原位末端标记方法的改进及其在检测骨髓造血细胞凋亡中 …

细胞凋亡是细胞死亡的一种形式,又称程序性细胞死亡。在实际研究工作中,特别是检测骨髓和含血细胞较多的组织过程中,由于内源性过氧化物酶含量较多,使用ＤＡＢ底物显色将会产物不可避免的背景着色,影响检测效果。因此,为了不影响检测结果（防止假阳性）,探索性地将亲和素－辣根过氧化物酶改为碱性酸酶标记的抗生蛋白链菌素（ＡＰ－ＳＡ）;显色剂由ＤＡＢ改为坚固红。阳性结果为玫瑰红色,核复染后呈蓝色,反差明显,背景清晰     

LSAB免疫组化方法的改进及在血液和骨髓病理学中的应用

ＬＳＡＢ免疫组化方法即标记的抗生收白链菌素生物素方法。它是将抗生蛋自链菌素应用于免疫组化染色技术建立起的一种新的免疫组化染色方法,具有快速和高敏感的特点。目前被认为是最理想的免疫组化染色方法。文献报道的方法是用ＨＲＰ标记ＳＡ,显色剂为ＤＡＢ。但在实际科研工作中,由于血液及骨髓内的血细胞本身含较多的内源性过氧化物酶,仅凭Ｈ２Ｏ２阻断是完全不够的,即不能应用ＤＡＢ显色。     

重楼中甾体皂苷的分离与结构鉴定

目的分离、鉴定云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch)Hand Mazz根茎中的甾体皂苷类化合物.方法采用乙醇提取、水饱和正丁醇萃取、硅胶柱色谱及高效液相色谱等方法进行分离,得到5个化合物,通过FAB-MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、13C-1H COSY、HMBC、NOESY和TOCSY鉴定其化学结构.结果分离鉴定了5种甾体皂苷:薯蓣皂苷元-3-O-{α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)-α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)-[α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)]}-β-D-葡萄吡喃糖苷(皂苷Pb,Ⅰ)、纤细薯蓣皂苷(Ⅱ)、皂苷Pa(Ⅲ)、薯蓣次苷A(Ⅳ)、pennogenin diglycoside(Ⅴ).结论化合物Ⅰ～Ⅴ均为已知甾体皂苷,纠正了已有文献中皂苷Pb(Ⅰ)核磁数据中的错误,提供了完整的NMR数据.     

新月弯孢霉对黄酮苷的选择性水解

利用新月弯孢霉（Curvularialunata3．4381）对12个黄酮苷类化合物进行了生物转化研究,并利用UPLC／PDA—Q—TOF—MS。对转化产物进行分析鉴定。结果显示,新月弯孢霉对一些黄酮苷类化合物的末端鼠李糖基或葡萄糖基表现出了水解活性。新月弯孢霉可以水解异鼠李素-3-O-新橙皮苷和香蒲新苷中1→2连接的末端鼠李糖基,但不能水解芦丁、香蒲新苷和槲皮素．3-D-芹菜糖基芦丁糖苷中1→6连接的末端鼠李糖基。新月弯孢霉还可以水解淫羊藿苷、FloramanosideB和柚皮苷中的葡萄糖基。首次报道了新月弯孢霉水解黄酮苷类化合物糖基的研究,并发现了一种将柚皮苷转化为柚皮素的新途径。     

知母皂苷AⅢ抗血栓作用研究

目的:确定知母皂苷AⅢ体内、外给药对大鼠血小板聚集和血栓形成的抑制作用。方法:比浊法测定血小板聚集,动-静脉旁路血栓模型测定大鼠在体血栓的形成。结果与结论:体外血小板聚集模型研究证明,知母皂苷AⅢ可以抑制由ADP、胶原和凝血酶诱导的大鼠血小板的聚集,并呈剂量效应。体内给药同样可以有效抑制血小板的聚集率,当给药剂量达到40 mg/kg.d-1时对血小板聚集的抑制率可以达到26.7%。动-静脉旁路血栓形成实验结果显示,知母皂苷AⅢ体内给药可减小血栓的湿重和干重,说明知母皂苷AⅢ体内给药具有抗血栓的作用。知母皂苷AⅢ体内给药不影响出凝血时间。推测其抗血栓形成的功效可能是通过抑制血小板的黏附、聚集和活化而实现的。     

知母皂苷化合物对脑缺血再灌注大鼠的保护作用

目的研究知母皂苷化合物对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及其机制.方法采用播线法制备脑缺血再灌注模型,观察大鼠的神经症状、脑梗塞范围、血细胞计数;测定超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)、总一氧化氮合酶(T-NOS)、诱导型一氧化氮合酶(i-NOS)活性以及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量.结果知母皂苷化合物20、40mg/kg组能明显减轻脑缺血再灌注大鼠的神经症状、减小脑梗塞范围,降低全血中的白细胞计数及中性粒细胞计数,能明显降低脑组织中的MPO活性、提高SOD活性、减少MDA含量、减少NO含量、降低T-NOS、i-NOS活性.结论知母皂苷化合物通过减轻自由基损伤、炎症反应以及NO的毒性作用,从而对脑缺血再灌注大鼠具有一定的保护作用.     

