醇0.13 mL/d+PHTTP 0.13 mL/d（PHTTP+E2组）;戊酸雌二醇0.13 mL/d+地屈孕酮0.13 mL/d+PHTTP 0.13 mL/d（PHTTP+HT组）。8周后,获取动脉粥样硬化斑块的胸主动脉组织后行总RNA提取、逆转录,利用real-time PCR 检测小鼠胸主动脉NF-κB和MMP-9的mRNA含量。结果：各组NF-κB mRNA 的表达差异有统计学意义（P＜0.05）,而MMP-9 mRNA 的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。与模型组相比,PHTTP+E2和PHTTP+HT组NF-κB表达显著升高（P=0.047和P=0.035）,ICI+HT组NF-κB的表达明显低于PHTTP+HT组（P=0.028）;模型组、HT组、ICI+E2组及ICI+HT组间NF-κB的表达差异不明显（与模型组相比,P分别为0.072,0.068和0.054）。结论：ERα介导的激素替代治疗（PHTTP+E2和PHTTP+HT）使NF-κB的表达升高,提示ERα可能对动脉粥样硬化斑块稳定性不利。     

人DAT基因的克隆及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响

目的:探讨人多巴胺(DA)转运体(dopamine transporter,DAT)基因过表达对单胺类递质代谢的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增DAT cDNA片段,重组于pGEM-T-EASY载体中并进行全序列测定。重组真核表达载体pLNCX2-DAT转染MN9D细胞,Western Blot检测DAT的表达,高压液相(high-performance liquid chromatography,HPLC)法检测细胞内外DA含量的变化。结果:RT-PCR方法扩增得到1981bp的cDNA片段,测序结果表明所得到的片段与DAT序列完全一致;Westein Blot证实转染后的MN9D细胞(实验组)内DAT基因表达明显高于对照组(P0.05);HPLC结果表明实验组中细胞内外的DA含量明显高于对照组(P0.05)。结论:DAT高表达明显促进DA的循环和利用,为帕金森病的基因治疗提供了理论依据。     

三联疗法治疗小儿幽门螺杆菌感染64例体会

近几年来,人们对小儿幽门螺杆菌(HP)感染的治疗越来越重视。我们于1993年10月～1997年10月共治疗小儿HP感染116例,其中使用三联疗法64例。本文就治疗作一分析,并谈体会如下。 1 临床资料 1.1 诊断标准:①具有反复发作的上消化道症状,如腹痛、呕吐、厌食、暖气等。②经体检或仪器检查排除心、肺、肝、肾等器质性病变。③具有胃镜检查依据。④应用一分钟快速HP诊断试纸检测胃粘膜标本(取材统一规定为胃窦大弯或后壁距幽门3～5cm内取一或二块粘膜行组织切片)。 1.2 病例来源及表现:经门诊确诊的116例,     

慢性应激状态下大鼠睾酮水平测定

目的 通过对于慢性应激模型和运动疲劳模型大鼠的血清睾酮水平的对比研究,探讨慢性应激过程中睾酮水平变化规律及其与发生疲劳的关系.方法 建立大鼠慢性不可预测性应激模型及运动性疲劳模型;应用大鼠轨迹追踪系统对不同应激时间大鼠进行活动量观测,应用放射性免疫法对各组大鼠进行血清总睾酮和游离睾酮进行测定.结果 与正常组比较,慢性应激大鼠第1周组活动量(运动轨迹长度,下同)增加(P<0.01),第2周组活动量下降(P<0.01).各实验组大鼠游离睾酮与总睾酮之间均存在线性相关.慢性应激各组随应激时间延长,其游离睾酮与总睾酮比值呈逐渐下降趋势,并且能够达到运动疲劳组水平.结论 慢性应激条件可以明显引起大鼠睾酮水平下降.提示分层检测慢性疲劳综合征人群血清总睾酮及游离睾酮的水平以及进行动态性研究可能为本病症的诊断提供生化指标.以游离睾酮与总睾酮比值为指标检测雄性激素水平,能够更好地反映干预因素对动物生理上的影响.     

丽珠肠乐与利巴韦林治疗小儿秋季腹泻120例报告

目的：观察微生态调节剂丽珠肠乐与利巴韦林联用对小儿秋季腹泻的治疗作用。方法：将符合临床诊断标准的２４０ 例病毒性肠炎,随机分为丽珠肠乐与利巴韦林治疗组（１２０ 例）及单用利巴韦林对照组（１２０ 例）,两组均不用抗生素、止泻收敛药,如有脱水,给予口服补液,并调整饮食。结果：治疗组和对照组总有效率分别为９６．６７ ％ 和８０．０％ 。显效率分别为８０．０ ％ 和５３．３３％ ,止泻时间分别为４１．３２ ±１８．９２ ｈ 和５１．５３±１９．０１ ｈ,治疗组疗效明显优于对照组,差异显著（ Ｐ＜０．０１） 。结论：丽珠肠乐与利巴韦林合用对小儿秋季腹泻具有协同治疗作用。