1脆弱类杆菌亚胺培南抗性基因的分子克隆

为从分子水平对类杆菌抗性基因和抗性转移进行深入研究，进而茁能有效阻断耐药基因传播的措施，并从分子水平上认识医院内感染耐药基因传播与表达的影响因素，作者对临床分离的脆弱类杆菌亚胺培南抗性株的染色体ＤＮＡ进行了分子克隆，获得了１．７ｋｂ的亚胺培南抗性基因片段，而且其重组质粒能在大肠杆蓖ＤＨ５中稳定传代和表达。以随机引物法，用地高与基标记亚胺培南抗性基因制备探针，对临床分离的４０株类杆菌进行亚胺培南抗性     

脆弱类杆菌亚胺培南抗性基因的分子克隆

为从分子水平对类杆菌抗性基因和抗性转移进行深入研究，进而寻找出能有效阻断耐药基因传播的措施，并从分子水平上认识医院内感染耐药基因传播与表达的影响因素，作者对临床分离的脆弱类杆菌亚胺培南抗性株的染色体ＤＮＡ进行了分子克隆，获得了１．７ｋｂ的亚胺培南抗性基因片段，而且其重组质粒能在大肠杆菌ＤＨ５中稳定传代和表达。以随机引物法，用地高辛配基标记亚胺培南抗性基因制备探针，对临床分离的４０株类杆菌进行亚胺培南抗性基因检测，结果显示２株亚胺培南抗性株出现杂交信号，３８株亚胺培南敏感株无杂交信号。提示亚胺培南抗性基因探针可用于类杆菌耐药性的分子流行病学调查。     

脆弱类杆菌与大肠杆菌的β-葡萄糖醛酸酶活性的测定比较

作者测定了二株脆弱类杆菌与大肠杆菌3360(O_(157)K_(88))株的β-G活性,并进行了比较。结果表明:脆弱类杆菌ATCC25285的β-G平均活性为94.7u,明显高干脆弱类杆菌CDC14462株及大肠杆菌3360株。作者选定脆弱类杆菌ATCC25285株为胆红素结石动物模型的模式菌株。     

急性根尖周炎患牙根管内厌氧菌的细菌学研究——第4报 分子杂交技术在感染根管内厌氧菌鉴定上的应用初探

本研究利用脆弱类杆菌、产黑素类杆菌和核梭杆菌经碱裂解法抽提全染色体 DNA,并以缺口移位法标记上~(32)P 以制备探针,对37株感染根管内厌氧菌进行了斑点杂交,根据X线片上显影结果判断杂交率以鉴定细菌。结果与常规鉴定基本吻合,显示出很高的特异性和敏感性,并具有快速简便的优点。交叉反应现象只表现出弱阳性杂交信号,可以与特异性杂交相区别,对此可通过改进杂交和冲洗条件或使用寡核苷酸探针而加以完善。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对九种抗菌药物的耐药性分析

目的 了解肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的检出率及耐药性。方法 采用琼脂稀释法对2001年4月～2002年2月四川大学华西医院从临床标本中分离的非重复大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行产ESBLs株的初筛，用NCCLS推荐的纸片扩散法作确证试验，并测定产ESBLs株对9种抗菌药物的MIC值。结果 大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌产ESBLs株的检出率分别为26．4％和18．2％。产ESBLs菌株多呈多重耐药，耐药性由高至低依次为环丙沙星(93．3％)、头孢噻肟(70％)、头孢哌酮／舒巴坦(66．7%)、氨曲南(63．3％)、阿米卡星(36．7％)、头孢西丁(20％)、头孢他定(16．7%)、头孢吡肟(10％)，亚胺培南100％敏感。结论 产ESBLs细菌多呈多重耐药。亚胺培南是治疗产ESBLs细菌感染的最可靠药物。     

