冬将尽，春可期，山河无恙，人间皆安——山东大学第二医院援湖北医疗队员战地手记

未着白衣时,他们是家中的支柱,是父母眼中的孩子。换上白衣后,他们成为国家召唤,使命必达的先锋战士!他们以仁心仁术,救死扶伤,扶危渡厄,与湖北人民共克时艰。这是来自山东大学第二医院援湖北医疗队队员的手记,他们利用难得的休息时间,从各自的视角出发,为我们记录了驰援湖北背后的故事。     

禽流感病毒血凝素H5特异性单克隆抗体的制备及ELISA捕获法的建立

目的 制备和鉴定禽流感病毒(H5N1)血凝素(H5)特异性单克隆抗体(mAb),建立H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法.方法 以H5血凝素和携带H5全长基因的质粒免疫Balb/c小鼠制备mAb,利用血凝抑制(HI)实验筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验筛选捕获抗体和检测抗体,建立测定H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法.结果 获得16株特异性针对H5的单克隆抗体,与A型流感病毒H1、H3、H7、H9和B型流感病毒的血凝素无HI交叉反应,对H5血凝素的血凝抑制效价为1:100～1:51 200;通过配对实验,建立以单克隆抗体H5M9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记单克隆抗体H5M11为检测抗体的双抗体夹心ELISA;检测多株H5N1病毒和H5血凝素的最低检出值为1/32血凝单位,检测A型流感病毒H1N1、H3N2、B型流感病毒以及H7、H9血凝素均为阴性.结论 建立了一种灵敏度高、特异性强的测定H5抗原的ELISA捕获法,可应用于禽流感病毒H5N1感染的实验室早期诊断.     

SARS-CoV、HCoV-229E和OC43核衣壳蛋白的克隆表达及抗原相关性分析

目的克隆表达SARS冠状病毒(SARS-CoV)和人冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43)核衣壳(N)蛋白,并对其重组蛋白的抗原相关性进行探讨。方法RT-PCR扩增SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的N基因全长序列,克隆到原核表达载体pQE30,IPTG诱导表达重组蛋白,用Westernblot和免疫荧光鉴定。结果获得SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43His-N融合蛋白的相对分子质量(Mr)分别约为47×103、44×103、50×103,与相应预测值相符,Westernblot和免疫荧光证实,3种融合蛋白仅与相应的免疫血清特异性结合,3种蛋白的抗原性相互间无交叉反应。结论获得具有免疫原性的SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的核衣壳融合蛋白,其3种N蛋白抗原性在免疫动物血清中不存在交叉反应。     

酶联免疫吸附试验间接抗体夹心检测SARS-CoV抗原方法的建立和应用

目的制备和鉴定严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(rnAb)和多克隆抗体建立SARS—CoVN抗原捕获抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法用于SARS-CoV感染的早期诊断。方法用基因重组SARS-CoV N蛋白免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔制备mAb和多克隆抗体，采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定，用单克隆抗体与兔多克隆抗体进行配对试验，建立抗原捕获抗体夹心ELISA法测定SARS-CoV N抗原。结果获得9株特异性针对SARS-CoV N蛋白的mAb和高效价的兔多克隆抗体，通过高亲和力的mAb与兔多抗的配对试验，筛选出3株单抗N1E8、N8E1和N10E4混合作为捕获抗体，与兔多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG组合作为测定抗体，建立了抗体夹心ELISA法，测定重组SARS-CoV N蛋白最高灵敏度为50pg／ml，特异性达99．86％，测定420份血清学确诊的SARS患者血清，其中发病1—10天阳性检出率为90.1％，11—20天检出率为23％，21天以上均为阴性，与其他呼吸道病毒和冠状病毒无交叉反应。结论获得特异性好、亲和力高的单克隆抗体和高效价的兔多克隆抗体，经过抗体的配对和优化，建立了一种灵敏度高、特异性强的SARS-CoV抗原的ELISA捕捉法．可应用于SARS早期诊断、溯源及流行病学研究。     

腭裂患者纯音电测听力分析

腭裂是最常见的先天性畸形，同时并发它处畸形，导致功能障碍。我们对３２例腭裂患者术前进行纯音电测听检查，听力异常者８例（２４５％），可见听力损害与腭裂畸形存在一定关系，但损害程度与腭裂类型无关。     

