hNIS/TK基因共转染介导131I/GCV对肝癌细胞株的毒性作用

背景与目的:与传统的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)/丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)肿瘤自杀系统相比,人钠/碘同向转运体(human sodium-iodide symporter,hNIS)是近年来发现的新型治疗基因.然而,两者的疗效尚需进一步提高.本研究旨在探索hNIS介导的放射性核素体系与HSV-TK/GCV自杀基因体系对肝癌细胞的联合毒性作用.方法:构建EF1-a启动子调控下的hNIS的表达载体与CMV启动子调控下的GFP和HSV-TK共表达载体,慢病毒包装后转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察重组肿瘤细胞HepG2/NTG荧光蛋白的表达;采用RT-PCR技术进一步检测目的基因hNIS和HSV-TK的表达情况;MTT检测GCV对HepG2/NTG的杀伤作用;摄碘试验及流出试验评价HepG2/NTG对碘的摄取及滞留情况;最后通过克隆形成实验评价GCV和131I对HepG2/NTG的单独及联合杀伤作用.结果:RT-PCR技术、荧光显像证实hNIS、GFP和HSV-TK基因在肝癌细胞中成功表达;与对照组相比,HepG2/NTG的摄碘高出76倍,20 min摄碘率最高,其后表现出碘外流,有效半衰期不到10 min,同时这种碘摄取能被NaClO4特异性抑制.GCV或131I对HepG2/NTG的毒性作用呈现剂量依赖性:50μg/mL GCV作用72 h后,实验组细胞的存活率仅为(33.98±2.71)%;放射性浓度为7.4MBq/mL的131I处理7 h后,细胞的存活率仅为(41.17±0.72)%;GCV和131I联合作用后,细胞的存活率仅为(8.55±1.22)%,较单一药物作用细胞存活率下降了6倍.结论:131I/GCV对重组肝癌细胞产生显著的毒性作用,提示慢病毒介导hNIS/TK基因共转染介导肿瘤的放射化学治疗是可行的.     

科研评价政策导向与医学期刊的发展

科技期刊的核心竞争力在于稿件质量,但目前大部分科技期刊都面临着稿源数量与质量未能同步上升的困境。本文分析了科技期刊存在的几种稿源困境,如投稿数量多,可用稿件少;自投稿件多,组稿策划少;约稿稿件未能达到发表要求,重复投稿多等问题,并针对这些问题,提出了明确期刊定位、优化栏目设置、优化编辑流程、集中编辑精力、严把审稿关确保稿件质量、精心策划热点选题拓展组稿渠道、培育核心作者群等组稿优化策略。     

医学教育中的科学精神与人文精神

从历史上的自由主义与保守主义两种思潮看教育,自由主义较强,保守主义较弱,要正确认识中国高等教育发展的适度保守主义。从科学精神看医学,现代医学科学的发展呈现综合整体化趋势,应加强与其他各学科的相互联结。从人文精神看医学,医学人文精神与医学科学精神发展失衡,必须加强医学人文精神教育。医学教育要实现科学精神与人文精神的统一,要树立医学教育中科学精神与人文教育相统一的正确观念,探索实施“医学+人文”和“人文+医学”的双重教学模式,建立健全医学科学精神和医学人文精神融合的机制。     

四川省三州地区助产机构产科用血现况分析

目的 探索四川省三州地区助产机构产科用血的空间可及性。方法 采用空间分析法,利用地区机构活产数、设有输血科和常规备血的机构占比、机构到供血点往返驾车时长和供血半径作为评价指标,分别从供应与需求角度对三州地区产科用血的现况和可及性进行分析。结果 三州地区产妇分布不均且较为分散;助产机构设置输血科和进行常规备血的比例低,占比分别为59.3%和29.1%;供血点仅有5家且空间分布不合理,供血点平均供血半径为131公里,助产机构往返供血点的平均驾车时长为5.6 h,助产机构产科用血的空间可及性较差。结论 为有效保障母婴安全建议四川省三州地区根据其服务人口的分布特点加设储血点。     

2016年社区卫生服务中心科研能力排行榜

目的　利用社区卫生服务中心科研能力综合评价体系,得出2016年我国社区卫生服务中心科研能力排行榜。方法　2015年12月—2016年3月,通过各级社区卫生协会向全国各社区卫生服务中心发放电子调查问卷,利用前期构建的社区卫生服务中心科研能力综合评价体系从科研投入、科研产出、科研管理3个方面对全国社区卫生服务中心的科研能力进行排序。结果　本研究得出2016年社区卫生服务中心科研能力前30名排行榜,分布在上海20家、北京6家,以及东莞、深圳、杭州、宁波、成都各1家。结论　本研究为社区卫生服务中心科研能力的综合评价提供了客观、合理的评价体系,并对社区科研能力的提升有一定的引导性作用。     

