海藻酸钠/壳聚糖复合凝胶的制备与细胞毒性评价

背景：海藻酸钠和壳聚糖分别是聚阳离子和聚阴离子的天然高分子材料,二者可以互为交联剂形成复合凝胶,避免使用普通交联剂产生的细胞毒性。 目的：制备海藻酸钠壳聚糖复合凝胶并评价其体外细胞毒性。 方法：以0.25 mol/L乙酸溶解壳聚糖,制成质量浓度30 g/L溶液,再以0.1 mol/L的NaOH中和酸性得到壳聚糖絮状沉淀,将壳聚糖絮状沉淀与质量浓度3%海藻酸钠等比例混合,高频振动混匀,使二者形成复合凝胶。使用傅里叶变换红外光谱、扫描电镜分析观察凝胶成分和交联纤维网络结构。分别以海藻酸钠壳聚糖复合凝胶24,72 h浸提液、聚乙烯24,72 h浸提液及苯酚溶液培养L-929细胞,体外检测其细胞毒性。 结果与结论：傅里叶变换红外光谱检测到海藻酸钠壳聚糖复合凝胶特征性峰值改变,扫描电镜显示其内部形成丰富间隙的空间网络结构。浸提液法检测海藻酸钠壳聚糖复合凝胶的细胞毒性为合格,表明海藻酸钠/壳聚糖复合凝胶具有成为组织工程支架材料的良好条件。     

自研全光纤光学相干计算机断层摄影术灵敏检测早期牙釉质龋

目的探索新型生物组织高分辨率成像技术——光学相干计算机断层摄影术（OCT）用于龋病早期诊断。方法选用化学酸蚀法在离体人恒牙釉质光滑面制备0、12、24、48、72、96、120h不同时间的早期脱矿人工龋模型,采用自行研发的口腔全光纤OCT（AF-OCT）进行离体人恒牙早期牙釉质人工龋的体外检测．并与同一牙齿样本的显微数码摄影、扫描电子显微镜和偏振光显微镜的检测结果进行比较．检验AF—OCT体外检测早期龋变的效能。结果AF—OCT可早期准确检测到脱矿12h以内的牙釉质表面组织学水平的改变．开窗区釉质表面脱矿深度与脱矿时间成正比。与3种常用体内外检测手段相比．AF—OCT可早于显微数码摄影观察到牙釉质表面的形貌改变．与扫描电子显微镜和偏振光显微镜检测结果高度相关。结论自研AF—OCT可早期、精确、无创地检测出脱矿12h以内的早期牙釉质表面人工龋变,并可实现量化测定和分析．获得的龋变深度量化测量数据与偏振光显微镜下组织学测量结果高度相关。     

缩宫素鼻喷雾剂产后催乳作用300例临床观察

目的:探讨缩宫素鼻喷雾剂对产妇产后促排乳的作用。方法:将500例晚期妊娠正常分娩的初产妇随机分为对照组200例、正常试验组200例和非正常试验组100例,试验组使用缩宫素鼻啧雾剂,对照组使用安慰剂,根据中医妇科产后缺乳病症诊断为疗效标准。结果:正常试验组产妇泌乳始动时间比对照组显著提前,泌乳充足率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);非正常试验组治疗后可达到对照组水平。试验组与对照组中均未出现子宫复旧不全的情况。结论:缩宫素鼻喷雾剂能够促进产后早泌乳,泌乳量增多,并可以改善产妇不利的哺乳条件,产后2个月的纯母乳喂养率提高。此法方便、安全、无不良反应,可在临床推广使用。     

新型生物组织成像技术-光学CT对牙釉质早期脱矿检出效能的实验评价***

在7颗新鲜拔除的离体人恒牙釉质光滑面制备2 mm×3 mm实验窗,选用pH 4.5的化学酸蚀液在开窗区制备0,12,24,48,72,96,120 h不同时间的早期脱矿人工龋模型,采用自行研发的口腔光学CT系统进行人恒牙早期牙釉质人工龋的体外检出实验研究,设立同一牙齿样本的临床显微摄影和扫描电镜观测对照,以扫描电镜超微组织学检出结果为金标准,评价光学CT体外检出牙釉质早期脱矿的效能。口腔光学CT系统可同时无创获得牙齿表面和截面的脱矿信息,准确检测到脱矿12 h以内微米量级的早期牙釉质表面组织学水平的改变,早于裸眼观察和临床显微摄影。光学CT对于不同酸蚀期实验窗早期脱矿的检出与扫描电镜表征完全一致。口腔光学CT可以牙齿表面快速扫描的方式,非接触、准确、量化地检出牙釉质早期人工脱矿,检出敏感度高,重复性好,可无创获得脱矿部位微米量级量化分析数据。     

CEA单链抗体基因在大肠杆菌中的克隆及表达

目的尝试将ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中进行高效表达。方法以ＣＥＡ单链抗体基因为模板，设计４对引物，ＰＣＲ扩增，将４条ＤＮＡ扩增片段分别插入原核表达载体ｐＢＶ２２０中；重组质粒转染大肠杆菌ＴＧ１，４２℃热诱导外源蛋白的表达；包涵体经８ｍｏｌ／Ｌ脲溶解及谷胱甘肽系统复性；过离子交换柱进行纯化；ＥＬＩＳＡ夹心法测活性。结果得到了ＳＤ序列与起始密码ＡＴＧ分别相隔着５，６，７，８个核苷酸的重组质粒；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示转染入重组质粒的ＴＧ１菌经热诱导后有分子量约为３×１０４的外源蛋白，表达量最高达９３０ｍｇ／Ｌ培养液，约占菌体总蛋白的５０％；ＥＬＩＳＡ活性测定结果表明复性后的ＳｃＦｖ有较高的抗原结合活性。结论ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中获得了较高水平的表达，且经复性后有较高的抗原结合活性。     

