新一代高通量技术在龋病相关的口腔菌群宏基因组学研究中的应用

龋病是人类最普遍的感染性疾病,针对龋病的病因学研究、风险评估乃至预防策略是目前研究的重点问题。本研究小组采用新一代高通量技术包括454 FLX Titanium测序、Solexa GA Ⅱ测序及Geochip 3.0功能基因芯片     

应用反求工程方法重建残冠和(或)残根的三维数字模型

目的 探讨用反求工程(RE)方法实现残冠和(或)残根数字模型三维重建的方法,为个体化桩核的CAD设计与制作奠定基础.方法 (1)选取牙体硬组织完整的离体牙10颗,按桩核预备标准预备后分别用螺旋CT机和Mi-CT机进行扫描,所获得数据以DICOM格式文件进行存储;(2)应用Mimics软件将螺旋CT机和Mi-CT机扫描获得的数据分别进行处理,获得牙齿标本的数字模型,Geomagic 9.0软件进行三维测量,同时生成STL格式文件:(3)用游标卡尺对牙齿标本进行测量,并与软件测量所获得的数据进行比较,采用配对比较t检验进行统计学分析.结果 (1)用反求工程方法对离体牙标本实现了三维重建,获得其数字模型.Mi-CT数据源三维数字模型较螺旋CT数据源三维数字模型而言,模型边缘轮廓更为锐利、清晰;(2)应用螺旋CT机和Mi-CT机扫描获得的数字模型,经软件测量,与牙齿标本测量结果相比均无统计学意义(P>0.05).结论 用反求工程方法能准确、快速地实现残冠和(或)残根模型的三维重建.     

碱性成纤维细胞生长因子和骨形成蛋白2在牙源性细胞分化中的表达及意义

目的研究人牙髓细胞(DPCs)和牙周韧带细胞(PDLCs)矿化过程中碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)和骨形成蛋白2(BMP2)的表达变化,以及FGF2和BMP2在牙髓牙周损伤修复动物模型中的分布,探讨FGF和BMP信号通路在DPCs和PDLCs向成牙本质/成骨样细胞分化及牙髓牙周组织损伤修复中的调控作用。方法酶消化法分离培养DPCs和PDLCs,取诱导前及矿化诱导14d的DPCs和PDLCs,实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测FGF2和BMP2的表达变化并进行统计学分析。建立大鼠牙髓牙周联合损伤动物模型,HE染色观察4周后牙髓牙本质复合体及牙周组织修复情况,免疫荧光检测FGF2和BMP2在新生牙髓及牙周组织的表达和分布。结果 DPCs和PDLCs经矿化诱导,FGF2mRNA表达下调,BMP2mRNA表达上调,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光示FGF2在新生的牙周韧带组织强表达,在新生牙髓及正常牙髓牙周组织弱表达,BMP2蛋白在损伤处的新生牙髓及牙周韧带组织细胞浆强表达,FGF2和BMP2在正常牙髓及牙周韧带组织均无表达。结论 FGF2和BMP2在DPCs和PDLCs体外成牙本质/成骨分化中可能具备独立的生物学功能,在体内牙齿损伤修复过程中可能存在协同调控作用。     

凝溶胶蛋白gelsolin对人牙髓细胞增殖及迁移的影响

目的研究凝溶胶蛋白gelsolin（GSN）对人牙髓细胞（hDPC）增殖及迁移的影响。 方法激光共聚焦检测gelsolin在hDPC中的表达。以小干扰RNA（siRNA）沉默hDPC中的gelsolin,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期;Transwell实验观察细胞的迁移情况。采用单因素方差分析数据。 结果激光共聚焦显示gelsolin普遍表达于hDPC胞浆。沉默gelsolin,hDPC的增殖率在24、48、72 h时分别下降47.8%（F= 6.182,P= 0.035）、48.9%（F= 5.520,P= 0.044）、64.1%（F= 15.440,P= 0.004）;流式结果显示干扰gelsolin,hDPC的凋亡率增加约4.5%（F= 21.162,P= 0.002）,而细胞周期未发生明显阻滞,S期细胞比例升高约5%（F= 4.526,P>0.05）,G1期细胞比例下降约8%（F= 4.743,P>0.05）;Transwell结果显示,24 h内hDPC的迁移能力降低约60%（F= 12.781,P<0.001）。 结论gelsolin对hDPC的增殖及迁移具有调控作用。     

饥饿状态下白色念珠菌差异表达基因的研究

目的探讨白色念珠菌饥饿状态的形成机制及差异表达基因。 方法将白色念珠菌（ATCC 10231）诱导进入厌氧饥饿状态,收集进入饥饿状态0、12、24和48 h的白色念珠菌,提取总RNA后采用全基因组表达谱芯片技术分析基因的差异表达。采用t检验对不同时间点的基因表达状况进行统计分析。 结果统计分析显示,白色念珠菌诱导进入饥饿状态过程中,14.45%~ 29.13%的基因表达发生改变（P<0.05）,涉及氨基酸代谢、糖代谢、脂类代谢、核酸代谢和细胞周期等多个通路。上述通路中丙氨酸合成通路、ATP合成基因SDH4、有丝分裂相关基因PRE1以及胞外基质分泌相关基因GCA1等表达降低,RAX2、VPS34等耐药相关基因表达升高。 结论白色念珠菌在诱导进入饥饿状态过程中涉及代谢和增殖水平的基因表达下降,对外界刺激和药物耐受相关基因表达上调,此类改变有助于保持白色念珠菌在饥饿状态的存活力和致病性。     

