真核表达质粒pVAX1的应用

从20世纪90年代DNA疫苗诞生以来,其在医学领域已取得长足的进步和发展,它的出现为预防感染性疾病的发生提供了一种新思维、新方法。但是,目前在DNA疫苗中所应用的载体质粒仅局限于实验室研究和动物实验,如何使DNA疫苗应用于人体实验,最终走向临床研究,是摆在当今广大科研人员面前的关键难题。pVAX1的出现为解决这一难题提供了可能,它是由美国食品和药品管理委员会（FDA）推荐的唯一可以应用于人体实验的载体质粒。     

浓缩生长因子促人脐静脉血管内皮细胞成血管化作用研究

目的 研究浓缩生长因子（CGF）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）的增殖、迁移和分化的作用。方法 取健康志愿者静脉血制成CGF,再用CGF制备浓缩生长因子提取液（CGFe）。体外培养细胞分为2%CGFe组、5%CGFe组、10%CGFe组和对照组。CCK-8和细胞周期实验检测各组细胞增殖活性;划痕实验检测内皮细胞迁移;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞血管内皮生长因子（VEGF）、趋化因子受体4（CXCR4）、血小板衍生因子（PDGF）mRNA表达量。结果 CCK-8法和细胞周期结果显示CGFe明显促进细胞增殖（P<0.05）,且增殖效应呈CGFe浓度依赖性,各组间均有统计学差异（P<0.05）;划痕实验中12 h时实验组划痕愈合效率明显高于对照组,且愈合效率与CGFe浓度呈正比（P<0.05）;CGFe明显促进VEGF、CXCR4、PDGF的mRNA表达量,促进效应与浓度呈正比（P<0.05）。结论 CGFe能有效促进HUVECs的增殖、迁移和成血管分化。     

变形链球菌recA基因启动子荧光蛋白表达载体的构建

目的 构建由recA基因启动子启动的红色荧光蛋白穿梭表达载体,研究变形链球菌recA基因表达的特点,以期为不同致龋环境中变形链球菌致龋毒力因子基因的表达提供参照.方法 以变形链球菌(UA159)基因组DNA为模板,扩增recA基因启动子,采用双酶切反应连接入载体pDsRed2-N1,构建原核表达载体pRred;通过酶切重组人穿梭载体pDL276,构建红色荧光蛋白表达载体pLRred.结果 经酶切鉴定目的质粒片段插入无误,同时重组载体pLRred转化菌荧光观测结果提示,重组载体pLRred构建成功.结论 本项研究中构建的recA基因启动子红色荧光蛋白同源重组克隆载体正确,可应用于recA基因表达的研究,同时可为研究变形链球菌致龋基因的表达提供内参照.     

变形链球菌重组质粒pcDNA3-pacA/pcDNA3-pacP免疫定菌鼠的龋齿记分研究

目的　观察已构建的基因重组质粒 pc DNA3- pac A和 pc DNA3- pac P作为防龋疫苗的防龋效果。方法　分别将基因重组质粒 pc DNA3- pac A、pc DNA 3- pac P和 pc DNA3- pac A+pc DNA3- pac P联合使用作为基因疫苗注入免疫定菌鼠颌下腺区皮下 ,以 Keyes龋齿计分法评估免疫后定菌鼠磨牙的患龋情况。结果　重组质粒单独免疫组和联合免疫组大鼠的龋齿计分均明显低于阴性对照组和空白对照组 (P<0 .0 5 ) ;联合免疫组和 pc DNA3-pac A组的龋齿记分均明显低于 pc DNA3- pac P组 (P<0 .0 5 )。结论　重组基因质粒 pc DNA3- pac A和 pc DNA3- pac P均可有效的控制龋损的发生 ,降低龋坏程度 ,有望成为防龋基因疫苗。     

变形链球菌变链素粗提物活性的初步研究

目的 :测定变链菌临床株变链素粗提物的抑菌活性和热稳定性 ,为对变链素的进一步研究提供基础。方法 :用氯仿抽提 ,对其进行抗菌活性检测和热稳定性检测。结果 :10ml液体的粗提物 ,可形成直径 19mm的抑菌环 ,表明粗提物具有抗菌活性 ;将粗提物加热到 80℃ ,抗菌活性可维持 12 0min ,表明其中含有热稳定性抗菌物质。结论 :变链素的粗提物能反映变链素的活性和性质 ,适合于大量临床株的研究。     