牙周膜干细胞培养及鉴定方法的研究进展

牙周组织工程是以开发促进牙槽骨、牙周膜和牙骨质再生的治疗手段为目的,利用牙周组织发生的原理来形成或再生功能性牙周组织,牙周组织再生的关键是种子细胞,自2004年国外学者首次发现牙周组织发育完成后存在于牙周膜中的未分化间充质细胞具有自我更新和多向分化等成体干细胞的特点,能形成牙骨质-牙周膜样复合体,将其命名为牙周膜干细胞后,近年来国内外学者对于牙周膜干细胞的研究逐渐增多,并且取得了一定的成果,本文着重对牙周膜干细胞的基本概念;原代培养方法：组织块贴壁法、酶消化法和酶解组织块法及干细胞纯化的方法;牙周膜干细胞的鉴定方法：包括形态学观察、细胞免疫细胞化学鉴定、细胞增殖能力的检测、多向分化潜能检测及细胞表型分析等进行了介绍。     

OCT检测人离体牙根部早期脱矿的实验研究

目的 利用全光纤OCT系统对人离体牙根部早期人工脱矿模型进行扫描,探讨OCT检出早期根龋的可行性.方法 选取正畸拔除的无龋坏、色素沉着、缺损的人离体恒牙3颗,应用脱矿液进行处理,在脱矿时间为0、6、24、72h分别采用OCT进行检测得到二维图像,观察图像特点并计算图像的平均灰度值.将脱矿72h的样本应用偏光显微镜进行检测,将偏光显微镜图像与OCT图像进行比较.结果 在OCT二维图像中脱矿6h的样本未见明显的信号增强带,而脱矿24h和72h样本表现为脱矿区信号增强.脱矿区域平均灰度值随脱矿时间的延长而增大,最早发生OCT可见脱矿的时间为脱矿后24h.对于脱矿72h样本,OCT图像的形态学观察结果与偏光显微镜下组织学观察结果相一致.结论 OCT能够检出脱矿24h的离体人牙根表面的改变,从而证实OCT具有检出早期牙根表面脱矿的能力.揭示OCT在早期根龋的量化诊断中具有良好的应用前景.     

教师应注重发挥在教学过程中学生的主体作用

确定学生在教学过程中的主体作用是现代教学理论的显著特征,作为教育工作者,教学过程的开展,主要是完成培养学生,帮助他们获得知识、发展能力,并且建立完善的人格的教学任务.教师要想良好的完成这一教学任务,首先就要充分了解学生,创造其在教学过程中主体作用得以充分发挥的条件,体现他们的主体地位.     

中国实验用小型猪成骨细胞的培养与鉴定

目的:分离、诱导培养中国实验用小型猪成骨细胞作为骨组织工程种子细胞,并进行形态学与生物学性能鉴定,为骨组织工程研究提供新型种子细胞。方法:实验于2002-08/2004-08在天津市口腔医院暨天津市整形外科医院中心实验室组织工程实验室完成。采用胶原酶消化法和诱导条件培养法自新生中国实验用小型猪四肢骨松质分离成骨细胞,经细胞生活形态观察、细胞倍增时间测定、透射电镜超微结构分析、裂解上清碱性磷酸酶检测、矿化结节形成测定等方法进行成骨细胞的生物学性能鉴定,以获取中国实验用小型猪成骨细胞作为骨组织工程种子细胞的必备的增殖活性与成骨活性数据。结果:①原代培养中国实验用小型猪成骨样细胞具有很强的贴壁率,细胞分裂旺盛,2～3d即可达到完全融合。细胞形态呈多角形和星形、胞体大、胞核圆,核仁丰富,通常为两三个核仁;胞浆中核周见散在黑色颗粒。②条件培养液诱导后的猪成骨样细胞培养6d左右可见细胞呈旋涡状复层生长,胞突伸展互相连接并集结成细胞簇团,中心区形成褐色结节;细胞核周围胞浆中出现大量黑色颗粒。③细胞增殖曲线显示猪成骨样细胞在播种3d后进入对数生长期,15d左右达到生长峰值U经细胞倍增时间公式计算猪成骨样细胞倍增时间为67.2h。④透射电镜观察显示:中国实验用小型猪成骨样细胞表面突起极丰富;核大,有较多和较深的内陷U核仁大而多窗孔,胞质内细胞器常常分布于核的一侧,扩张的粗面内质网池内有中等电子密度的蛋白质沉淀,其膜表面的核糖体密集分布。Golgi氏复合体发达,并见胞质内微丝及多量的游离核糖体。核仁特征为高转录活动的核仁。细胞外形、核谱型、核位置以及胞质内细胞器的特征性分布符合成骨细胞的超微结构特征。⑤猪成骨样细胞的碱性磷酸酶活性在β-磷酸甘油和地塞米松刺激后3d开始上升,18d达到高峰,21d时开始下降。⑥VonKossa染色显示从培养6d开始,小型猪成骨样细胞培养细胞层出现散在的小矿化结节,以后数量渐多,体积渐大,21d达高峰,体外成骨活性显著。结论:中国实验用小型猪骨松质成骨细胞具备骨组织工程种子细胞必备的增殖活性与成骨活性,适合作为骨组织工程的种子细胞。