肿瘤免疫与肿瘤免疫治疗中一些新的思考

随着免疫学、分子生物学与基因工程技术发展 ,以肿瘤免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为继手术治疗、化疗和放疗后肿瘤治疗的第四种模式[1] 。本文欲对肿瘤免疫及肿瘤免疫治疗 ,特别是其中一些新的思路和进展作一简要探讨和评述。1　肿瘤免疫从免疫学的角度看 ,肿瘤细胞就是一种能不断表达“正常”抗原 (基因过度表达 )和 /或“异常”抗原 (基因修饰、突变或缺失 )的宿主体内自身组织细胞。因此肿瘤可以被视为一种特殊的自体抗原。在正常情况下 ,机体对自体抗原不产生免疫应答 ,即呈现出免疫耐受。因此 ,肿瘤抗原与肿瘤免疫耐受就构成了肿…     

刀豆素蛋白A诱导小鼠肝纤维化模型的建立

目的　建立小鼠的肝纤维化模型。方法　 2 0只Balb c小鼠随机分 2组。实验组 (E组 )小鼠经尾静脉注射12 .5mg kg剂量的 1mol L刀豆素蛋白A(ConA) ,每周 1次 ,连续 6周 ;而对照组 (N组 )正常小鼠则相应地经尾静脉注射 2 5 0 μLPBS。每次注射ConA或PBS 2 4h后 ,经小鼠尾静脉取血检测ALT和AST。第 6次注射ConA一周后处死小鼠 ,取肝组织做HE染色及MassonTrichrome染色 ,显微镜下观察肝脏组织形态改变及胶原沉积情况。结果　与对照组比较 ,实验组小鼠的ALT和AST均明显升高 ,肝体积明显增大 ,表面不光滑 ,布满增生小结节。光镜下见肝组织结构紊乱 ,肝细胞坏死明显 ,有较多的淋巴细胞浸润。MassonTrichrome染色胶原明显增多。结论　反复静脉注射ConA可成功诱导建立小鼠肝纤维化模型。     

鼻咽癌HSP90β的表达及临床意义

目的:探讨鼻咽癌组织中HSP90β表达及其与组织分级、预后之间的关系。方法:应用免疫组化SP法检测50例鼻咽癌组织中HSP90β的表达情况,并分析其表达与鼻咽癌临床与预后之间的关系。结果:鼻咽癌中HSP90β阳性率高于鼻咽部正常组织,而且鼻咽癌分化程度越低,HSP90β的表达越强;HSP90β阴性表达者5年生存率明显高于阳性者。结论:说明HSP90β过度表达可能与鼻咽癌的发生、发展以及预后有关。     

CEA,17-1A相关的结直肠癌免疫治疗

近十年 ,无论在发展中国家或是发达国家 ,结直肠癌 (ＣＲＣ)的发病率都呈上升趋势。虽然近 5 0年来在其治疗方面也取得了—些进展 ,但是不够乐观 ,直到现在 ,仍有约 5 0 %的患者会复发、转移或死亡。ＣＥＡ、17- 1Ａ是众所周知的结直肠癌特异性肿瘤抗原 ,也是众多结直肠癌治疗方案的基础 ,本文拟对ＣＥＡ ,17- 1Ａ相关的结直肠癌的免疫治疗策略及其研究进展进行简短回顾。1　ＣＥＡ ,1 7- 1Ａ与结直肠癌ＣＥＡ发现于 196 5年 ,在内胚层来源的肿瘤、肠上皮的胚胎发育和炎症中均有较高表达 ,目前在美国每年有约 5 0万人被诊断出患有与ＣＥＡ相…     

异种血管内皮细胞生长因子重组蛋白质疫苗联合阿霉素治疗淋巴瘤的研究

目的探讨重组非洲爪蟾血管内皮细胞生长因子(Xenopuslaevisvascularendothelialgrowthfactor,xVEGF)肿瘤疫苗免疫治疗,联合阿霉素抗小鼠淋巴瘤的作用。方法采用C57BL/6小鼠建立EL4淋巴瘤模型。实验小鼠随机分成4组xVEGF联合阿霉素组(简称联合用药组)、阿霉素组、xVEGF组、生理盐水对照组。观察肿瘤生长、小鼠生存率和毒副反应,并检测分泌抗自身VEGF抗体的B细胞、肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)和肿瘤细胞凋亡等。结果联合用药组肿瘤明显小于其他3组(P<0.05),其中有3只小鼠肿瘤完全消退;接种肿瘤后48d,联合用药组小鼠生存率为100%,明显高于生理盐水对照组(0%)(P<0.01)。ELISPOT检测发现,异种蛋白质疫苗免疫的小鼠(联合或单用)产生了分泌抗自身VEGF抗体的B细胞,其数量与阿霉素组或生理盐水对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。联合用药组肿瘤MVD明显低于其他3组(P<0.05),肿瘤细胞凋亡指数明显高于其他3组(P<0.05)。结论采用异种同源蛋白质疫苗xVEGF免疫治疗,与阿霉素化疗联合有协同增强的抗小鼠淋巴瘤的作用。     

胰腺癌肿瘤疫苗的研究进展

胰腺癌是一种病死率极高的恶性肿瘤,其起病隐匿、发展迅速,常规的手术治疗、放化疗等方法疗效有限,因此迫切需要新的治疗手段来改善治疗效果。早期临床试验已证明免疫系统的功能与胰腺癌的临床反应密切相关,胰腺癌的免疫治疗理论也日趋于成熟。肿瘤疫苗作为肿瘤免疫治疗的重要方式,具有较好的耐受性、低毒性和高度靶向性等特点,因而有着良好的发展前景。肿瘤疫苗将会成为胰腺癌治疗的有效方法之一。     

