shRNA干扰技术沉默VEGF表达治疗血管内皮瘤的实验研究

目的构建血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA真核表达质粒（shVEGF）,观察其对血管内皮瘤细胞系（EOMA）细胞体外增殖及动物实验的影响。方法构建真核表达质粒pGenesil-3-shVEGF并转染EOMA细胞,采用CCK-8法检测shVEGF对EOMA细胞增殖能力的影响。建立EOMA细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和shVEGF组,肿瘤出现后,隔日测量瘤体体积,并观察体积变化。结果转染48h后EOMA细胞增殖受到抑制。体内实验显示经shVEGF治疗后,裸鼠皮下移植瘤体生长缓慢,体积明显缩小。结论RNA干扰技术实现VEGF基因沉默,能明显抑制EOMA细胞增殖及体内肿瘤生长,提示shVEGF在血管内皮瘤、血管瘤等血管瘤样病变的生物治疗中可能有较好的应用前景。     

乏氧诱导因子-1α在口腔鳞状细胞癌颈淋巴转移中的作用

目的：探讨乏氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）蛋白表达在口腔鳞状细胞癌颈淋巴转移中的作用及其在判断预后方面的意义。方法：1993年6月至2010年5月在北京大学口腔医院住院并接受手术治疗的原发口腔鳞状细胞癌患者125例纳入本次研究,收集所有患者的临床病理学资料,制作组织病理切片,应用免疫组织化学方法检测HIF-1α蛋白的表达情况,根据表达情况分为高表达组和低表达组,主要评估指标为颈淋巴转移率和癌相关生存率（disease-specific survival,DSS）。颈淋巴转移率与各项临床病理学参数的关系比较采用秩和检验,组间及组内癌相关生存率的差异性比较采用Kaplan-Meier分析,并应用COX多因素生存分析对DSS的独立预测因子进行统计分析。所有统计学分析均采用SPSS 17.0软件包完成。结果：随访截止日期为2013年6月1日,生存患者的中位随访时间为73个月,有75例HIF-1α高表达,48例HIF 1α低表达,2例无法评估。秩和检验分析发现,HIF-1α高表达组淋巴转移率显著高于HIF-1α低表达组（58.7% vs. 37.5%,P=0.027）。Kaplan-Meier生存分析发现,HIF-1α低表达组患者无病生存率显著高于高表达组（60.4% vs. 36.0%,P=0.009）, 癌相关生存率显著高于高表达组（70.8% vs. 46.7%,P=0.005）。多因素生存分析表明,HIF-1α表达（HR=2.164,95%CI：1.150~4.074,P=0.017）和T分期（HR=1.387,95%CI：1.066~1.804,P=0.015）均是判断口腔鳞状细胞癌患者预后的独立预测因子。结论：HIF-1α蛋白表达是预测口腔鳞状细胞癌预后的独立因子,且与颈淋巴转移显著相关,能够作为口腔鳞状细胞癌潜在的分子诊断标志物和靶向治疗靶点。     

低细胞密度状态下的人骨髓间质干细胞成骨能力研究

目的　研究低密度人骨髓间质干细胞(Humanbonemarrow -derivedmesenchymalstemcells,hMSCs)体内成骨能力及影响因素。方法　从人髂骨骨髓分离培养hMSCs。以不同细胞密度与块状和颗粒型磷酸钙陶瓷(HA/TCP)载体混合,移植于裸小鼠体内,分别观察2和3个月,组织学评价研究hMSCs异体体内成骨的最小细胞密度。按3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体的比例混合细胞与载体(HA/TCP和鼠尾胶原包被的HA/TCP) ,体外共培养一周后移植裸鼠皮下,3个月后,组织学评价细胞载体体系体外培养和胶原包被载体对hMSCs体内成骨能力的影响。结果　只有以3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体在体内移植3个月后可观察到在块状和颗粒HA/TCP表面有骨组织生成。用鼠尾胶原包被的颗粒HA/TCP和细胞与载体体外共培养并无明显促进骨组织生成作用。结论　保证hMSCs异体成骨的最小细胞密度为3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体。在低密度hMSCs状态下,鼠尾胶原和细胞与载体体外共培养并不能提高hMSCs的成骨能力。     