革兰阴性杆菌产AmpC酶及超广谱β-内酰胺酶的研究

为探讨临床分离的对第三代头孢菌素耐药的革兰阴性杆菌AmpCβ－内酰胺酶（AmpC)和超广谱β－内酰胺酶（ESBLs)的分布情况，采用头孢西丁三维试验检测AmpC酶，纸片确证试验和头孢曲松三维试验检测ESBLs。结果显示，227株革兰阴性杆菌中产AmpC酶者97株（占42．6％），产ESBLs者38株（占16．7％）。提示AmpC酶和ESBLs是导致革兰阴性杆菌耐药的两类主要酶。AmpC酶和ESBLs的单克隆抗体有望为这类细菌感染的免疫生物治疗提供新方法。     

温肾方对替比夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效及肌酸激酶的影响

目的 研究温肾方对替比夫定(LdT)治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎肾阳虚证患者的抗病毒疗效及肌酸激酶(CK)的影响. 方法 将96例人组病例随机分到治疗组及对照组,各为48例.治疗组予温肾方联合LdT治疗;对照组予LdT单药治疗.疗程均为52周.观察两组患者的中医证候积分、生物化学应答、病毒学应答、HBeAg血清学应答、血清CK水平等.根据资料不同采用t检验、x2检验或Mann-Whitney检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 共有84例(治疗组43例)患者完成52周的研究.临床证候疗效方面治疗组总有效率优于对照组[88.37％ (38/43)对比63.41％(26/41),P＜0.01].治疗组在中医证候缓解、生物化学应答、病毒学应答、HBeAg血清学应答方面均优于对照组[(4.97±1.88)分对比(10.13±3.72)分、95.35％ (41/43)对比75.61％ (31/41)、81.40％ (35/43)对比56.10％ (23/41)、48.84％ (21/43)对比26.83％ (11/41),P＜0.05或P＜0.01).本研究中未发现原发无应答患者,共有7例出现病毒学突破,均发生在对照组,与治疗组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).不良反应:两组均有CK升高,其中治疗组19例,占44.19％;对照组30例,占73.17％;两组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 温肾方可提高LdT治疗肾阳虚型HBeAg阳性慢性乙型肝炎的抗病毒疗效,减少血清肌酸激酶的异常率.     

间接免疫荧光抗体法快速检测脓液中的厌氧菌

用脆弱、多形和不解糖类杆菌3种常见厌氧菌标准株的免疫血清,以间接免疫荧光抗体法(IFA)检测75份脓液中的厌氧菌,与厌氧培养结果比较,IFA3种菌的敏感性为72.7％,阳性符合率为88.9％,阴性符合率为81.4％.少数IFA阳性与培养鉴定结果不完全一致。3份IFA阳性培养阴性.IFA方法简便,2小时内可得结果,是一种快速、特异和敏感的厌氧菌检测方法.     

慢性乙型肝炎肝郁脾虚证和脾胃湿热证患者的差异表达基因研究初探

目的 探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)肝郁脾虚证与脾胃湿热证患者的差异表达基因。方法 采集正常健康者（26名）及肝郁脾虚证（35例）、脾胃湿热证（34例）患者空腹肘静脉血,按Trizol法提取总RNA。采用Aglient表达谱芯片进行基因芯片检测,利用随机方差模型筛选差异基因,通过GO、Pathway、Genbank、NCBI、Geneontology等数据库对差异基因进行分析。结果 两证型间获得差异基因125个（其中66个为上调基因,59个为下调基因）,主要表现的功能为跨膜运输、硒反应离子、钙离子依赖的胞吐作用等。参与的通路中较为重要的包括影响细胞黏附分子、钙离子信号通路、白细胞穿上皮迁移等。通过动态网络构建,寻找出共表达能力差异最显著的9个基因（即LOC340508、HIST2H2BE、MPL、FLJ22536、TUBA8、NT5M、EGFL7、PTPRF、TSPAN33）,其主要涉及免疫反应、细胞生长、DNA损伤、信号转导、炎症反应等生命过程。结论慢乙肝肝郁脾虚证和脾胃湿热证两个证型间存在差异表达基因,提示中医证候分类学具有基因表达谱依据,基因组学研究方法有望为中医辨证提供客观依据。