γ线引起小鼠骨髓造血细胞凋亡的定量病理研究

迄今，骨髓辐射损伤后造血细胞凋亡的病理研究很少，其定量变化规律更未见报道。本文采用６０Ｃｏγ射线照射ＬＡＣＡ小鼠，于照射后６小时、１天及３天分批活杀，将右股骨骨髓经３％戊二醛及１％锇酸固定，制作半薄切片、超薄切片，并用ＣａｍｂｒｉｄｇｅＱｕａｎｔｉｍｅｔ９７０型图像分析仪，定量研究了辐射诱导的骨髓造血细胞凋亡的形态特征及其与照射剂量之间的关系。结果表明：对照组动物骨髓仅有少数造血细胞凋亡，而照射后６小时各剂量组动物骨髓内发生凋亡的造血细胞均明显增多，病理特点为：凋亡早期见核染色质浓缩、边移，呈半月形、环形或不规则形；中期见大小不等，形状不一的染色质团块周围有核膜包绕，核碎片形成；晚期见凋亡小体形成，可游离于细胞间或被邻近细胞吞噬。定量分析示各照射组动物凋亡的骨髓造血细胞的数密度和面密度均明显增加，与对照组比，其差异显著（Ｐ＜００１）。且剂量越大，凋亡细胞的数密度和面密度越大。最后，本文作者根据实验结果指出：凋亡是辐射介导的骨髓造血细胞死亡的主要死亡方式。本研究为急性放射病的诊治提供直接依据，亦可能对其他原因引起的细胞凋亡的研究具有参考意义。     

辐射损伤骨髓造血细胞的DNA含量及AgNOR定量分析

LACA小鼠经60 Coγ射线全身一次照射 ,对骨髓组织切片和骨髓细胞悬液涂片 ,分别采用改良的Feulgen染色及核仁组成区相关蛋白 (AgNOR)染色 ,利用图像分析技术对在不同照射剂量、不同时间点的造血细胞核内DNA及AgNOR含量进行了定量分析。结果显示各照射组在2 5 - 7 0Gy剂量、 6h～ 4周范围内 ,骨髓均出现明显损伤及损伤后重建现象 ,且剂量越大 ,损伤越重 ,恢复亦较慢 ;其中以 5 5Gy组骨髓细胞核内DNA和AgNOR含量变化最为典型 ,在损伤早期进行性减少 ,而在恢复期出现持续性增加 ,直至恢复正常。结果提示 :骨髓造血细胞核内AgNOR及DNA含量的变化可以作为反映骨髓辐射损伤与修复程度的定量指标。     

TGFβ1反义基因及表达荧光素酶的重组腺病毒对放射性肺纤维化体内基因治疗初探

目的　探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性。方法　通过支气管插管与滴注的方式进行。结果　检测分析表明 ,转基因后 1 5d ,肺组织DNA用neo基因特异引物PCR扩增阳性 ;第 5 5天 ,PCR扩增 6 7% (2 3)阳性。RNAdotblot分析表明 ,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1mRNA含量降低。转染 35d后取动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明 ,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照组高 (P <0 0 1) ,但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低 (均为P <0 .0 1)。用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠 ,其肺脏均检测到了有荧光素酶活性蛋白的表达。结论　由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法 ,它可以减缓肺纤维化的发生 ;用复制缺陷的重组腺病毒进行肺脏的基因治疗是一种较为理想的方法 ,有望成为治疗肺纤维化的有效的新途径。     

间接原位PCR检测实验性弓形虫感染病理标本

探讨间接法原位 PCR在弓形虫感染病原学检测中的应用。以 RH株弓形虫速殖子感染小鼠后第 2、4、6天处死 ,取肝脏制备石蜡标本及冰冻切片标本 ,以间接法原位 PCR扩增并检测石蜡标本中的弓形虫 DN A,与原位杂交方法检测冰冻切片标本的结果比较。以间接原位 PCR方法检测 18例标本均得到阳性信号 ,病原体检出率为 10 0 % ,优于原位杂交法 ( 9/18)。间接法原位 PCR为弓形虫病的病理检测提供了一种可行的新方法