富血小板血浆促进人牙髓细胞的体内矿化潜能

目的：检测富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)作为人牙髓细胞(dental pulp cells, DPCs)组织工程学支架的生物相容性,并探讨PRP促进DPCs矿化的作用。方法：应用经典的两步离心法制取PRP;分离培养DPCs,并经细胞角蛋白、波形蛋白染色鉴定细胞来源。实验分为4组,将PRP和第4代DPCs复合激活后,植入8只5周龄雌性裸鼠背部皮下作为实验组,将单独植入DPCs或PRP做为对照组,将单纯手术组做为空白对照。分别于植入术后4周、8周处死动物,将生成物制成组织学切片进行HE染色和免疫组织化学染色。结果：植入4周、8周后,DPCs复合PRP组在裸鼠皮下均可见白色生成物,单独植入DPCs或PRP组未见生成物。DPCs复合PRP组HE染色可见矿化组织形成,免疫组织化学染色显示骨桥蛋白（OPN）、骨钙素（OC）和Ⅰ型胶原（COL Ⅰ）阳性表达。结论：富血小板血浆与人牙髓细胞有良好生物相容性,并对人牙髓细胞有诱导矿化作用,提示富血小板血浆可以作为盖髓治疗的支架应用。     

口腔溃疡散Ⅱ号双层膜的研制及药效学研究

目的：研制一种单向缓释口腔溃疡散Ⅱ号双层膜，延长口腔溃疡散作用时间。方法：用聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠作成膜材料，将口腔溃疡散Ⅱ号制成双层膜，观察其口腔粘附时间和对实验性口腔溃疡的治疗作用。结果：口腔溃疡散Ⅱ号双层膜的口腔粘附时间长，对实验性口腔溃疡有较好的治疗作用。结论：口腔溃疡散Ⅱ号双层膜克服了口腔溃疡散Ⅱ号作用时间短的不足，有较好的临床应用前景。     

绿色荧光蛋白在口腔科学中的应用前景

本世纪九十年代发现的绿色荧光蛋白(GreenFluoresent Protein,GFP)是一种新型的分子生物研究工具。与以往的生物标记相比,GFP有其独特的优点:①能在长波紫外激发下发出绿色荧光而无需     

联合应用非特异激活的免疫细胞和化疗药物顺铂治疗血管内皮瘤

目的：探讨联合应用非特异激活的免疫细胞和顺铂治疗血管内皮瘤的可行性。方法：用MTT法和活细胞计数法分别检测顺铂、非特异激活的脾细胞(non-specific activated splenocytes, aSplenocytes)及二者联合应用对小鼠血管内皮瘤细胞EOMA体外增殖能力的影响。在6周龄雄性BALB/c nu/nu裸鼠背部皮下建立EOMA血管内皮瘤模型,分为对照组、aSplenocytes组、顺铂组及联合用药组,每组5只。联合用药组用 1.5×10⁶ 个aSplenocytes细胞(100 μL)进行瘤体内注射,24 h后行顺铂腹腔注射,每周1次,按8 mg/kg体重给药,观测并记录EOMA肿瘤生长情况。结果：体外实验结果显示,EOMA细胞用100 μmol/L顺铂处理24 h后,细胞存活率为47.7%±5.9%。EOMA细胞与aSplenocytes（1×10⁵个/mL）直接接触共培养或借助于Transwell间接接触共培养48 h后,细胞存活率分别为42.8%±2.6%和45.3%±2.2%,两组之间差异无统计学意义。当联合应用aSplenocytes和顺铂时,直接接触和间接接触共培养组的EOMA细胞存活率分别为25.0%±2.7%和27.5%±3.8%,两组之间差异无统计学意义。联合用药组与单药组相比,差异均具有明显的统计学意义(P<0.05)。体内实验结果显示,EOMA肿瘤在药物处理18 d后,对照组、aSplenocytes组、顺铂组及联合用药组的肿瘤体积分别为(680.3±68.0)、(825.2±71.8)、(535.3±74.5)和(351.5±79.5) mm3。联合用药组与对照组、aSplenocytes组和顺铂组之间的差异均具有统计学意义(P<0.05),提示联合应用aSplenocytes和顺铂能明显的抑制EOMA肿瘤生长。结论：aSplenocytes具有增强EOMA细胞对顺铂敏感性的作用。