变形链球菌临床株质子移位膜ATP酶γ亚基基因uncG遗传多态性及mRNA表达水平的研究

目的研究变形链球菌临床分离株质子移位膜ATP酶（F- ATPase）的γ亚基基因uncG的遗传多态性和mRNA表达水平。方法选取在不同龋敏感人群中分离的18株高耐酸和20株低耐酸变形链球菌为实验株,扩增uncG基因,行限制性内切酶长度多态性（RFLP）分析和测序比较,应用RT- PCR法和凝胶成像系统定量软件对20株不同基因型和不同耐酸力变形链球菌uncG基因的mRNA表达水平进行评价和比较。结果ALuⅠ- RFLP和BsrⅠ-RFLP产生A、B、C、D 4种基因型,但4种基因型在不同耐酸力菌株的分布差异没有统计学意义（P>0.05）。不同基因型及不同耐酸力菌株uncG的mRNA表达水平不同,但其差异也没有统计学意义（P>0.05）。结论变形链球菌F- ATPase γ亚基基因uncG的RFLP基因型和mRNA表达水平具有明显遗传异质性,但对菌株耐酸力没有明显影响。     

变形链球菌表面蛋白V区、P区及C末端遗传多态性与龋病发生关系的研究

目的了解变形链球菌表面蛋白V区、P区及C末端遗传多态性与其粘附性能的关系。方法实验菌株选自本实验室前期工作所获得的粘附力较强和较弱的血清C型变形链球菌临床分离株，提取全菌DNA，经PCR分别扩增表面蛋白V区、P区编码基因spaP—pv(2060～3157bp)、C末端编码基因spaP-c(4003～4851bp)后，用限制性内切酶Alu I进行限制性片段长度多态性分析。结果两组不同粘附力的变形链球菌(血清C型)临床分离株全菌DNA扩增产物spaP—pv经Alu I酶切后，出现了两种基因型a、b。两种基因型在不同粘附力菌株的分布不同(P＜0．05)，a型在低粘附力菌株中的比例高于高粘附力菌株，而b型在高粘附力菌株中的比例高于低粘附力菌株。spaP—C经Alu I酶切后，共呈现两种基因型C、d。d型在高、低粘附力的菌株中各占1例，其分布无统计学差异。结论spaP—pv基因出现变异可能是变链菌临床分离株粘附功能出现差异的原因之一。     

行腹腔镜手术中二氧化碳气腹的管理

建立良好的二氧化碳气腹是腹腔镜手术顺利完成的关键。该文通过临床实践从气腹针穿刺、掌握二氧化碳注气流量、控制良好的气腹压力及气腹对呼吸系统、循环系统的影响，阐述了腹腔镜术中气腹的管理。     

尼古丁通过调控Toll样受体4抑制牙周膜干细胞的成骨分化能力

目的 探讨尼古丁对牙周膜干细胞（PDLSCs）增殖和成骨分化能力的调控作用,检测尼古丁能否通过调控Toll样受体4（TLR4）抑制PDLSCs的增殖及成骨分化能力。方法 培养PDLSCs,采用流式细胞仪检测PDLSCs表面抗原标志,WST-1试剂盒检测不同浓度尼古丁刺激后PDLSCs增殖能力的改变。采用茜素红染色观察PDLSCs经不同浓度尼古丁刺激和成骨诱导后的矿化结节生产情况。运用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测经尼古丁刺激后,PDLSCs成骨能力相关基因和蛋白的改变,以及尼古丁联合TLR4抑制剂TAK-242刺激后,PDLSCs成骨能力相关基因及蛋白的改变。结果 培养的细胞表达间充质干细胞表面标志物CD90和CD105,证实为PDLSCs。与对照组相比,培养3 d后,尼古丁浓度为10^-4 mol·L^-1的PDLSCs的增殖能力受到明显抑制（P<0.05）;成骨诱导21 d后,10^-4 mol·L^-1尼古丁刺激组茜素红染色矿化结节明显减少。RT-PCR反应及Western blot显示：与对照组相比,尼古丁刺激组PDLSCs的碱性磷酸酶、骨钙素、Runt相关转录因子2的基因及蛋白表达量均降低（P<0.05）,加入TLR4抑制剂TAK-242后,尼古丁的抑制效应减弱。结论 尼古丁可能通过TLR4信号通路抑制PDLSCs的增殖及成骨分化能力。     

