p16基因甲基化特异检测方法的建立及其初步应用

目的：建立p16基因中CpG岛的甲基化分析方法，即甲基化特异的PCR（methylation-specific polymerase chain reaction,MSP）方法及其初步应用。方法：用亚硫酸氢钠修饰变性后的被测DNA，随之进行甲基化，非甲基化特异的PCR扩增。应用MSP法分析白血病患者的白细胞p16基因5'CpG岛的甲基化变异情况。结果：用加热法变性DNA，亚硫酸氢盐修饰DNA,Wizard DNA纯化树脂除盐，纯化修饰后的DNA都获得了成功，并建立了MSP分析p16基因甲基化的方法。白血病患者的白细胞p16基因的5'CpG岛有一定比2例的甲基化变异。结论：MSP是一种较为简便，敏感，且具有高度特异性的检测任何基因的CpG区域甲基化位点的分析方法。     

遗传性视神经萎缩伴肌张力障碍一个家系报告

目的报道一个五代母系遗传的未知神经变性疾病家系。方法家系调查、临床资料收集、线粒体DNA分子遗传学检测。结果本家系5代,共43人,17人患病,男性9人,女性8人,发病年龄5～40岁,呈母系遗传。所有患者均有视神经萎缩,部分患者伴严重肌张力障碍和双侧基底节异常MR信号。分子遗传学检测未发现与Leber遗传性视神经病(LHON)有关的已知突变,亦未发现与神经性肌无力-共济失调-色素性视网膜炎(NARP)有关的8893位点突变。结论本家系临床表现独特,且未见与此表型类似的已知线粒体疾病突变位点存在,可能是一种与已知突变不同的LHON或新型线粒体疾病。     

骨桥蛋白和CD44v6在肝癌中的表达及意义

骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是一种分泌型钙结合磷酸化糖蛋白，其中含有特异的与细胞黏附有关的RGD(Arg-Gly-Asp)序列，通过与其受体整合素、CD44等结合来促进细胞的趋化、黏附和迁移，从而介导肿瘤细胞的侵袭转移，在肿瘤的复发与转移中起到重要作用。OPN过表达与肝癌的复发和转移有关，并认为是早期预测肿瘤复发的一个指标。现对OPN和CD44v6在肝癌中的表达进行研究，以了解其临床意义。     

全反式维甲酸对人胃腺癌细胞株SGC-7901凋亡的影响

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对胃腺癌细胞系SGC-7901凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子机制.方法 ATRA处理SGC-7901细胞,Hoechst染色检测ATRA对SGC-7901细胞凋亡的影响,Western blot法检测ATRA对凋亡相关蛋白表达情况的影响.结果 ATRA可诱导SGC-7901细胞的凋亡,且下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,对促凋亡蛋白Bax的表达和酶原形式的Caspase-3的表达没有影响.结论 ATRA促进SGC-7901细胞的凋亡,其分子机制可能是下调Bcl-2的表达,使Bcl-2/Bax的值降低进而促进细胞凋亡.     

成人急性白血病不同病程中血清蛋白质水平的变化

观察了60例急性白血病和46例健康成人血清中蛋白总量、清蛋白、α_1、α_2、β、γ球蛋白、IgA、IgG及IgM水平(g·L~(-1))。未治疗组(UT)、治疗未缓解组(UR)和部分缓解组(PR)的α_2球蛋白含量分别为4.41±1.55、4.21±1.84和3.93±1.29,明显高于健康成人(3.25±0.77),而完全缓解组则较低(2.24±1.01),提示α_2球蛋白水平变化与治疗效果有关。免疫球蛋白中IgM和IgA水平无什变化,UT、UR和PR组IgG分别为20.72±10.86、20.19±6.23和22.92±9.45,明显高于健康组(14.79±6.58),而CR组(13.11±5.61)与健康组接近,提示急性白血病有体液免疫增强现象。     

