小鼠牙本质涎磷蛋白成熟蛋白编码区cDNA克隆与部分序列分析

目的 克隆小鼠牙本质涎磷蛋白（ｄｅｎｔｉｎ ｓｉａｌｏｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ,ＤＳＰＰ）成熟蛋白编码区基因。方法 用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰＰ成熟区的基因片段（约３ｋｂｐ）,将所５得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ     

以腺病毒为载体表达猪α(1,3)半乳糖基转移酶反义RNA抑制Galα(1,3)Gal抗原表位的表达

目的:尝试以反义RNA的方法抑制Galα(1,3)Gal抗原表位(gal抗原)的表达.方法:以人腺病毒载体表达猪α(1,3)半乳糖基转移酶基因的反义RNA.流式细胞术比较H血型抗原和gal抗原的表达水平.结果:构建了表达反义RNA的重组腺病毒载体Ad5anti-sGT600和Ad5anti-sGT1100.反义RNA的表达使NIH3T3细胞表面的gal抗原表位下降约30％.另外,反义RNA与人分泌型α(1,2)岩藻糖基转移酶的共同作用可使gal抗原表位的水平进一步下降.结论:重组腺病毒Ad5anti-sGT600和Ad5anti-sGT1100可有效降低gal抗原表位的表达.     

畲药柳叶蜡梅止泻作用的初步探讨

目的:研究畲药柳叶蜡梅止泻作用,为其临床引用提供实验基础.方法:利用小鼠腹泻止泻作用实脸共同研究畲药柳叶蜡梅止泻作用.结果:在小鼠腹泻止泻作用实验中柳叶蜡梅水提物组能减少稀便总数,降低稀便率、稀便级数以及腹泻指数(P＜ 0.01),对实验小鼠体重无影响.结论:实脸证实畲药柳叶蜡梅水提物具有止泻作用.     

青霉素酰化酶电极

用海藻酸钠-氯化钙包埋法制备青霉素酰化酶电极,电极涂液中海藻酸钠浓度为1％,酶量大于15U/100mg较好。经聚乙烯亚胺处理的电极的抗磷酸盐性能良好,测试在pH 7.05缓冲液中进行,加样搅拌平衡后,取停止搅拌5min后的pH读数,△pH-青霉素G浓度的线性范围为0～1.88mg/ml。温度和pH对pH响应值均有影响。     

hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导放射性碘摄取的实验研究

目的获取人钠/碘同向转运体(hNIS)基因cDNA,研究其转导黑色素瘤细胞在体外和体内能否介导放射性碘摄取,从而探索该策略用于黑色素瘤放射性碘治疗的可能性.方法运用逆转录聚合酶链反应从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA,将其克隆至真核载体pc-DNA3中,电转化法分别将重组质粒pc-DNA3-hNIS及空质粒pc-DNA3转导黑色素瘤细胞(B16),分别建立了细胞系B16-A和B16-B.在体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取及外流情况.继而将三种细胞系接种C57小鼠行131I显像和肿瘤摄取125I动态定量测定.结果成功克隆到hNIS基因,并建立了能稳定表达hNIS的新型细胞系B16-A.B16-A细胞的摄碘能力较B16细胞高17倍,较B16-B细胞高19倍.碘的外流过程迅速,T1/2eff仅10 min.体内实验发现B16-A细胞所形成肿瘤能摄取放射性碘,腹腔注射125I后1、2、4、12、24 h肿瘤组织的%ID/g平均为12.22.10.91、8.73、1.24、0.19,125I在肿瘤组织内的生物半衰期约为6 h.B16-A细胞系所成肿瘤摄碘量与对照组相比较,P＜0.01,差别具有高度统计意义.结论hNIS基因转导黑色素瘤细胞足以介导放射性碘摄取,但有效半衰期较短,难以产生足够的治疗剂量,有必要进一步研究如何增加放射性碘的摄取量及延长碘在细胞内的滞留时间以提高其放射生物学效应.     

卵巢癌C－erbB2表达与顺铂敏感性关系的研究

卵巢癌Ｃ－ｅｒｂＢ２表达与顺铂敏感性关系的研究金志军，张惜阴，丰有吉，曹斌融，赵凤娣，吴直江，费俭为证实Ｃ－ｅｒｂＢ２过度表达可引起对顺铂不敏感导致预后不良这一假说￣［１］。我们利用卵巢癌细胞株在体外进行了Ｃ－ｅｒｂＢ２表达与顺铂敏感性关系的研究。一...     

皮肤间充质干细胞的体外培养和分化

从小鼠的皮肤组织中原代分离间充质干细胞,采用无血清培养基培养,经过2次传代后改为有血清培养,多次传代的细胞进行免疫细胞化学鉴定和诱导分化实验。结果表明:小鼠皮肤组织中的间充质干细胞体外可以长期培养,多次传代的细胞仍具有干细胞的特征,形态均一,体外增殖迅速,保持了向成骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞分化的潜能。体外长期传代培养小鼠皮肤间充质干细胞仍保持良好的干细胞特性,这为皮肤间充质干细胞的深入研究与中枢神经系统细胞移植提供了新的细胞来源。     

人牙本质涎蛋白的抗体制备和组织表达研究

目的制备人牙本质涎蛋白抗体,观察其在不同组织的表达情况.方法用原核表达并经过初步纯化的人牙本质涎蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗血清并用Western blot法测定效价和检测牙胚和其它组织的蛋白表达.结果抗人牙本质涎蛋白抗血清效价可达1100000;Western blot显示牙本质涎蛋白在人牙胚中有表达,其分子量约为Mr 60×103左右.结论牙本质涎蛋白在人牙胚组织中有表达,提示其在牙齿发生、牙本质修复和再矿化中可能起重要作用.     

过量表达γ-氨基丁酸转运蛋白亚型Ⅰ导致转基因小鼠认知衰退(英文)

目的:研究γ-氨基丁酸转运蛋白亚型Ⅰ(GAT1)在认知中的生理功能。方法:原核显微注射法产生转基因小鼠。Southern-blot和PCR鉴定转基因的整合;半定量RT-PCR分析GAT1 mRNA水平;免疫荧光和免疫组化检测GAT1蛋白质表达。条件性回避行为分析联合型学习能力;新异物体识别行为分析记忆存储能力。电镜检查突触体形态。结果:获得4只含不同拷贝数转基因的建立者小鼠。GAT1在mRNA和蛋白质水平都呈过量表达。与野生型小鼠相比,转基因鼠联合型学习能力显著下降,视觉记忆显著减弱。另外,转基因鼠不对称突触数量减少约24％。结论:在小鼠中过量表达GAT1可导致认知衰退,表明γ-氨基丁酸转运蛋白表达的改变与某些类型认知缺陷的病理机制有关。