涎腺腺样囊性癌患者口腔微生物多样性研究

目的 探讨涎腺腺样囊性癌（SACC）患者口腔微生物的多样性和群落差异。方法 采集13例SACC患者与10例健康人的唾液样本,提取其口腔菌群的总DNA,经通用引物扩增16s rRNA基因,利用高通量测序平台进行细菌16S rRNA基因（V3-V4）区高通量测序分析后,利用Mothur软件分析微生物的多样性和群落结构。结果 SACC组优势种群有16种（相对丰度>1%）,依次是:链球菌属（36.68%）,奈瑟菌属（8.55%),普雷沃菌属_7（7.53%）,韦荣球菌属（6.37%）等。对照组优势种群有15种,依次有:链球菌属（18.41%）,奈瑟菌属（18.20%）,普雷沃菌属_7（8.89%）,卟啉单胞菌属（6.20%）,梭杆菌属（5.86%）,韦荣球菌属（5.82%）等。2组间有统计学差异的菌门包括厚壁菌门、变形菌门、梭杆菌门（P<0.05）。有统计学差异的菌属包括链球菌属、奈瑟菌属和卟啉单胞菌属（P<0.05）,而嗜二氧化碳噬细胞菌属仅在SACC患者中检出。结论 SACC患者的唾液微生物与健康人群唾液微生物的种群结构存在明显差异。     

骨髓间充质干细胞Fas／FasL介导的免疫调节在结肠炎治疗中的作用北大核心CSCD

目的探索卵巢摘除术(OVX)所致骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)与假手术组(sham)BMSC治疗结肠炎效果差异,明确Fas/FasL表达水平改变情况及其下游T淋巴细胞趋化及凋亡程度的差异。方法建立实验性结肠炎模型,OVX小鼠骨质疏松及假手术模型,对比注射OVX组与sham组小鼠BMSC治疗结肠炎的效果,检测2组BMSC对T淋巴细胞趋化及凋亡的差异,采用RT-PCR和Western blot法对BMSC的凋亡相关基因Fas/FasL的表达进行对比。结果注射雌激素缺乏所致骨质疏松小鼠的BMSC与注射假手术组的BMSC相比,表达Fas/FasL降低,从而使T淋巴细胞趋化及凋亡能力减弱,导致用OVX-BMSC治疗结肠炎效果较差。结论 OVX-BMSC通过降低自身Fas/FasL表达减弱肠炎小鼠T淋巴细胞的趋化和凋亡。     

变形链球菌表面蛋白遗传多态性与龋病发生关系的研究Ⅱ表面蛋白V区、P区编码基因序列的测定

目的 :对不同粘附力变形链球菌临床分离株表面蛋白V区、P区编码基因进行序列测定。方法 :实验菌株选自本实验室前期工作所获得的spaP pv经AluI酶切后呈不同基因型的不同粘附力血清c型变形链球菌临床分离株。提取全菌DNA ,经PCR扩增表面蛋白V区、P区编码基因spaP pv( 2 0 60～ 3 15 7bp)后 ,进行序列测定。结果 :不同粘附力变链菌临床株spaP pv经AluI酶切后呈a、b 2种基因型的菌株测出的spaP pv序列均有 7个AluI酶切位点 5′ AG↓CT 3′。 10株a型菌株序列除了几个碱基点突变外均相同 ,9株b型菌株序列亦如此。a型有 2个DNA片段与b型不同 ,经分析 ,这 2个变异片段均位于V区。结论 :变链菌临床株表面蛋白粘附性能的差异可能是编码基因可变区域V区出现变异所致     