“环锯”在颈椎前路椎间盘切除植骨术中的应用与配合

脊柱外科发展迅速，颈椎前路椎间盘切除的方法由早年的骨刀、Cloward环钻、手动环锯发展到现在的“ZDS”旋转推进式颈椎间盘切除器（以下简称环锯）。环锯利用机械原理，依靠定位丝锥的稳定作用进行手术操作，准确度高，椎体上下椎板切除相等、适度，避免引起脊髓损伤，减压充分，操作简便安全，易于掌握，缩短了手术时间，在颈椎前路椎间盘切除植骨术中起着重要的作用，代表了脊柱外科的新进展：现将环锯行颈椎前路椎间盘切除植骨术的优点、使用方法、手术配合及注意事项介绍如下．     

错畸形不同矫治器患者菌斑微生物多样性及群落分析

目的 比较无托槽隐形矫治和传统托槽固定矫治患者菌斑的菌群结构及其差异.方法 招募使用固定矫治器和隐形矫治器的正畸患者各10名,分别采集颊舌侧菌斑,利用Illumina测序平台,基于16S rDNA序列,对40个菌斑样本进行微生物多样性和群落结构分析.结果 固定矫治颊侧菌斑(FB组)的物种多样性、丰富度及均匀度均高于隐形...     

变形链球菌表面蛋白可变区(extended-V)的遗传多态性分析

目的:从分子水平探讨变形链球菌(血清c、f型)表面蛋白可变区(extended-V,V )的遗传状况,分析其基因中存在的变异,为进一步研究其结构和功能提供遗传信息。方法:选择临床最常见的血清型c、f型菌株117株(包括7株参考株),提取DNA,行PCR扩增,获得SrV 区片段基因;利用限制性内切酶DdeI进行限制性片段长度多态性分析(RFLP),并与部分国际参考株进行比较归类。从所占比例较多的基因型中,各选一代表株的PCR产物分别测序,将测序结果用Clone3.1version软件比较各型酶切位点。结果:117株菌株共分出5种基因型(A、B、C、D、E型);血清f型OMZ175为其中的一种;A型48株,B型45株,C型20株,D、E型则分别只有1株和3株,显示出明显差异;以参考株基因型为准,分别将A、B、C型定为p1样、spaP样或sr样、pac样;D型只有1株临床株,不排除实验过程中突发变异的可能;E型的3株也为临床株,尚无参考株与其相对应。结论:变形链球菌(血清c、f型)表面蛋白可变区呈多态性分布,有5种基因型,分布较为集中者分别为p1样、spaP或sr样、pac样,且血清f型属于血清c型的spaP样。     

全反式维甲酸对巨噬细胞中白介素-1β表达的调控及机制研究

  目的  探究全反式维甲酸（all-trans retinoic acid, ATRA）对巨噬细胞中白介素（interleukin, IL）-1β表达的调控及作用机制。  方法  巨噬细胞经1 μmol/L ATRA处理24 h后转录组测序,筛选差异表达基因,进行KEGG通路分析、GO功能分析和PPI网络分析。不同剂量ATRA处理巨噬细胞24 h后,qRT-PCR和Western blot验证炎症因子IL-1β的表达水平。Western blot和免疫荧光染色检测核因子（neuclear factor, NF）-κB信号和半胱天冬酶-1（caspase-1）的变化。  结果  测序结果显示,与空白对照组相比,巨噬细胞经ATRA处理后71个差异表达基因上调,KEGG分析显示上调基因参与IL-17信号通路、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF）信号通路等,GO分析显示上调基因参与IL-1β的产生、对脂多糖的反应等生物学过程,PPI分析揭示炎症因子,黏附分子和趋化因子为ATRA作用的核心基因。体外实验表明,ATRA呈浓度依赖性促进巨噬细胞中IL-1β的表达,ATRA组中磷酸化（p）-NF-κB、NF-κB和caspase-1的表达较对照组升高（P<0.05）,且p-NF-κB发生了核转移。  结论  ATRA可能通过激活巨噬细胞中的NF-κB信号和caspase-1促进炎症因子IL-1β的表达。