Caveolin-1在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨Caveolin-1蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化法和免疫印迹法检测65例食管鳞癌患者的癌组织及对应癌旁正常食管黏膜中Cave-olin-1的表达情况。结果食管鳞癌组织中Caveolin-1蛋白的表达水平高于对应癌旁正常食管黏膜,差异有统计学意义(P<0.05),食管鳞癌组织中Caveolin-1蛋白的表达水平与其分化程度相关(P<0.05),与淋巴结转移、TNM分期等无关。结论 Caveolin-1蛋白在食管鳞癌中的高表达可能与其发生发展有关。     

Claudin-18蛋白在肺腺癌所致恶性胸腔积液中的表达及临床意义

目的 探讨Claudin-18蛋白在肺腺癌所致恶性胸腔积液中的表达及其临床意义.方法 选取50例肺腺癌所致恶性胸腔积液和37例肺部良性疾病所致胸腔积液标本,使用免疫组化和Western blot法检测Claudin-18蛋白表达,并与胸液细胞学结果比较,分析Claudin-18蛋白表达与临床特征、疗效间关系.结果 Claudin-18蛋白诊断肺腺癌所致恶性胸腔积液的敏感性38％,特异性100％,总准确率64.4％.与胸液细胞学(敏感性54％)比较,差异无统计学意义,两者联合检测敏感性增至68％.Claudin-18在非吸烟肺腺癌患者中阳性率为50.0％,而在吸烟肺腺癌患者中阳性率仅为12.5％,两者比较差异有统计学意义(P =0.011),Claudin-18在恶性胸腔积液中表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移及疗效无关.结论 Claudin-18可能参与肺癌发生、发展过程,尤其非吸烟肺癌患者;胸腔积液Claudin-18与细胞学联合检测可提高恶性胸腔积液诊断的阳性率,并具有一定的鉴别诊断价值.     

肝细胞肿瘤患者癌组织中HBx基因的检测

目的通过检测肝细胞肿瘤（ＨＣＣ）患者癌组织中ＨＢｘ基因探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）在 ＨＣＣ中的重要性。方法根据ＨＢｘ基因ＤＮＡ序列设计引物,采用特异性聚合酶链式反应（ＰＣＲ） 对３１例病理确诊并经手术切除后的ＨＣＣ患者癌组织进行了检测,同时采用ＰＣＲ方法检测了同一 患者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果ＰＣＲ显示３１例ＨＣＣ患者癌组织中ＨＢｘ基因和血清中ＨＢＶ ＤＮＡ 的阳性率分别为７７．４％（２４／３１）和３２．３％（１０／３１）。结论ＨＢｘ基因片段广泛存在于ＨＣＣ患者癌 组织中并且在癌细胞中可能存在整合。     

双组分偶联剂的水解与缩合反应及其对瓷和树脂粘结强度影响的分析

目的:分析牙科双组分陶瓷偶联剂混合后的反应机制及其对瓷和树脂粘结强度的影响。方法:采用傅立叶变换红外光谱原位动态快速扫描技术对牙科双组分陶瓷偶联剂混合液进行了为期180min的观察,结合剪切粘结强度测试,分析偶联剂双组分混合后不同时间对瓷和树脂粘结强度的影响。结果:双组分偶联剂混合后,γ-l甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷(γ-MPS)分子迅速发生水解形成硅醇,同时部分水解产物发生缩合;混合52min时,硅醇单体浓度达到最高,之后缓慢下降;混合后77min时,γ-MPS分子基本水解完全。但混合后180min内,偶联剂放置不同时间对瓷和树脂的粘结强度没有显著影响(P>0.05)。结论:双组分陶瓷偶联剂混合后发生了一系列水解和缩合反应,但在混合180min内均可供临床使用。     

人骨桥蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建人骨桥蛋白(hOPN)表达载体,体外表达及表达产物的纯化.方法培养人脐静脉内皮细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pGEX-6P-1,转化到XL1-blue中进行诱导表达.表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,切下目的蛋白进行洗脱纯化.结果构建的表达载体经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA测序,证明所构建的质粒是pGEX-6P-OPN.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白(表达量为16.7%),这种蛋白不存在于诱导后的pGEX-6P-1表达产物中,纯化后蛋白纯度为99%.结论成功构建了hOPN表达载体,并进行体外表达.