变形链球菌基因转化相关DNA片段的初步研究

目的 :研究与变链菌基因转化相关的cslA基因在临床分离株中的检出情况。方法 :实验菌株源自前期工作所获得的不同黏附力及合成IG能力的变链菌临床分离株 ,提取全菌DNA并鉴定浓度和纯度 ,PCR扩增cslA基因 ,10g/L琼脂糖电泳观察结果。结果 :6 6株变链菌临床分离株中有 5 2株扩增出cslA基因 ,检出率为 79%。cslA基因的检出率在不同黏附力及合成IG能力的菌株间无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :cslA基因在变链菌临床分离株中的分布较广泛 ;尚不能认为cslA基因在毒力不同的菌株间的分布不同。     

五类市售饮料的酸蚀性研究

目的:通过对碳酸类、果汁类、普通牛奶类、高钙奶类和瓶装矿泉水类等五类市售饮料的pH值、缓冲能力、钙、磷、氟离子等相关因素的测定,预测它们对牙齿的酸蚀能力。方法:选取15种市售饮料,采用精密酸度计测定饮料的pH值,用滴定法测定缓冲能力,用比色法测定钙、磷离子浓度,用电极法测定氟离子浓度。结果:果汁类、普通牛奶类、高钙奶类和瓶装矿泉水类的pH值分别是2.51～2.29、3.24～3.37、6.38～6.64、6.55～6.68和6.49～7.12;缓冲能力分别是1.15～3.15mmol/L(pH5.5)和3.85～5.15mmol/L(pH7.0)、2.10～2.45mmol/L(pH5.5)和2.95～3.15mmol/L(pH7.0)、0.45～0.65mmol/L(pH7.0)、0.35～0.60mmol/L(pH7.0)及<0.10mmol/L(pH10);钙离子浓度分别是0.44～1.61mmol/L、0.17～0.37mmol/L、2.49～3.14mmol/L、2.96～3.31mmol/L和0.01～0.35mmol/L;磷离子浓度分别是0.02～0.61mmol/L、0.53～0.84mmol/L、0.90～1.30mmol/L、0.86～1.34mmol/L和0.01～0.38mmol/L;氟离子浓度分别是0.03～0.05mg/L、0.08～0.12mg/L、0.03～0.05mg/L、0.04～0.05mg/L和0.02～0.06mg/L。碳酸类及果汁类饮料的pH值远低于釉质脱矿临界值5.5,缓冲能力较弱,钙、磷、氟离子的浓度较低。牛奶pH值趋近于中性,缓冲能力强,而且其中含有大量的钙、磷、氟离子。矿泉水pH值为中性,含有一定量的矿物质。结论:酸性饮料的酸蚀性最强,矿泉水次之,牛奶的酸蚀性最弱。     

三维培养牙髓间充质细胞外泌体微小RNA表达谱分析

目的分析并比较二维(2D)与三维(3D)培养条件下人牙髓间充质细胞(DPSCs)外泌体(Exo)微小RNA (miRNA)的表达谱。方法2D与3D条件下分别培养DPSCs,提取细胞Exo,采用透射电子显微镜、蛋白质免疫印迹及纳米颗粒追踪分析等方法观察并鉴定;通过高通量测序筛选差异表达miRNA,采用Dr.Tom系统及TargetScan网站进行生物信息学分析及组织再生修复相关靶基因预测。结果 3D培养下收集的DPSC-Exo均呈现"茶托样"双层膜结构,CD63和CD9表达阳性,粒径分布符合外泌体特征,与2D培养的DPSC-Exo一致。高通量测序共计检测外泌体来源miRNA 253个,其中3D组表达222个,特有表达99个;与2D组相比,表达显著差异60个[︱log₂(3D/2D)︱≥1,Qvalue≤0.001]。差异miRNA主要参与的生物学过程与分子功能分别为细胞过程和结合;京都基因与基因组数据库(KEGG)通路富集分析显示在代谢通路有显著富集。miR-302的候选靶基因有成纤维细胞生长因子(FGF) 19和表皮生长因子受体等;miR-24-3p可能靶向神经元...