重组腺病毒Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系感染效率的比较研究

目的以Ad5-GFP及Ad5/F35-GFP为对照,评价Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系的感染效率。方法制备并纯化Ad5-GFP、Ad5/F11p-GFP及Ad5/F35-GFP三种重组腺病毒,以不同的感染复数(MOI)感染乳腺癌细胞系SKBR-3、MCF-7及肾癌细胞系786O。48 h后,荧光显微镜观察GFP的表达,流式细胞仪检测感染效率及不同细胞表面柯萨奇腺病毒受体(CAR)、CD46和桥粒芯糖蛋白质2的表达。结果 Ad5/F35-GFP对SKBR-3、MCF-7及786O均具有很高的感染效率,且其在较低的MOI时就具有较高的感染效率;Ad5/F11p-GFP对CD46高表达的MCF-7及786O具有较高的感染效率,5 MOI感染即可达到60%以上的感染效率;而Ad5-GFP仅对CAR高表达的细胞系786O具有较高的感染效率,且感染效率随着MOI的增加而升高。Ad5/F11p-GFP和Ad5/F35-GFP对三种肿瘤细胞系的感染效率明显高于Ad5-GFP。结论对5型腺病毒进行纤维顶球的改造,可增强对肿瘤细胞的感染效率。     

肝细胞生长因子基因治疗促进大鼠放创复合伤愈合

目的 应用携带肝细胞生长因子（HGF）基因的质粒（pHGF）对大鼠放创复合伤进行基因治疗,探究其促愈作用。方法 120只SPF级雌性Wistar大鼠按体重随机分为单伤组、伤照组、伤照+阳性药（重组人表皮生长因子外用溶液,金因肽）治疗组（JYT组）和伤照+pHGF治疗组（HGF组）,每组30只。大鼠经致伤和照射后建立放创复合伤模型,建模后即刻HGF组在创面一次性给予pHGF质粒,JYT组给予金因肽治疗,伤照组给予等体积的PBS。伤照后3、7、14、21、28和35 d描记伤口面积、检测外周血象和伤口组织羟脯氨酸含量,并进行病理检测和伤口肉芽组织毛细血管计数,研究pHGF对大鼠放创复合伤的促愈作用。结果 伤照后3、28及35 d,大鼠体重及外周血白细胞计数显著降低。伤照后11 d内,HGF组伤口相对面积小于或显著小于伤照组（P<0.05）。伤照后7、14 d,HGF组羟脯氨酸含量明显高于JYT组（P<0.05）。毛细血管密度结果显示,伤照后3、7 d,HGF组肉芽组织毛细血管密度明显大于伤照组和JYT组（P<0.05）;伤照后14 d,HGF组毛细血管密度小于伤照组（P&...     

纤维细胞和Th1/Th2型细胞因子在放射性肺损伤中的作用及相关机制

目的 观察小鼠经60Co γ射线胸部照射后肺组织中纤维细胞和Th1/Th2型细胞因子变化规律,探究其在放射性肺损伤中的作用及相关机制.方法 小鼠经60Coγ射线单次胸部照射25 Gy,建立肺损伤模型,用HE染色和Masson三联染色观察肺组织病理变化,酶标仪测定Ⅰ型胶原浓度,流式细胞仪测定小鼠肺实质中纤维细胞数目,液相悬浮芯片检测肺泡灌洗液中纤维化相关细胞因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎症/性蛋白-1α(MIP-1α)和Th1/Th2型细胞因子表达.结果 照后14 d至3个月,小鼠体重明显下降(F=7.19、40.62、58.70,P＜0.05).1个月时小鼠肺组织胶原纤维增生,第3个月时更加明显.照后1～3个月,Ⅰ型胶原浓度明显增加(Z=-2.470、-2.236,P＜0.05).照射后14 d至3个月,纤维细胞数目增多(Z=-2.19、-2.64、-2.64,P＜0.05),肺灌洗液中MCP-1(Z=-2.35、-2.37、-2.34,P＜0.05)及MIP-1α(Z=-2.43、-2.35、-2.35,P＜0.05)表达增高.Th1型细胞因子IFN-γ在照后1个月短暂升高(Z=-2.34,P＜0.05),IL-12在照后3d及7d下降(Z=-2.31、-2.30,P＜0.05),1个月及3个月升高(Z=-2.32、-2.12,P＜0.05);Th2型细胞因子IL-4在照后7、14 d及1个月表达升高(Z=-2.31、-2.35、-2.32,P＜0.05),IL-10在照后3d及1、3个月升高(Z=-2.33、-2.37、-2.34,P＜0.05).结论 纤维细胞是诱发放射性肺损伤的重要效应细胞,MCP-1及MIP-1α能明显诱导纤维细胞聚集,Th1/Th2可能参与调节这一过程.     