腺病毒介导的DPC4基因转染对胰腺癌细胞的影响

目的　探讨以腺病毒 (Ad5 )为载体转染 DPC4基因在胰腺癌基因治疗中的作用。方法　应用构建的DPC4 - Ad5进行体内体外转染 ,分别观察 DPC4 - Ad5对胰腺癌细胞 (HS76 6 T,Pc- 3)及裸鼠皮下种植胰腺癌的影响。用流式细胞仪检测目的基因表达 ,并检测细胞周期。结果　 DPC4 - Ad5对胰腺癌细胞的生长抑制率在第 4天可达30 %。Pc- 3- DPC4 - Ad5 (PD)组细胞生长最慢 ,HS76 6 T(H)和 HS76 6 T- Ad5 (HA)组生长最快 ,与 Pc- 3(P)、Pc- 3- Ad5(PA)、HS76 6 T(H)、HS76 6 T- DPC4 - Ad5 (HD)组相比均有显著性差异 (P<0 .0 5 )。PD组和 HD组细胞增殖受抑 ,与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。转染后 ,细胞周期出现阻滞 ,G1 期细胞明显增加 ,Pc- 3由 5 8% (P组 )增至80 % (PD组 ) ,S期细胞则由 2 6 %降至 11.7% ;HS76 6 TG1 期细胞则由 5 8% (H组 )左右增至 6 8% (HD组 ) ,S期细胞则由 31%减少至 2 1% ;两组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。但凋亡未见明显增加。目的基因表达检测也表明 ,转染DPC4 - Ad5后 ,细胞的荧光强度明显高于未转染者。两种细胞株的裸鼠种植瘤经 DPC4 - Ad5治疗后 ,HS76 6 T空载体 (对照 ,HA)组体积为 (136 3.90± 4 87.6 5 ) mm3,HS76 6 T治疗 (HD)组为 (4 2 5 .90± 32 4 .6 8) mm3,Pc- 3     

人釉原蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的构建含人釉原蛋白(hAm)成熟肽基因的重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达重组人釉原蛋白,鉴定经纯化获得的融合蛋白。方法利用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ将hAm基因插入原核表达载体PGEX4T1,对重组表达质粒PGEX4T1-hAm进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒转化E.coli.RosettaTM,用终浓度0.3 mmol/L的IPTG诱导表达带有亲和标记谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的重组hAm。经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-hAm,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定原核表达的重组hAm。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误。在大肠杆菌RosettaTM中经IPTG诱导表达并纯化得到的融合蛋白GST-hAm,经SDS-PAGE鉴定分子量约为46000,主要以包涵体形式存在,与预测一致;Western blotting证实该融合蛋白能被特异性抗hAm多克隆抗体识别。结论成功构建含有hAm成熟肽基因的重组原核表达质粒,表达的融合蛋白GST-hAm可通过纯化获得,经鉴定为hAm。大量纯化的hAm成熟肽的获得为开展其功能研究奠定了基础。     

人釉原蛋白基因重组慢病毒载体的构建及在293T细胞中的表达

目的:构建含人釉原蛋白(human Amelogenin,hAm)成熟肽编码区基因的慢病毒载体FuAmw,并观察在重组慢病毒感染的293T细胞中釉原蛋白的表达.方法:以构建好的重组质粒PQE30-Am为模板,采用PCR技术体外扩增hAm成熟肽编码区.将扩增产物与慢病毒载体转移质粒FUGW分别用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后连接,构建重组慢病毒载体,转移质粒FUAmW,并进行酶切及测序鉴定.通过聚乙烯亚胺(polytheylenimine,PEI)法将三质粒共转染293T细胞,包装得到重组慢病毒FUGW和FUAmW,然后分别离体感染293T细胞,培养 72h后,经荧光显微镜下观察和流式细胞计数检测感染效率,采用RT-RCR及Western印迹法检测釉原蛋白基因的表达.结果:重组质粒经测序证实.插入片段与人釉原蛋白成熟肽基因序列完全一致.流式细胞仪测得重组病毒感染293T细胞绿色荧光蛋白(green fluoresence protein,GFP)的阳性率为67.38%.RT-RCR和Western印迹均证实,重组慢病毒FUAmW感染的293T细胞能够表达人釉原蛋白.结论:成功构建携带人釉原蛋白成熟肽基因的重组慢病毒载体质粒,以293T细胞包装得到的重组人釉原蛋白病毒能感染真核细胞并获得表达.     

异亮氨酸拉链修饰的可溶性CD40L在巴斯德毕赤酵母中的表达

为了获得异亮氨酸拉链修饰的可溶性CD40L（IZ—sCD40L）在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达。首先用PCR和重叠PCR的方法得到了IZ—sCD40L基因片段。然后构建了巴斯德毕赤酵母表达质粒pPICZaA—IZ—sCD40L．核酸测序分析表明IZ—sCD40L的基因片段正确克隆到pPICZaA质粒中。将其线性化后。电转化到巴斯德毕赤酵母GS115中，PCR筛选阳性重组菌株，经表型鉴定后，用甲醇进行诱导表达。经SDS—PAGE和Western blot印迹杂交结果证实了表达产物为重组IZ—sCD40L的融合蛋白。