2018年社区卫生服务中心科研能力排行榜及展望

目的　利用前期构建的社区卫生服务中心科研能力综合评价体系,在实践及专家重新论证修改的基础上,制定2018年我国社区卫生服务中心科研能力排行榜,以反映近年社区科研的发展概况。方法　2017年12月—2018年3月,通过各级卫生健康委员会和基层/社区卫生协会,以自愿参加及地方卫生健康委员会推荐相结合的模式,向全国27个省份500家社区卫生服务中心发放电子调查问卷。利用评价体系从科研投入、科研产出、科研管理3个方面,得到全国社区卫生服务中心的科研能力排序。结果　本研究制定2018年社区卫生服务中心科研能力TOP 30,分布在上海21家、北京6家,杭州、东莞、厦门、重庆各1家。与2016年比较,近年社区科研能力大部分指标最大值、均值有一定幅度的提升,进步最大的3家社区卫生服务中心分别是上海市浦东新区六灶社区卫生服务中心、浙江省杭州市江干区凯旋街道社区卫生服务中心、上海市嘉定区马陆镇社区卫生服务中心。结论　我国社区卫生服务中心科研能力近年来不断提升且发展潜力巨大,社区卫生服务中心科研能力综合评价体系也在实践中不断得到论证完善,具备了更高的科学性和更强的指导意义。     

上颌舌尖咬合总义齿用于下颌齿槽嵴过低病例

自1990年来,笔者采用后牙舌尖咬合对7名无牙颌疑难病例进行义齿修复,取得了较满意的较果。 临床资料 1 一般情况:采用上颌舌尖咬合总义齿修复无牙颌患者7人,其中下颌牙槽骨严重吸收萎缩的4人,下颌呈刃状牙槽嵴的1人,有可移动牙槽嵴组织的2人。患者年龄64～78岁,平均年龄71岁。有可移动牙槽嵴组织的2人有总义齿修复史,其余人均未做过义齿修复。     

抗CD_3抗体(HIT3a)基因突变及其表达研究

目的　提高可溶性抗CD3 scFv片段的表达量 ,并测定其生物学活性。方法　用PCR法致抗CD3 scFv基因突变 ;用DNA限制性酶切指纹图谱以及Westernblot法筛选突变克隆 ;用间接免疫荧光法测定抗体的特异性结合活性 ;用12 5I标记抗体 ,进行竞争抑制试验 ;采用51Cr释放试验 ,进行抗CD3scFv片段介导的T淋巴细胞细胞毒性测定。结果　DNA序列测定结果表明 ,抗CD3 scFv抗体突变克隆菌株m2为重链第六位氨基酸突变 ,即E(GAG)→Q(CAG)。突变后的可溶性抗CD3 scFv片段表达量(1μg/ml)比突变前 (0 .0 1μg/ml)高 10 0倍。突变前、后的抗CD3 scFv片段与Jurkat细胞 (CD3 )的结合特异性未改变。m2能竞争性封闭亲代鼠源性抗体HIT3a与CD3 阳性的Jurkat细胞的结合位点。体外杀伤实验结果显示 ,由m2与IL 2共刺激产生的CD3 AK细胞的细胞毒活性比单用IL 2刺激产生的LAK细胞强。结论　通过对抗CD3 scFv抗体基因进行定点突变 ,实现了该抗体片段的高表达 ;m2能与CD3 的Jurkat细胞结合 ;也能激活人外周血中的T淋巴细胞产生CD3 AK细胞毒活性     

特异性启动子LEP503介导的自杀基因系统对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的构建晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)特异性启动子LEP503(lens epithelium gene product503)调控的Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP载体,观察慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙环鸟苷系统(herps simplex virus thymidine kinase/ganciclov-ir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的靶向性抑制作用。方法用RT-PCR方法从HLEC基因组中克隆LEP503启动子序列,构建单纯LEP503启动子调控HSV-tk基因表达的慢病毒载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP,同时构建广谱启动子巨细胞病毒(cytomegalo virus,CMV)调控的HSV-tk载体Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。将特异性表达载体Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC和Hela细胞,用荧光显微镜观察荧光强度,用RT-PCR方法评估相关蛋白的组织特异性表达。将Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP和Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP分别转入HLEC,通过荧光显微镜观察EGFP的表达,用流式细胞仪及RT-PCR比较CMV与LEP503启动子介导下游靶基因HSV-tk的表达差异。结果 Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP能在HLEC中特异性表达,但Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的表达效率明显低于Lenti-CMV-HSV-tk-EGFP。转染Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP的HLEC在20mg·L-1GCV作用48h后EGFP阳性细胞的形态发生明显变化;GCV作用24h后Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染HLEC较正常HLEC和Lenti-LEP503-HSV-tk-EGFP转染Hela细胞活性有明显抑制,且随时间的延长抑制效果逐渐增强。结论 LEP503启动子能介导HSV-tk基因在HLEC中特异表达,并介导HSV-tk/GCV自杀基因系统靶向性抑制HLEC增殖,但该启动子表达效率较低,所介导的HSV-tk/GCV系统对HLECs增殖的抑制效率低于CMV启动子。