hPAK4基因重组质粒的构建及蛋白表达

 目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western
      blot检测,同时进行GST-pulldown实验。结果hPAK4全长基因序列克隆到真核表达载体pEBG中,酶切鉴定片段为1800bp。Westernblot检测到融合蛋白GST-hPAK4的表达,分子量约为94kDa,融合蛋白能够被Glutathione
      Sepharose4B沉淀。结论成功构建了hPAK4全长基因真核表达载体,同时鉴定了GST-hPAK4融合蛋白的表达,并且能够被Glutathione
      Sepharose4B沉淀。     

小波变换在事件诱发脑磁图分析中的应用

目的:验证基于Morlet小波变换的时频分析方法在事件诱发脑磁图中的应用效果。方法:根据Morlet小波变换的数学原理及特点,对脑磁图数据进行时频分解,采用时频能量分布图和锁相因子分布图表示脑磁图信号。结果:从脑磁图数据中有效提取了锁相和非锁相的能量变化信息。结论:Morlet小波变换的时频分析方法能够适应脑磁图信号是时变非平稳信号的特点,从中提取出感兴趣的信息。     

冠心病患者血清超敏C-反应蛋白检测的分析

目的：探讨超敏C-反应蛋白（high sensitive C-reactive protein,hs-CRP）与冠心病（coronary heart disease,CHD）的关系。方法：选沈阳医学院奉天医院CHD患者76例为病例组[稳定型心绞痛（stable angina pectoris,SAP）25例,不稳定型心绞痛（unstable angina pectoris,UAP）4l例,急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）10例]和50例健康体检者为对照组,分别以免疫比浊法测定其hs-CRP值,并统计分析。结果：CHD组hs-CRP值均明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。UAP组和AMI组hs-CRP值均高于SAP组,而AMI组hs-CRP值又高于UAP组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：CHD患者依病情发展情况的不同,hs-CRP的增高程度亦不同,提示hs-CRP与CHD患者病情发展存在密切的关系,可为CHD患者诊断及疗效观察提供参考依据。     

人Elf5基因真核表达质粒的构建及其亚细胞定位

目的：构建人Elf5真核细胞表达质粒,并研究其在乳腺癌MCF7细胞中的亚细胞定位。方法：PCR扩增人Elf5基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1中,构建含人Elf5基因的真核表达质粒pEGFP-hElf5。利用酶切鉴定,DNA测序,免疫印迹及免疫荧光方法鉴定Elf5真核表达质粒及Elf5蛋白的亚细胞定位。结果：经酶切鉴定、DNA测序、免疫印迹方法确认Elf5基因成功导入真核表达载体pEGFP-C1。瞬时转染MCF7细胞,Elf5蛋白表达在细胞核中。结论：pEGFP-Elf5真核表达质粒构建成功,Elf5定位在细胞核中。     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及机制研究

目的:研究氯化两面针碱在体外诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用与机制。方法:通过MTT法测定氯化两面针碱细胞毒作用,通过酶解可见光底物DEVD-pNp法测Caspase-3的活性;免疫组化技术研究氯化两面针碱对SMMC-7721细胞中p53、bax和bcl-2三种细胞凋亡相关蛋白表达的影响,透射电镜观察细胞的超微结构。结果:氯化两面针碱作用SMMC-7721细胞48h后的IC50值为3.8μg/ml;药物处理后的细胞中p53、Bax蛋白水平表达显著增强,Bcl-2蛋白水平表达减弱,与对照组比较,差异有统计学意义,典型的凋亡形态学特征表现出细胞核裂解、染色质聚集、细胞膜皱缩、有空泡形成,出现凋亡小体。结论:氯化两面针碱对SMMC-7721细胞有明显抑制作用,其机理可能与恢复p53的功能,激活Caspase-3的活性,Bcl-2/Bax的表达进行性下调,诱导细胞凋亡有关。     

Annexin V-FITC／PI法检测脂多糖诱导滋养细胞的凋亡

目的：通过流式细胞术测定法检测脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对滋养细胞凋亡的影响，明确LPS与滋养细胞凋亡的关系，为预防和治疗由滋养细胞凋亡导致的病理妊娠提供新的思路。方法：利用流式细胞仪Annexin V-FITC／H法检测不同浓度的LPS处理培养的JEG0细胞系滋养细胞的凋亡率分析。结果：流式细胞检测结果显示LPS组凋亡指数分别为（2．05±0．33）％、（7．43±0．68）％、（13．43±0．90）％显著高于对照组（0．80±0．15）％，且P均〈0．01。结论：Annexin V-FITC／PI法能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞、继发性坏死的细胞；LPS能够诱导滋养细胞过度凋亡，且凋亡率随着LPS浓度的增加而增加。     

基于MRI和CT图像配准的颅内电极定位方法

目的应用多模医学图像配准,在颅内电极埋置术后对颅内电极进行精确定位。方法通过对颅内电极埋置前的头颅MRI图像和埋置后头颅CT图像进行配准,利用医学影像配准与分割工具包(ITK),将颅内电极位置准确地定位在MRI图像上,以建立电极位置与大脑解剖结构的联系。结果经过对10组断层图像进行配准定位,差值图像显示匹配程度较好,专家目测融合效果较为精确。在普通PC机上,以笔者所采用的数据为例,设定优化器初始步长为1,松弛因子为0.6,最小步长为0.000 2,最大迭代次数为100,整个电极定位的操作过程时间不超过1 min。结论多模医学图像配准对颅内电极定位较为准确,为医生提供了更加直观和完善的信息。     

氯化两面针碱对肝癌细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的探讨氯化两面针碱（NC）对体外培养的肝癌SMMC-7721细胞（以下简称肝癌细胞）DNA聚合酶6催化亚基基因P125蛋白的影响。方法取对数生长期的SMMC-7721肝癌细胞分为给药组和对照组,给药组分别予0．15、0．30、0．60mg／L的NC作用10d。采用集落形成试验观察SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;Westernblot法检测P125蛋白表达。结果与对照组相比,给药组NC作用后肝癌细胞集落形成数量明显减少（P〈0．05）,并呈现剂量依赖性。给药组P125蛋白表达明显降低,呈剂量依赖性。结论NC可明显抑制肝癌细胞增殖,其作用机制之一可能是从蛋白水平抑制P125表达。     

慢性肾脏病合并心血管疾病患者血液透析治疗对微炎症因子及血管钙化的影响

目的 研究血液透析治疗对慢性肾脏病合并心血管疾病患者微炎症因子及血管钙化的影响.方法 选取广东医科大学附属第三医院肾内科2018年2月至2020年2月期间收治的60例维持性血液透析合并心血管疾病患者作为观察组,另选取60例未合并心血管疾病的同期维持性血液透析患者作为对照组.记录并比较两组患者的白细胞、血色素、体质量指数...