系统性红斑狼疮患者血清抗核糖体P蛋白抗体的检测及其临床意义

目的: 观察抗核糖体P蛋白抗体(抗P蛋白抗体)在系统性红斑狼疮 (SLE)患者中的阳性率及其意义。方法:以含有核糖体磷酸蛋白P0、P1、P2全序列的合成蛋白作为抗原, 采用欧盟斑点法(EUROblot), 测定 150份SLE患者血清抗核糖体P蛋白抗体的阳性率, 并分析其与其他自身抗体(抗dsDNA抗体、抗Sm抗体和抗RNP抗体等), 以及患者的临床特征的相关性。结果: 150份患者血清中, 有 36例(24% )抗P蛋白抗体呈阳性。抗P蛋白抗体阳性组肾脏损害、中枢神经系统损害的发生率显著高于阴性组, 而与皮肤、关节、血液及肝脏的损害无关, 也与病情活动指数 (DAI)不相关。抗P蛋白抗体的阳性率与抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及抗RNP抗体的阳性率相关。结论: SLE患者抗P蛋白抗体的阳性率高于欧美人群(13% )。该抗体与SLE患者的肾脏及中枢神经损害具有相关性。     

模拟鼠伤寒脂多糖表位合成肽的初步研究

目的 探讨3种模拟LPS表位的合成肽的抗原性。方法固相合成模拟LPS表位的线性十二肽P12(GPPQW-FFSQPQL)、环七肽13a(SACPSWASFWCGG)和13b(SACFQFTYPAACGG),与钥孔嘁血蓝蛋白或蓝载体交联,ELISA鉴定合成肽-载体交联物与抗LPS抗体的反应性,竞争ELISA鉴定游离的合成肽对抗LPS抗体与LPS、表达LPS模拟位的阳性噬菌体克隆结合的抑制。结果合成肽-载体交联物可与LPS抗体结合;游离环七肽13a可抑制抗LPS单克隆抗体与LPS结合(IC50=125μg／mL)及抗LPS单克隆抗体与阳性噬菌体克隆K1的结合(IC50=15．6μg/mL);游离十二肽P12抑制抗LPS单克隆抗体与LPS结合(IC50=550μg/mL)及阳性噬菌体克隆P12与抗LPS单克隆抗体结合(IC50=375μg／mL);游离环七肽13b可抑制噬菌体克隆P4和LPS多克隆抗体的结合(IC50=31．25μg／mL)。结论模拟LPS表位的合成肽可模拟LPS表位的抗原性,环肽优于线性肽。     

抗隐孢子虫子孢子ScFv-PE40免疫毒素表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

用PCR方法扩增抗隐孢子虫子孢子ScFv片段,插入表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28-ScFv,然后,将绿脓杆菌外毒素(PE40)片段定向克隆到ScFv基因的下游,构建免疫毒素表达质粒pET28ScFv-PE40。经酶切分析、PCR检测和测序进行鉴定。成功地构建了免疫毒素表达质粒pET28ScFv-PE40。将上述质粒转化受体菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,成功地表达了目的蛋白。免疫毒素ScFv-PE40大小约为66kDa,表达量约占菌体蛋白总量的14%。     

人类基因图谱的发展现状及应用

人类基因组有大约5万-10万个基因，5年前开始的人类基因组计划中已全面展开这些基因的研究工作。预计2005年得到其全部DNA序列。为了把这一庞大的信息源变为直接可用的科学资料，目前广泛采用了基因作图的方式。迄今建立的基因图谱大致有3类，物理图谱、遗传图谱、转录图谱。综合3类图谱的信息已经构成较为完整的人类基因图谱。物理图谱物理图谱是根据DNA序列上碱基位置来确定基因的位置，是确定基因的顺序和间隔的最基本工作。最初的物理图谱构建用了2种方法，一种是限制性酶谱作图（restrictionmap）[1]，即用合适的限制性内切酶的酶切…     

六味地黄药物血清对血管内皮细胞凋亡模型的保护作用

目的研究六味地黄方药物血清对血管内皮细胞(VEC)损伤模型的保护作用。方法利用30 %过氧化氢 (H2O2)和大肠杆菌内毒素(LPS)致VEC凋亡模型 ,观察了药物血清对凋亡模型VEC的保护作用,并通过细胞内Ca2 的变化 ,探讨其作用机理。结果六味地黄汤药物血清可减轻H2O2和LPS对VEC的损伤 ,抑制VEC凋亡发生 ,并可明显缓解LPS所致的胞内钙超载。结论六味地黄汤具有保护VEC凋亡模型的作用 ,这种作用与其缓解细胞内钙超载有关     

IL-10与疾病关系的研究进展

IL-10是一种重要的抗炎细胞因子,对多种免疫细胞功能均有抑制作用.这种细胞因子的特殊生理意义在于防止和抑制强大的特异和非特异性免疫反应和由此导致的组织损伤,同时IL-10可增强“清道夫”功能,并有助于诱导免疫耐受.IL-10的这些作用与疾病的发生有密切的联系,因此研究其分子机制和生物学特征对IL-10相关性疾病的免疫...     