6Gyγ射线照射对小鼠Th17细胞含量和血清IL-17A含量的影响

目的：观察6 Gyγ射线照射对Th17细胞含量及其细胞因子的影响,探讨辐射免疫损伤机制.方法：60只C57BL/6雄性小鼠随机分为照射组和对照组,每组30只.照射组小鼠接受6 Gy γ射线一次性全身照射,对照组未进行照射.于照射后1、3、7、14和28 d取小鼠脾脏制备细胞匀浆,采用流式细胞术检测脾脏Th17细胞比例的改变;应用ELISA方法检测照射后6 h及1、3、7、14、28 d血清IL-17a含量变化.结果：6 Gy γ射线照射后1 d,小鼠脾脏Th17细胞比例即出现显著增加,至照后28 d仍显著高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,但照射后各时间点血清中IL-17a水平与对照组比较差异均无显著性（P〉0.05）.结论：6 Gy γ射线全身照射引起小鼠Th17细胞比例明显升高,表明Th17细胞在辐射所致免疫功能损伤和炎症反应中具有重要作用.     

Spred2基因对人肝癌细胞凋亡韵影响

目的观察Spred2对人肝癌细胞（HepG2）凋亡的影响。方法用阳离子脂质体瞬时转染pcDNA3．0,pcDNA3．0-Spred2到HepG2细胞,建立过表达Spred2的细胞模型。膜联蛋白（annexlFl）V．FITC／PI（7．AAD）双标通过流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹检测SprcdZ的表达水平。结果特柒Spred2基因能明显诱导HepG2细胞凋亡。另外,转染Spred2基因能显著地增强5一FU诱导HepG2细胞凋亡。结论Spred2对人肝癌细胞凋亡有调控作用。     

重组质粒pUDK-PmL-IR-GM的体内免疫激活作用

目的构建携带融合蛋白基因PSA-IZ-mCD40L（PmL）和GM-CSF基因的重组质粒载体pUDK-PmL-IR-GM,并评价其小鼠体内免疫激活作用。方法采用类似基因合成的方法将前列腺特异性抗原基因、异亮氨酸拉链基因和鼠源性CD40配体基因连接并扩增获得融合蛋白基因PmL。将GM-CSF、PmL和核糖体内部进入位点基因依次克隆到pUDK载体,获得重组质粒pUDK-PmL-IR-GM。分别于第1、11、21和35天免疫小鼠,末次免疫后10d分离小鼠脾脏T淋巴细胞。采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群;MTT法检测前列腺特异性抗原刺激下的T淋巴细胞增殖效应;非放射性细胞杀伤检测试剂盒检测对LNCaP细胞的特异性杀伤作用。结果 PCR成功扩增GM-CSF基因和融合蛋白基因PmL,并将其克隆至pUDK载体上,以核糖体内部进入位点连接,得到重组质粒pUDK-PmL-IR-GM。pUDK-PmL-IR-GM免疫小鼠后,T淋巴细胞性能检测显示：CD4＋T淋巴细胞与CD8＋T淋巴细胞的比值较对照组明显升高（P〈0.05）;前列腺特异性抗原刺激后,其增殖能力明显增强（与阴性对照相比,P〈0.01）,且明显高于其他免疫组（P〈0.01）;其对LNCaP细胞杀伤效率大于25%,且明显强于pUDK免疫组（P〈0.05）。结论成功构建重组质粒载体pUDK-PmL-IR-GM,并证实其能在一定程度激活小鼠T淋巴细胞的特异性免疫反应。