促红细胞生成素对人牙髓细胞迁移能力的作用

目的研究促红细胞生成素（EPO）对人牙髓细胞（hDPC）迁移能力的影响,并初步探讨相关分子机制。 方法实时荧光定量聚合链反应（PCR）检测EPO对hDPC表达趋化因子mRNA的影响;Transwell实验观察不同浓度的EPO对hDPC迁移能力的影响;Western blot检测不同时间点hDPC中p38、ERK1/2、JNK磷酸化水平的变化;细胞划痕实验观察丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路抑制剂对EPO诱导hDPC迁移的影响。 结果EPO上调趋化因子CXCR4、SDF-1 mRNA的表达（t_CXCR4= 5.727,P_CXCR4= 0.005;t_SDF-1= 3.412,P_SDF-1= 0.027）;与对照组相比,EPO显著促进hDPC的迁移能力（F= 207.775,P_{10 U/ml}= 0.000,P_{20 U/ml}= 0.000,P_{40 U/ml}= 0.000）;EPO可升高MAPK信号通路中关键蛋白ERK1/2（t_{15 min}= 6.554,P_{15 min}= 0.000;t_{30 min}= 17.305,P_{30 min}= 0.000;t_{60 min}= 8.913,P_{60 min}= 0.000;t_{120 min}=-5.896,P_{120 min}= 0.934）和p38的磷酸化程度（t_{15 min}= 4.396,P_{15 min}= 0.004;t_{30 min}= 6.447,P_{30 min}= 0.000;t_{60 min}= 34.676,P_{60 min}= 0.000;t_{120 min}= 4.689,P_{120 min}= 0.003）;MAPK信号通路抑制剂U0126、SB203580可抑制EPO诱导的hDPC迁移（t_EPO-U0126= 2.422,P_{EPO- U0126}= 0.025;t_EPO-SB203580= 3.837,P_EPO-SB203580= 0.001）。 结论EPO上调趋化因子CXCR4和SDF-1 mRNA的表达,通过激活MAPK信号通路,促进hDPC迁移。     

树脂化玻璃离子充填材料治疗老年根面龋临床疗效观察

目的：比较光固化复合树脂、玻璃离子水门汀和树脂化玻璃离子3种填充材料的临束效果。方法：对65岁以上270例老年人435颗牙随机分为三组，分别接受3种填充材料治疗，随访1～2年。结果：观察1年，光固化复合树脂、玻璃离子水门汀和树脂化玻璃离子充填的总有效率分别为75．00％、87．84％、94．84％；2年的总有效率分别为71．30％、80．70％、92．00％，统计学分析1年和2年的有效率，树脂化玻璃离子组优于玻璃离子水门汀组、玻璃离子水门汀组优于光固化复合树脂组，差异有显著性（P〈0．05）；树脂化玻璃离子组优于光固化复合树脂组，差异有显著性（P〈0．01）。结论：树脂化玻璃离子较光固化复合树脂和玻璃离子水门汀修复老年根面龋疗效好。     

根管消毒药物控释系统的制备及体外释放研究

研制了一种高分子材料为载体的根管消毒药物控释系统,并进行了体外控制释放研究,该系统能在10d时间内稳定释放消毒药物,具有应用前景。     

基质细胞衍生因子1α及其受体CXCR4在人牙髓细胞中的表达

目的 研究体外培养人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPC)上CXCR4的表达情况,检测大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激后HDPC培养上清液中基质细胞衍生因子1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)的表达水平,探讨人工重组SDF-1α(recombinant human SDF-1α,rhSDF-1α)对HDPC增殖及迁移的影响.方法 采用免疫细胞化学及间接免疫荧光技术检测HDPC上CXCR4的表达.用不同浓度LPS(0.1、1、10、100 mg/L)和TNF-α(1、10、100μg/L)刺激HDPC 48 h后,ELISA法检测HDPC培养上清液中SDF-1α含量的变化.同时甲基噻唑基四唑(MTT)法及体外趋化实验观察不同浓度rhSDF-1α对HDPC增殖及迁移的影响.结果 正常HDPC胞膜表达CXCR4且其培养上清液分泌SDF-1α,浓度约为(4513.55±962.92)ng/L.在用LPS和TNF-α刺激HDPC后,SDF-1α的表达水平均显著降低(P＜0.05).50、100和200μg/L的rhSDF-1α可促进HDPC的增殖(P＜0.05),50和100μg/L rhSDF-1α作用9 h可显著趋化HDPC的迁移(P＜0.01).结论 CXCR4在HDPC上表达且SDF-1α能促进HDPC的增殖及迁移;SDF-1-CXCR4轴可能在牙髓组织损伤修复中发挥重要作用.