非结构蛋白1抗原捕获酶联免疫吸附法评价登革病毒抗体中和活性

目的 在获得具有中和活性的针对Ⅰ型登革病毒(dengue virus serotype Ⅰ,DENV-1)的抗体基础上,评价已建立的非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NSI)抗原捕获酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析抗体中和活性的可行性,为中和抗体的筛选和疫苗效果的评价提供一个更为快速、简便的检测方法.方法 使用重组DENV-1包膜蛋白Ⅲ区(envelopeprotein domainⅢ,EDⅢ)免疫5只BALB/c小鼠制备单克隆抗体(简称单抗),采用间接ELISA、间接免疫荧光法(immunofluorescenee assay,IFA)和免疫印迹法(Western Blot)对单抗进行筛选及鉴定;同时用该重组蛋白免疫1只新西兰兔,制备多克隆抗体血清;以传统噬斑减少中和试验(plaquereduction neutralization test,PRNT)作为参比方法,采用NSI抗原捕获ELISA对所获抗体进行中和活性检测.结果 获得4株针对DENV-1 EDⅢ单抗和1份兔多抗血清,且被PRNT试验证明均具有中和活性,四株单抗腹水(1A1、1B3、3D3、9D6)和兔多抗血清中和效价分别为1:1024、1:512、1:256、1:4096和1:4096.使用NS1抗原捕获ELISA法检测不到PRNT中和效价最低的3D3抗体对DENV-1有中和能力,而检测其余3株单抗(1A1、1B3、9D6)和多抗兔血清中和效价均远低于PRNT测定结果,分别为1:32、1:32、1:128和1:128.结论 简单、快速的NS1抗原捕获ELISA可用于评价DENV抗体的中和活性,该方法适合于高效价中和抗体的筛选,有望成为评价疫苗效果的方法之一.     

西尼罗河病毒NS1的克隆、表达及抗原性分析

目的克隆和表达西尼罗河病毒（WNV）非结构蛋白1（NS1）,并分析其与登革病毒NS1的抗原交叉反应性。方法合成WNV NS1全基因序列,将NS1全基因克隆到pGEX-5X-3原核表达载体中表达GST—NS1融合蛋白,用4型登革病毒免疫血清及登革病毒NS1单克隆抗体并应用Western Blot方法分析WNV—NS1重组蛋白的抗原性。结果重组质粒pGEX-5X-3-WNV—NS1经IPTG诱导,高效表达GST-NS1融合蛋白,经变性纯化和复性获得可溶性WNV-NS1重组蛋白,经WesternBlot证实WNV—NS1重组蛋白可与各型登革病毒免疫小鼠血清及部分4型登革病毒NS1交叉单抗识别。结论成功获得可溶性WNV—NS1重组蛋白,该蛋白与登革病毒NS1具有抗原交叉反应性,其结果为建立西尼罗河病毒的血清学诊断和鉴别诊断奠定了基础。     

人冠状病毒SARS-CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体的制备及3株人冠状病毒N蛋白的抗原相关性观察

目的 通过制备和鉴定人冠状病毒SARS．CoV、229E和OC43核衣壳（N）蛋白单克隆抗体〈mAb）,观察3株人冠状病毒的N蛋白抗原相关性。方法 分别用基因重组SARS．CoV、229E和OC43N蛋白免疫BALB／c小鼠,制备mAb,并采用ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光进行筛选和鉴定．同时用mAb分析3株人冠状病毒N蛋白之间的免疫交叉反应。结果 获得多株抗SARS．CoV、229E和OC43N蛋白mAb杂交瘤细胞株。ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光结果均显示,所有的mAb仅与各自病毒的N蛋白特异性反应。而在3株人冠状病毒N蛋白抗原之间不产生免疫交叉反应。结论 获得的特异性抗人冠状病毒N蛋白mAb为进一步研究3株人冠状病毒的抗原决定簇相关性奠定了基础。     

中西医结合治疗复发性口疮106例疗效分析

目的：总结中西医结合方法治疗复发性口疮106例经验.方法：根据溃疡大小、深浅、数目。分为轻型口疮、腺周型、疱疹样口疮，用局部封闭、止痛、促进渍疡愈合。同时，结合中医分气虚型、血淤型、血热型配制口疮愈合汤进行治疗。结果：显效84例占79．3％，好转16例占14．9％，无效6例占5．8％：结论：局部西医治疗为主，结合中医辩证冶疗复发性口疮，在一定程度上缩短了病程，减少了患者痛苦，预防或延长复发间隔时间，取得了较为满意临床效果.     

双抗原夹心ELISA法检测登革病毒感染患者血清中的EDⅢ抗体

目的 建立一种检测登革病毒(dengue virus, DENV)特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法?方法 利用毕赤酵母系统表达4个血清型登革病毒包膜蛋白Ⅲ区(envelope protein domain Ⅲ, EDⅢ),并采用改良过碘酸钠法对EDⅢ蛋白标记辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP),建立一种可同时检测4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白特异性抗体的双抗原夹心ELISA法?并对2014年广州珠江医院门诊和住院确诊的登革热患者血清标本进行检测,并与澳洲Panbio MAC ELISA检测的敏感性进行比较?结果 本研究成功建立了一种检测4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,该方法能同时检测到4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白免疫的小鼠血清和Ⅰ型登革病毒EDⅢ蛋白免疫的兔血清,而与烟曲霉AF-MP蛋白免疫的小鼠血清和兔血清均无交叉反应?对184份健康人血清标本检测全为阴性,而对168份确诊为登革病毒感染患者血清标本检测结果表明,两种诊断方法检测结果差异无统计学意义,P<0.001(57.1% vs 57.7%),联合NS1抗原检测方法,其敏感性提高到97.6%?结论 双抗原夹心ELISA法检测登革病毒EDⅢ特异性抗体具有高度的特异性,但如果能同时联合抗原检测可明显提高登革热的早期诊断率?