HER2阳性乳腺癌新辅助治疗疗效临床病理学分析

目的探讨与HER2阳性乳腺癌新辅助治疗疗效相关的临床病理学特征。方法收集复旦大学附属肿瘤医院病理科2015—2020年诊断的接受新辅助治疗的HER2阳性乳腺癌480例, 分析临床病理参数如年龄、肿瘤大小、分子分型、靶向治疗类型、Ki-67阳性指数、雌激素受体(ER)表达水平、HER2免疫组织化学表达水平及HER2扩增情况等与患者新辅助治疗疗效的相关性。结果 480例HER2阳性乳腺癌患者中209例在新辅助治疗后达到病理完全缓解(pathology complete response, pCR), pCR率达43.5%。所有病例中457例患者接受化疗加单靶(曲妥珠单抗)治疗, 23例患者接受化疗加双靶(曲妥珠单抗+帕妥珠单抗)治疗。化疗加单靶治疗中198例(43.3%)获得pCR, 而化疗加双靶治疗中11例(47.8%)达到pCR。后者的pCR率相对较高, 但两者差异无统计学意义。结果显示免疫组织化学HER2 3+(49.0%)患者的pCR率显著高于HER2 2+患者(26.1%, P<0.001)。荧光原位杂交(FISH)检测中HER2平均拷贝数越高, pCR率也越高。ER的表达...     

在光纤芯片上进行高速个体化全基因组测序

新近发展的在光纤芯片上做高通量测序的技术，可以将人类全基因组序列的测定时间由目前所用的10年时间缩短到100d。光纤芯片上的基因组测序结合了磁珠、乳液PCR和焦磷酸测序法等技术，利用光纤优良的表面性质和有效的加工工艺，将光纤制作成一种基因芯片。在芯片上用磁珠来耦联DNA、RNA等微量反应物。乳液PCR可以获得大量的不同的基因组DNA片段。乳液PCR和光纤芯片都是由于有了磁珠作为微量反应物的载体，从而可以将反应一再小型化。而这些技术的结合，工作效率是目前常规的测序方法的100多倍。成功实现了基因组测序反应小型化、高通量化的思想，大大降低了成本，减少了完成全基因组测序的时间。     

中性粒细胞增强类风湿关节炎滑膜细胞产生基质金属蛋白酶及其细胞侵袭力

目的：研究中性粒细胞表面CD147分子对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）产生基质金属蛋白酶（MMP）及细胞侵袭力的作用。方法：取自关节镜或骨科手术治疗的RA、骨关节炎（OA）患者的滑膜组织，体外分离培养FLS，通过流式细胞术（FCM）检测细胞表面分子及形态学方法鉴定。采用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL-60细胞（人早幼粒白血病细胞株）诱导中性粒细胞分化，并用硝基蓝四氮唑（NBT）还原反应测定其分化程度。进而以FCM测定分化前后的HL-60细胞及FLS表面CD147的表达，并通过明胶酶谱和重组基质侵袭实验检测分化前后HL-60细胞对FLS MMP表达和细胞侵袭能力的作用以及CD147拮抗肽（AP-9）对这种MMP表达和细胞侵袭能力的抑制作用。结果：成功建立了FLS分离培养和HL-60细胞分化的实验体系。培养的FLS具有典型成纤维细胞的形态，均一的高度表达CD90（〉98％）而不表达CD14。分化后的HL-60细胞CD147表达上调，RAFLS细胞CD147表达水平低于分化前及分化后HL-60细胞（P〈0．05）。明胶酶谱试验显示：①与OAFLS相比，单培养的RAFLS表达较高水平的酶原及活化形式的MMP-2（P〈0．05）；②分化前／后的HL-60细胞分别与FLS共培养，酶原及活化形式的MMP-2和MMP-9的表达水平较这些细胞单独培养均显著升高（P〈0．05），且分化后的HL-60细胞与FLS共培养酶原及活化形式MMP-2表达水平较分化前HL-60细胞与FLS共培养明显升高（P〈0．05）；③AP-9显著抑制两共培养组中MMP-2和MMP-9的上调作用（P〈0．05）。侵袭实验显示：RAFLS侵袭能力高于OA FLS（P〈0．05）；分化前后的HL-60均可增加RAFLS的侵袭能力（P〈0．05），且分化后强于分化前（P〈0．05）；AP-9可抑制这一促进作用，降低FLS的侵袭能力（P〈0．05）。结论：中性粒细胞可能通过CD147促进RA患者滑膜FLS MMP-2、MMP-9的表达和活化，增强FLS的侵袭能力，这种促进作用可被CD147拈抗肽所抑制，将为RA关节软骨和骨损伤机制和治疗的进一步研究提供了重要的线索。     

类风湿关节炎患者Th17和CD161+Th17细胞水平的变化

目的 观察类风湿关节炎(RA)患者和健康对照组外周血中CD4+ IL-17+T细胞(Th17)和CD4+ CD161+ IL-17+T细胞(CD161+Th17)的水平,探讨其在RA发病过程中的意义.方法 采用流式细胞术测定36例RA患者和11例健康对照组外周血中Th17细胞及CD161+ Th17的细胞百分率.结果 RA患者外周血Th17及CD161+ Th17细胞水平明显高于健康对照组(P＜0.01)且与疾病活动指数(DAS28)、血沉和C-反应蛋白水平呈显著正相关(P ＜0.05);RA患者和健康对照组外周血中CD161+ Th17细胞百分率明显高于Th17细胞百分率(P＜0.01);Th17细胞百分率与CD161+ Th17细胞百分率显著正相关(P＜0.01).结论 Th17及CD161+ Th17细胞在RA患者外周血中均增高且与疾病活动度正相关.